Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil

ABSTRACT: Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine -Naphthylamide (PAN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5g/ml and 64g/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.

RESUMO: As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine -Naftilamida (PAN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5g/ml e 64g/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.

Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil / Detecção da bomba de efluxo CmeABC em cepas de Campylobacter spp. resistentes à enrofloxacina isoladas de frangos de corte (Gallus gallus domesticus) no Estado do Rio de Janeiro, Brasil

Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers' meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine ß-Naphthylamide (PAßN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5µg/ml and 64µg/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAßN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.(AU)

As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine ß-Naftilamida (PAßN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5µg/ml e 64µg/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAßN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.(AU)

Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil / Detecção da bomba de efluxo CmeABC em cepas de Campylobacter spp. resistentes à enrofloxacina isoladas de frangos de corte (Gallus gallus domesticus) no Estado do Rio de Janeiro, Brasil

Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers' meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine ß-Naphthylamide (PAßN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5µg/ml and 64µg/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAßN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.(AU)

As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine ß-Naftilamida (PAßN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5µg/ml e 64µg/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAßN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.(AU)

Abordagem da asfixia neonatal e infecção bacteriana em neonatos caninos: uso da troponina I e avaliação da sepse

O primeiro estudo teve como objetivo avaliar e comparar os níveis de troponina cardíaca I (cTnI) em cães recém-nascidos com asfixia e não asfixiados, correlacionando com a avaliação do escore Apgar modificado, saturação de oxigênio, glicemia, lactatemia e hemogasometria. O estudo visou determinar o possível uso da troponina I como marcador de lesão isquêmica do miocárdio e indicador de hipóxia perinatal grave em cães neonatos. Foram avaliados 15 animais no grupo parto eutócico (GE), 15 animais no grupo cesariana (GC) e 13 animais no grupo hipóxia (com asfixia) (GH). No GH os recém-nascidos exibiram acidose mista proeminente (p<0,05) (respiratória por aumento pCO2 e metabólica por redução do pH, HCO3, BEecf e aumento do lactato) em comparação ao GE e GC, em decorrência da hipoxemia grave. Os parâmetros no escore de Apgar e hemogasometria demonstraram que estes cães nasceram com asfixia, apresentando baixa vitalidade e necessidade de manobras reanimatórias. Os níveis de troponina I estavam dentro dos padrões de referência para cães hígidos nos grupos GE e GC. No GH os níveis de troponina I foram significativamente mais elevados do que o GE e GC (p<0,05) e estavam acima dos padrões de referência para cães hígidos. Conclui-se que a troponina I é um marcador de hipóxia e lesão miocárdica em cães neonatos. O objetivo do segundo estudo foi descrever a incidência de sepse em cães recém-nascidos, os aspectos clínicos envolvidos, os principais agentes bacterianos isolados e as taxas de mortalidade. Das 152 ninhadas e 762 neonatos avaliados, 14,8% (113/762) apresentaram sepse ou choque séptico, e a taxa de mortalidade entre os filhotes afetados foi de 25,6% (29/113). Diferenças significativas (p <0,0001) nos parâmetros clínicos (frequência cardíaca e respiratória, glicemia, temperatura corporal, saturação periférica de oxigênio e reflexos) foram observadas entre neonatos saudáveis e neonatos com sepse e choque séptico. Os principais e mais relevantes sinais clínicos foram: apatia, redução do reflexo de sucção, diarreia, tríade neonatal, insuficiência de ganho de peso, bradicardia, dispneia, mucosas cianóticas, eritema corporal, redução da saturação periférica de oxigênio, cianose e necrose dos tecidos das extremidades. A mãe pode ter sido a principal fonte de infecção para 87,6% (99/113) dos neonatos com sepse. O agente bacteriano mais isolado foi a Escherichia coli, responsável por 25,6% (29/113) dos casos de sepse. A morbidade e mortalidade da sepse neonatal em cães são altas. A avaliação clínica e o diagnóstico de sepse em neonatos diferem daqueles em animais adultos. Assim, o conhecimento das particularidades neonatais da sepse é essencial para o manejo clínico adequado e maior sobrevida desses pacientes.

The first study aimed to evaluate and compare the levels of cardiac troponin I (cTnI) in asphyxiated and non-asphyxiated newborn dogs, correlating with the modified Apgar score, oxygen saturation, glycemia, lactatemia and blood gas analysis. The study aimed to determine the possible use of troponin I as a marker of myocardial ischemic injury and an indicator of severe perinatal hypoxia in neonatal dogs. Fifteen animals in the eutocic delivery group (EG), 15 animals in the cesarean group (CG) and 13 animals in the hypoxia group (asphyxiated) (GH) were evaluated. In GH, newborns showed prominent mixed acidosis (p<0.05) (respiratory due to pCO2 increase and metabolic due to reduced pH, HCO3, BEecf and increase in lactate) compared to EG and GC, due to severe hypoxemia. The parameters in the Apgar score and blood gas analysis showed that these dogs were born asphyxiated, with low vitality and need for resuscitation maneuvers. Troponin I levels were within the reference standards for healthy dogs in the GE and GC groups. In GH, troponin I levels were significantly higher than in GE and GC (p<0.05) and were above the reference standards for healthy dogs. It is concluded that troponin I is a marker of hypoxia and myocardial injury in neonatal dogs. The aim of the second study was to describe the incidence of sepsis in newborn dogs, the clinical aspects involved, the main bacterial agents isolated and the mortality rates. Of the 152 litters and 762 neonates evaluated, 14.8% (113/762) had sepsis or septic shock, and the mortality rate among affected pups was 25.6% (29/113). Significant differences (p < 0.0001) in clinical parameters (heart and respiratory rate, blood glucose, body temperature, peripheral oxygen saturation and reflexes) were observed between healthy neonates and neonates with sepsis and septic shock. The main and most relevant clinical signs were: apathy, reduced sucking reflex, diarrhea, neonatal triad, failure to gain weight, bradycardia, dyspnea, cyanotic mucous membranes, body erythema, reduced peripheral oxygen saturation, cyanosis and tissue necrosis from the ends. The mother may have been the main source of infection for 87.6% (99/113) of neonates with sepsis. The most isolated bacterial agent was Escherichia coli, responsible for 25.6% (29/113) of sepsis cases. The morbidity and mortality of neonatal sepsis in dogs is high. Clinical evaluation and diagnosis of sepsis in neonates differ from those in adult animals. Thus, knowledge of neonatal sepsis particularities is essential for proper clinical management and better survival of these patients.

ISOLAMENTO, IDENTIFICAÇÃO E PERFIL DE SENSIBILIDADE DE Escherichia coli e Salmonella enterica EM POMBOS URBANOS (Columba livia) DE FORTALEZA CEARÁ, BRASIL

Os pombos urbanos (Columba livia) são animais com muita presença nas cidades. Sabe-se que os centros urbanos possuem espaços com condições sanitrárias precárias, algo que pode prejudicar qualquer animal sinantrópico da fauna local. Esses prejuízos variam de condições de saúde para os animais ao transporte de agentes etiológicos, o que pode acarretar em aversões por parte da população. Sendo um animal com alta biomassa nas comunidades antrópicas, a população, muitas vezes por falta de conhecimento, possuem receios quanto à manutenção da espécies nos sítios, atribuindo ao animal um conceito de transmissor de doenças. É inegável que animais silvestres e urbanos carregam patogenias com potencial zoonótico, porém o convívio coexistente entre o homem e essas espécies deve ser respeitoso e saudável para ambas as partes. As preocupações quanto a disseminação de bactérias resistentes a antrimicrobianos também é uma realidade. Os principais micro-oganismo zoonóticos atribuídos aos pombos são as enterobactérias, dentre elas Salmonella enterica e Escherichia coli. Assim o presente trabalho teve como objetivo realizar um levantamento biológico quanto aos pombos da cidade de Fortaleza, realizando isolamentos e identificação dos micro-organismos bem como avaliar o perfil de sensibilidade das bactérias aos antimicrobianos. Foram feitas capturas das aves por rede de tarrafa em praças da cidade de Fortaleza, Brasil, ocorrendo o manejo dos animais para realizar as coletas por swabs cloacais. As amostras bacterianas foram processadas e o método de disco difusão de Bauer foi utilizada para testar a resistência aos antibióticos. Foram coletadas amostras de 120 pombos, onde 73,33% deram positivo para E. coli e 2,5% positivo para S. enterica. Das amostras total de bactérias isoladas a taxa de multirresistência (3 classe) foi de 4,38% para E. coli. A tetraciciclina demonstrou ser o medicamento de menor eficácia (10,22%) contra E. coli seguida pela ampicilina (9,09%), ácido nalidíxico (6,68%), clorafernicol (2,27%) e a ciprofloxacina e cefrtriaxona com 1,13%. As 3 amostras de Salmonella foram resistentes a ácido nalidíxico (100%), azintromicina (66,6%), tetraciclina, ceftriaxon e a ampilicina com 33,33% cada. Com isso percebeu que os pombos urbanos podem albegar bactérias patogênicas e e multirrestientes a antimicrobiano, dificultanto o tratamento das mesmas.

The wild pigeons (Columba livia) are animals with a lot of presence in cities. It is known that large urban centers have precarious sanitary conditions, something that can harm any synanthropic animal of the local fauna. These damages vary from health conditions for the animals to the transport of etiological agents, or which can lead to aversions on the part of the population. As an animal with high biomass in anthropic communities, a population, often due to lack of knowledge, has receipts regarding the maintenance of species in the sites, giving the animal a concept of transmitting diseases. It is undeniable that wild and urban animals carry pathogens with zoonotic potential, but the coexistence between man and these species must be respectful and healthy for all parties. Concerns about the spread of antimicrobial resistant bacteria is also a reality. The main zoonotic micro-organisms found in pigeons are enterobacteria, including Salmonella enterica and Escherichia coli. Thus, the work aims to carry out a biological survey of pigeons in the city of Fortaleza, performing isolations and identification of microorganisms as well as evaluating the sensitivity profile of bacteria to antimicrobials. Birds were captured using a net in squares in the city of Fortaleza, Brazil, with the animals being handled to be collected by cloacal swabs. As the bacterial were processed according to the methodology used by Bauer's disk diffusion method was used to test antibiotic resistance. There were 120 pigeons collected, where 73.33% were positive for E. coli and 2.5% positive for S. enterica. Of the total chemical substances the rate of multidrug resistance (3 classes) was 4.38%. E. coli. Tetracycline is the most resistant drug against E. coli, in 10.22%, followed by ampicillin (9.09%), nalidixic acid (6.68%), chlorafernicol (2.27%) and ciprofloxacin and cefrtriaxone with 1.13%. The 3 Salmonella dwarfs were resistant to nalidixic acid (100%), azinthromycin (66.6%), tetracycline, ceftriaxon and aampilicin with 33.33% each. This causes urban pigeons to harbor pathogenic and multi-resistant antimicrobial bacteria, making their treatment difficult

AVALIAÇÃO DO MICROBIOMA E DA DINÂMICA DE CRESCIMENTO DE CODORNAS SUPLEMENTADAS COM ADITIVOS FITOGÊNICOS COMO ALTERNATIVAS AOS ANTIMICROBIANOS MELHORADORES DE DESEMPENHO

O objetivo desse trabalho foi identificar a composição química dos óleos essenciais 9 (OLES) de Mentha piperita, Melaleuca alternifolia, Baccharis trimera e Citrus 10 bergamia; identificar a susceptibilidade antimicrobiana de 15 antibióticos 11 comercializados no Brasil; determinar a atividade antimicrobiana destes OLES frente 12 a isolados de cepas bacterianas de S. aureus, E. coli e S. enteritidis; testar a 13 susceptibilidade bacteriana de sorovares de Salmonella spp frente ao óleo essencial 14 de M. piperita; estudar o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. alternifolia sobre 15 o microbioma intestinal de codornas de corte, avaliar morfometria e a histologia do 16 epitélio intestinal; avaliar o desempenho zootécnico, as características de rendimento 17 e qualidade de carne de codornas de corte submetidas à suplementação dietética com 18 como alternativas aos antimicrobianos melhoradores de desempenho. Neste sentido, 19 foram realizados 5 estudos. No primeiro estudo, foi realizado levantamento 20 bibliográfico utilizadas as palavras-chave: eubióticos, fitobióticos, óleos 21 essenciais, extratos fitogênicos, frango de corte e suas correspondentes em inglês. 22 Após comparações de diversos parâmetros sobre o uso ou não uso de fitogênicos, 23 verificou-se que a substituição dos antibióticos pelos fitogênicos pode ser considerado 24 positiva para o desempenho, histomorfologia da parede intestinal, perfil bioquímico do 25 sangue, característica de carcaça e número de bactérias encontradas no intestino. No 26 segundo estudo foram identificados os compostos químicos dos OLES de M. piperita, 27 M. alternifolia, B. trimera e C. bergamia, e foi avaliada a ação antimicrobiana destes 28 OLES e de 15 antibióticos comercializados no Brasil, sobre cepas de E. coli, S. aureus 29 e S. enteritidis. Os compostos majoritários de M. piperita, M. alternifolia, B. trimera e 30 C. bergamia, foram respectivamente: mentol (45%); terpinen-4-ol (42,5%) e acetato 31 de carquejila (62,9%), acetato de linalila (40,6%). Para E. coli a concentração inibitória 32 mínima (CIM) observada foi 6,25; 25; 50 e 12,5, para S. aureus, a CIM observada foi 33 3,12; 6,25; 50 e 12,5; para S. enteritidis a CIM observada foi 6,25;12,5; 12,5 e 25 34 mg/mL para M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; C. bergamia, respectivamente. Para 35 E. coli a CBM observada foi 6,25; 25; 50 e 12,5, para S. aureus a CBM observada foi 36 12,50; 50; 50; 50, para S. enteritidis a concentração bactericida minima (CBM) 37 observada foi 6,25;12,5; 12,5 e 25 mg/mL para M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; 38 C. bergamia, respectivamente. 80% dos antibióticos testados apresentaram eficiência, 39 20% apresentaram eficiência intermediária e nenhum se apresentou resistente contra 40 a cepa de S. enteritidis. Para E. coli, 66,67% dos antibióticos testados apresentaram 41 eficiência, 13,33% apresentaram eficiência intermediária e 20% foram resistentes. 42 Para S. aureus, 40% dos antibióticos testados apresentaram eficiência, 33,33% 43 apresentaram eficiência intermediária e 26,67% foram resistentes. No terceiro estudo, 44 foi analisada a susceptibilidade bacteriana de Salmonella spp., compreendendo oito 45 sorovares; sendo determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a 46 Concentração Bactericida Mínima (CBM) do óleo essencial de M. piperita. A 47 susceptibilidade aos antibióticos (antibiograma) foi determinada pelo método de disco- 48 difusão em ágar Mueller-Hinton. A atividade antimicrobiana do óleo essencial foi 49 avaliada pela determinação da CIM e pela CBM. 50% dos sorovares de Salmonella 50 apresentaram resistência à 66,66% dos antibióticos utilizados. Verificou-se que 62,5%2 51 dos sorovares sofreram efeito bacteriostático e 37,5% dos sorovares sofreram efeito 52 bactericida à concentração de 1,56 mg/mL de óleo essencial de M. piperita. No quarto 53 estudo, foi analisado o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. alternifolia sobre 54 morfometria e o microbioma intestinal de codornas de corte, sob condições normais 55 de alimentação. Para o estudo da morfometria intestinal foi utilizado o delineamento 56 inteiramente ao acaso, em esquema fatorial: quatro rações experimentais x três 57 segmentos do intestino (4x3), com cinco repetições. Para o estudo do microbioma foi 58 utilizado o delineamento inteiramente casualizado (DIC), sendo 4 tratamentos 59 (controle, bacitracina de zinco e OLES de M. piperita e M. alternifolia), com 8 60 repetições de 7 aves totalizando 224 aves na fase de 1 a 42 dias. O uso de M. 61 alternifolia (50 mg/kg de ração) na dieta das codornas de corte promoveu melhores 62 resultados para morfometria intestinal se equivalendo ao uso de Bacitracina de zinco. 63 O uso de M. piperita e M. alternifolia alterou o microbioma gastrointestinal das 64 codornas de corte de forma negativa em relação às bactérias patogênicas, mas 65 reduziu a diversidade bacteriana patogênica em relação ao controle. No quinto estudo, 66 com este estudo objetivou-se avaliar o efeito do uso dos OLES de M. piperita e M. 67 alternifolia sobre desempenho, qualidade da carne e lipidemia de codornas de corte. 68 Para o estudo do desempemho e qualidade da carne foi utilizado DIC sendo 4 69 tratamentos com 8 repetições de 7 aves. Para o estudo da lipidemia utilizou-se o DIC 70 em esquema fatorial: 4x2, sendo quatro tratamentos (Controle, Bacitracina de zinco, 71 M. piperita e M. alternifolia), e duas condições de coleta (com e sem jejum de 12 72 horas), com oito repetições, sendo uma ave por repetição. O uso de aditivos 73 fitogênicos à base de OLES de M. piperita e M. alternifolia na dieta de codornas de 74 corte, pode proporcionar desempenhos zootécnicos, rendimentos de carcaça quente 75 e resfriada, pesos relativos dos orgãos, bem como características de qualidade da 76 carne comparáveis ao uso de antibióticos promotores de crescimento. A Bacitracina 77 de zinco e os OLES de M. piperita e M. alternifolia não alteraram o nível sérico de 78 colesterol total, triglicerideos e o peso das aves. Houve redução no HDL nas aves 79 tratadas com Bacitracina de zinco e com os OLES de M. piperita e M. alternifolia, em 80 8,12; 16,52 e 3,36% respectivamente. O uso da Bacitracina de zinco, M. piperita e M. 81 alternifolia associado às diferentes condições de coleta não aumentaram os valores 82 séricos de LDL e VLDL. Os coeficientes de variação da condição após 12 horas de 83 jejum apresentaram-se 86% inferiores à condição sem jejum.

The objective of this work was to identify a chemical composition of essential oils 96 (ESOL) from M. piperita, M. alternifolia, Baccharis trimera and Citrus bergamia. Identify 97 an antimicrobial susceptibility of 15 antibiotics marketed in Brazil. To determine the 98 antimicrobial activity of these ESOL against bacterial strains of S. aureus, E. coli and 99 S. enteritidis.Test the bacterial susceptibility of Salmonella spp serovars against the 100 essential oil of M. piperita. Study or effect of using of the ESOL of M. piperita and M. 101 alternifolia on intestinal microbiome of meat quails to evaluate morphometry and 102 histology of the intestinal epithelium. Evaluate the zootechnical performance, 103 according to performance characteristics and quality of meat quails submitted to 104 dietary supplementation as alternatives to antimicrobials that improve performance. In 105 this sense, five studies carried out. In the first study, a bibliographic survey carried out 106 using the keywords: eubiotics, phytobiotics, essential oils, phytogenic extracts, 107 broiler chicken and their correspondents in English. After comparing several 108 parameters on the use or not use of phytogenics, it found that the replacement of 109 antibiotics by phytogenics considered positive for performance, histomorphology of the 110 intestinal wall, biochemical profile of the blood, carcass characteristic and number of 111 bacteria found in the intestine. In the second study, the chemical compounds of the 112 ESOL of M. piperita, M. alternifolia, B. trimera and C. bergamia identified, and the 113 antimicrobial action of these ESOL and 15 antibiotics commercialized in Brazil on E. 114 coli strains evaluated. S. aureus and S. enteritidis. The major compounds of M. 115 piperita, M. alternifolia, B. trimera and C. bergamia, were respectively: menthol (45%), 116 terpinen-4-ol (42.5%) and carquejila acetate (62.9%), linalyl acetate (40.6%). For E. 117 coli the minimum inhibitory concentration (MIC) was 6.25; 25; 50 and 12.5, for S. 118 aureus, the MIC observed was 3.12; 6.25; 50 and 12.5; for S. enteritidis the MIC 119 observed was 6.25; 12.5; 12.5 and 25 mg / mL for M. piperita; M. alternifolia; B. trimera; 120 C. bergamia, respectively. For E. coli the observed MBC was 6.25; 25; 50 and 12.5, 121 for S. aureus the observed MBC was 12.50; 50; 50; 50, for S. enteritidis the observed 122 minimal bactericidal concentration (MBC) was 6.25; 12.5; 12.5 and 25 mg / mL for M. 123 piperita; M. alternifolia; B. trimera; C. bergamia, respectively. The antibiotics tested 124 showed 80% efficiency, 20% showed intermediate efficiency and none were resistant 125 against the S. enteritidis strain. For E. coli, 66.67% of the tested antibiotics showed 126 efficiency, 13.33% showed intermediate efficiency and 20% were resistant. For S. 127 aureus, 40% of the tested antibiotics were efficient, 33.33% had intermediate efficiency 128 and 26.67% were resistant. In the third study, the bacterial susceptibility of Salmonella 129 spp. analyzed, comprising eight serovars; being determined the MIC and MBC of the 130 ESOL of M. piperita. The susceptibility to antibiotics (antibiogram) determined by the 131 disk-diffusion method on Mueller-Hinton agar. The antimicrobial activity of the essential 132 oil assessed by the determination of MIC and MBC. Salmonella serovars showed 50% 133 of resistance to 66.66% of the antibiotics used. It found that 62.5% of serovars suffered 134 a bacteriostatic effect and 37.5% of serovars suffered a bactericidal effect at the 135 concentration of 1.56 mg / mL of essential oil of M. piperita. In the fourth study, the 136 effect of using ESOL of M. piperita and M. alternifolia on intestinal morphometry and 137 microbiome of meat quails analyzed, under normal feeding conditions. For the study 138 of intestinal morphometry, a completely randomized design used, in a factorial4 139 scheme: four experimental diets x three segments of the intestine (4x3), with five 140 repetitions. For the study of the microbiome, a completely randomized design (CRD) 141 used, with four treatments (control, zinc bacitracin and ESOL of M. piperita and M. 142 alternifolia), with eight replications of seven birds totaling 224 birds in the phase from 143 one to 42 days. The use of M. alternifolia (50 mg / kg of feed) in the diet of broiler quail 144 promoted better results for intestinal morphometry, equivalent to the use of zinc 145 bacitracin. The use of M. piperita and M. alternifolia altered the gastrointestinal 146 microbiome of the cut quails in a negative way in relation to the pathogenic bacteria, 147 but reduced the pathogenic bacterial diversity in relation to the control. In the fifth study, 148 this study aimed to evaluate the effect of using ESOL of M. piperita and M. alternifolia 149 on performance, meat quality and lipidemia of meat quails. For the study of 150 performance and meat quality, CRD used, with four treatments with eight repetitions 151 of seven birds. For the study of lipidemia, the CRD was used in a factorial scheme: 152 4x2, with four treatments (Control, Zinc Bacitracin, M. piperita and M. alternifolia), and 153 two collection conditions (with and without a 12-hour fast), with eight repetitions, one 154 bird per repetition. The use of phytogenic additives based on ESOL of M. piperita and 155 M. alternifolia in the diet of meat quails, can provide zootechnical performances, hot 156 and cooled carcass yields, relative weights of the organs, as well as meat quality 157 characteristics comparable to use of growth-promoting antibiotics. The zinc bacitracin 158 and the ESOL of M. piperita and M. alternifolia did not alter the serum level of total 159 cholesterol, triglycerides and the weight of the birds. There was a reduction in HDL in 160 birds treated with zinc bacitracin and with ESOL of M. piperita and M. alternifolia, in 161 8.12, 16.52 and 3.36% respectively. The use of zinc Bacitracin, M. piperita and M. 162 alternifolia associated with different collection conditions did not increase serum LDL 163 and VLDL values. The coefficients of variation of the condition after 12 hours of 164 fasting were 86% lower than the condition without fasting.

Detecção de resistência às fluoroquinolonas em Campylobacter isolados de frangos de criação orgânica / Detection of fluoroquinolone resistance in Campylobacter strains from organic poultry

Estudos têm revelado que a resistência às quinolonas em cepas de Campylobacter está relacionada à presença da mutação Treonina-86 para Isoleucina. Com o objetivo de investigar a presença dessa mutação em cepas de Campylobacter sensíveis e resistentes à ciprofloxacina e enrofloxacina, o conteúdo cecal de 80 frangos de corte de criação orgânica, abatidos sob Serviço de Inspeção Estadual (S.I.E.) do Estado do Rio de Janeiro, foram coletados e investigados para a presença de Campylobacter. A determinação da resistência à ciprofloxacina e enrofloxacina foi feita pela técnica de difusão em disco e de diluição em ágar para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). A detecção da mutação na Região Determinante de Resistencia às Quinolonas (RDRQ) no gene gyrA foi realizada através de sequenciamento. Campylobacter foi isolado a partir de 100% das amostras avaliadas, sendo 68,75% correspondente à C. jejuni e 31,25% à C. coli. No teste de difusão em disco, 100% das cepas foram resistentes à ciprofloxacina e 56,25% das cepas foram resistentes à enrofloxacina. No teste de diluição em ágar, todas as cepas foram resistentes à ciprofloxacina apresentando CIM variando de ≥ 16-64μg/mL, e resistência ou resistência intermediaria à enrofloxacina foi detectada em 42,50% (CIM ≥ 4-32μg/mL) e 38,75% (CIM = 2μg/mL) das cepas, respectivamente. A mutação Tre-86-Ile, foi observada em 100% das cepas analisadas. Além dessa mutação, foram observadas outras mutações não silenciosas (Val-73-Glu, Ser-114-Leu, Val-88-Asp, Ala-75-Asp, Ser-119-Gli, Arg-79-Lis) e mutações silenciosas (His-81-His, Ser-119-Ser, Ala-120-Ala, Fen-99-Fen, Ala-122-Ala, Gli-74-Gli, Ile-77-Ile, Ala-91-Ala, Leu-92-Leu, Val-93-Val, Ile-106-Ile, Tre-107-Tre, Gli-113-Gli, Ile-115-Ile, Gli-110-Gli). A observação de que cepas sensíveis à enrofloxacina pelos testes fenotípicos apresentavam a substituição Tre-86 para Ile sugere que outros mecanismos podem contribuir para a resistência à enrofloxacina em Campylobacter.(AU)

Studies have shown that resistance to quinolones in Campylobacter strains is related with Threonine-86-Isoleucine mutation. In order to investigate the presence of this mutation in sensitive and resistant Campylobacter strains to ciprofloxacin and enrofloxacin, the cecal contents of 80 broilers from organic raising chickens, slaughtered under State Inspection Service (S.I.S) of the State of Rio de Janeiro, were collected and tested for the presence of Campylobacter. The determination of ciprofloxacin and enrofloxacin susceptibility was done by disk diffusion and agar dilution methods for determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The detection of mutation in Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in gyrA gene was done by sequencing. Campylobacter was isolated from 100% of the samples, being 68.75% C. jejuni and 31.25% C. coli. By the disk diffusion method, resistance to ciprofloxacin was observed in all isolates and 56.25% of the strains were resistant to enrofloxacin. By agar dilution method, all strains were resistant to ciprofloxacin (MIC ≥ 16μg/mL to ≥ 64μg/mL) and full and intermediate resistance to enrofloxacin was detected in 42.50% (MIC ≥ 4-32μg/mL) and 38.75% (MIC =2μg/mL) of the strains, respectively. Mutation Thr-86-Ile was observed in 100% of the isolates investigated. In addition to this mutation, others no silent mutations (Val-73-Glu, Ser-114-Leu, Val-88-Asp, Ala-75-Asp, Gly-119-Ser, Arg-79-Lys) and silent mutations (His-81-His, Ser-119-Ser, Ala-120-Ala, Phe-99-Phe, Ala-122-Ala, Gly-74-Gly, Ile-77-Ile, Ala-91-Ala, Leu-92-Leu, Val-93-Val, Ile-106-Ile, Thr-107-Thr, Gly-113-Gly, Ile-115-Ile, Gly-110-Gly) were detected. All the enrofloxacin-sensitive strains by the phenotypic methods had the Thr-86 to Ile substitution, which suggests other mechanisms contributing to enrofloxacin resistance in Campylobacter.(AU)

AVALIAÇÃO DA MICROBIOTA ENTÉRICA BACTERIANA DE AVES DE VIDA LIVRE CAPTURADAS NO CAMPUS DO ITAPERI DA UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ, FORTALEZA-CE

O Brasil possui a segunda maior avifauna do mundo com 1919 espécies, em primeiro e terceiro lugar estão Colômbia e Peru, respectivamente. O estado do Ceará apresenta o total de 426 espécies de aves, e a cidade de Fortaleza/CE possui 224 espécies. O Campus do Itaperi abriga um total de no mínimo 113 espécies de aves de vida livre, distribuídas em 42 famílias. O campus apresenta fragmentos naturais que servem como atrativos para as aves presentes no munícipio de Fortaleza ou que estão em processo migratório, disponibilizando alimento, abrigo e locais para refúgio. Esse espaço também é importante para diversas espécies que escapam de cativeiro utilizados pelo tráfico, assim como, provenientes de solturas ou escape oriundas de criações legais ou ilegais. O estudo tem como objetivo realizar o levantamento de enterobactérias presentes na microbiota entérica das aves de vida livre capturadas no campus do Itaperi, além de analisar o perfil de sensibilidade microbiana das cepas isoladas. Durante um período de 7 meses, 109 aves foram capturadas com o auxílio de redes de neblina para realização da coleta de suabe cloacal, e posterior processamento microbiológico, por meio de isolamento bacteriano utilizando provas bioquímicas, e posteriormente submetidas ao teste de sensibilidade antimicrobiana pelo teste de disco-difusão em ágar. Como resultados, foram detectados o crescimento de 153 isolados, distribuídos em 20 espécies bacterianas. A bactéria Escherichia coli foi a mais frequentemente isolada (34,9%), seguida de Pantoea agglomerans, Hafnia alvei e Escherichia hermanii, com percentuais de 22,0%, 17,4% e 13,8% respectivamente. Outro achado relevante foi o isolamento de uma amostra da espécie Salmonella ser. Heidelberg (0,9%). Os antibióticos as quais as cepas apresentaram maior frequência de resistência foram amoxicilina e azitromicina, representando 73% e 54% dos isolados, respectivamente. Em apenas um caso observou-se resistência a todas as 7 classes de antibióticos testados e estava relacionado com uma cepa de Klebsiella pneumoniae. A partir dos resultados obtidos, conclui-se que as aves de vida livre capturadas no Campus do Itaperi apresentaram uma variedade de espécies de enterobactérias, em que, muitas destas, são de relevância para saúde pública e mostraram resistência a importantes antimicrobianos.

Brazil has the second largest avifauna in the world with 1919 species, in first and third place are Colombia and Peru. The state of Ceará presents a total of 426 bird species, and the city of Fortaleza / CE has 224 species. The Itaperi campus hosted a total of at least 113 species of freeliving birds, distributed in 42 families. The campus has natural fragments that works as attractions for birds presents in the municipality of Fortaleza or in migration process, providing food, shelter and refuge places. This space is also important to various species that escape from captivity used by the traffic, as well as coming from releases or escape from legal or illegal creations. The objective of this study was to investigate the enterobacteria presents in the enteric microbiota of free-living birds captured at the Itaperi campus and to analyze the microbial susceptibility profile in the isolated strains. During a period of 7 months, 109 birds were captured by mist nets to collect cloacal swabs, and subsequent microbiological processing, through bacterial isolation using biochemical tests, and submitted to the antimicrobial susceptibility test by the disc-diffusion technique. A total of 153 bacterial strains were isolated, distributed in 20 bacterial species. Escherichia coli was the most frequently isolated (34.9%), followed by Pantoea agglomerans, Hafnia alvei and Escherichia hermanii, 22.0%, 17.4% and 13.8%, respectively. Salmonella ser. Heidelberg was detected in one sample (0.9%). The highest antibiotic resistance rate observed was to amoxicillin and azithromycin, representing 73% and 54% of the isolates, respectively. One sample was resistant to all 7 classes of antibiotics, belonging to the Klebsiella pneumoniae species. From the results obtained, it can be concluded that free-living birds caught in Itaperi Campus has a variety of enterobacteria species, and some of them, are of public health relevance and showed resistance to importante antimicrobials.

Susceptibilidade antimicrobiana e capacidade de formação de biofilmes de amostras de Escherichia coli isoladas de carcaças de frango de corte em diferentes etapas do abate

A modernização e a produção em escala mundial de frango de corte têm aumentado nas últimas décadas de maneira significativa. Com a intensificação da produção avícola, houve um aumento de doenças microbianas nas aves. Como consequência houve um aumento do uso de antimicrobianos, tanto para fins terapêuticos, profiláticos e promotores de crescimento, levando a seleção de cepas resistentes. A Escherichia coli tem sido utilizada como indicadora de resistência antimicrobiana, produtora de etalactamases de espectro estendido (ESBL), genes de virulência e capacidade de produção de biofilmes. A presença de E. coli em alimentos de origem animal é alarmante, devido ao risco de transferência horizontal de genes entre bactérias e os produtos de origem animal para o homem. Durante as etapas de abate as contaminações cruzadas são as principais causas de disseminação de micro-organismos patogênicos nos produtos alimentares. Este trabalho teve como objetivo analisar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana, incluindo a classificar filogenética e a avaliação da capacidade de formação de biofilmes de 160 amostras isoladas em sete etapas de abate de frango de corte, denominados ponto A (antes da escalda), B (depois da escalda), C (depois da depenagem), D (antes da evisceração), E (antes do chiller), F (depois do chiller) e G (depois de embalado). O teste de susceptibilidade antimicrobiana foi avaliado pelo método do disco difusão os halos e foram classificados como sensíveis, intermediários e resistentes. Foi determinado o índice de resistência múltipla pela relação entre o número de antimicrobianos que a amostra foi resistente e o número total de antimicrobianos testados. A classificação filogenética de Escherichia coli Extraintestinais (ExPEC) foi determinada por multiplex PCR da presença dos genes chuA e yjaA do fragmento de DNA (TSPE4.C2). As análises estatísticas foram realizadas através do programa IBM SPSS versão 21.0 e consistiram de análises descritivas dos dados gerados pelos testes de qui-quadrado de Pearson, Exato de Fischer e Tukey considerando p 0,05 significativo. As 160 amostras de E. coli isoladas foram submetidas a teste de susceptibilidade a 19 antimicrobianos utilizados na medicina veterinária e humana. Foi verificado que 86,2% (138/160) dos isolados foram resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos ao longo dos pontos amostrados. O valor do índice de múltipla resistência aos antimicrobianos (IRMA) variou entre zero a 0,79. Quanto à avaliação da produção de biofilme, 12,5% (20/160) das cepas testadas foram capazes de formar biofilmes em microplacas de poliestireno, classificadas como fortes produtoras (0,6%), moderadas (0,6%) e fracas produtoras (11,3%). A partir dos resultados obtidos, observamos em todas as etapas do abate uma elevada taxa de resistência frente aos antimicrobianos testados, além da capacidade de formação de biofilme.

The modernization and world-scale production of broiler chicken has increased significantly in recent decades. With the intensification of poultry production, there was an increase in microbial diseases in birds. As a consequence there was an increase in the use of antimicrobials for both therapeutic, prophylactic and growth promoters, leading to the selection of resistant strains. Escherichia coli has been used as an indicator of antimicrobial resistance, producer of extended spectrum etalactamases (ESBL), virulence genes and biofilm production capacity. The presence of E. coli in food of animal origin is alarming, due to the risk of horizontal transfer of genes between bacteria and products of animal origin for man. During the slaughtering stages cross-contamination is the main cause of dissemination of pathogenic microorganisms in food products. The objective of this work was to analyze the antimicrobial susceptibility profile, including the phylogenetic classification and the biofilm formation capacity of 160 samples isolated in seven stages of chicken slaughter, called point A (before scaling), B (after chilling), C (after plucking), D (before evisceration), E (before chiller), F (after chiller) and G (after packing). The antimicrobial susceptibility test was evaluated by disc diffusion method and the halos were classified as sensitive, intermediate and resistant. The multiple resistance index was determined by the ratio between the number of antimicrobials that the sample was resistant and the total number of antimicrobials tested. The phylogenetic classification of Escherichia coli Extraintestinal (ExPEC) was determined by multiplex PCR of the presence of the chuA and yjaA genes of the DNA fragment (TSPE4.C2). Statistical analyzes were performed using the IBM SPSS software version 21.0 and consisted of descriptive analyzes of the data generated by the Pearson chi-square test, Fisher's exact test and Tukey's test, considering p 0.05. The 160 E. coli isolates were tested for susceptibility to 19 antimicrobials used in veterinary and human medicine. It was verified that 86.2% (138/160) of the isolates were resistant to three or more classes of antimicrobials along the sampled points. The value of the multiple antimicrobial resistance index (IRMA) ranged from zero to 0.79. As regards evaluation of biofilm production, 12.5% (20/160) of the tested strains were able to form biofilms in polystyrene microplates, classified as strong producers (0.6%), moderate (0.6%) and weak producers (11.3%). From the obtained results, we observed in all the stages of the slaughter a high rate of resistance against the antimicrobials tested, besides the capacity of biofilm formation.

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE Campylobacter TERMOTOLERANTES DE ORIGEM AVÍCOLA

As espécies termotolerantes de Campylobacter são frequentemente relatadas como uma das mais importantes causas de gastroenterite humana, ocasionada principalmente pelo consumo de produtos avícolas contaminados. O conhecimento da prevalência do patógeno nesses produtos e a correlação genética entre os isolados são de extrema importância epidemiológica. Diante disso, foi proposto avaliar a prevalência das espécies termorresistentes, com a utilização de método molecular para identificação de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari e a utilização de marcadores moleculares de genotipagem no intuito de compreender a diversidade genética das espécies patogênicas. Para isso, foram avaliadas 300 carcaças de frangos refrigeradas coletadas em sete indústrias frigoríficas submetidas ao Serviço de Inspeção Federal (SIF). Utilizou-se primeiramente a técnica de isolamento bacteriano, sendo possível determinar a prevalência de Campylobacter em 34 carcaças, totalizando 11,3% do total de amostras avaliadas. Verificou-se que, das sete indústrias, duas (A e C representando 28,5%) apresentaram Campylobacter, destas, apenas uma (indústria A) foi verificada a presença do patógeno em mais de uma coleta e em diferentes estações do ano. Foi possível obter 48 isolados de Campylobacter os quais foram submetidos à análise de PCR em tempo real para confirmação do gênero e determinação da espécie, além disso, foi necessário realizar a análise de PCR convencional para determinação da espécie em alguns isolados. Após a realização das técnicas moleculares observou-se que 34 isolados (70,8%) pertenciam à espécie Campylobacter jejuni; 08 isolados (16,6%) identificados como Campylobacter coli e 06 isolados (12,5%) identificados como Campylobacter lari. Após a identificação das espécies, os isolados foram genotipados com base na análise dos polimorfismos dos fragmentos de restrição do gene flaA por meio da técnica de RFLP-flaA e em seguida também foram avaliados pela técnica de sequenciamento da pequena região variável do gene flaA (SVR-flaA). Observou-se neste trabalho que alguns isolados estudados apresentam alta similaridade genômica, o que corrobora a hipótese de que os isolados de diferentes empresas tenham uma fonte de contaminação em comum. Além disso, a similaridade genética entre as espécies termotolerantes do patógeno fornece suporte para o entendimento da dificuldade de se determinar a epidemiologia da campilobacteriose. Os diferentes genótipos e diferentes perfis de restrição encontrados demonstraram que no mesmo abatedouro podem existir diferentes fontes de contaminação das carcaças. A quantidade de isolados encontrados neste explicita o que ocorre no restante do planeta; a bactéria está presente nos planteis avícolas e deve ser monitorada. Adicionalmente, o presente estudo mostrou que o sequenciamento da região SVR-flaA e a análise do RFLP-flaA foram métodos eficientes e adequados para a subtipificação de estirpes de Campylobacter, vale ressaltar que este é o primeiro trabalho envolvendo a subtipificação molecular de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari na região centro-oeste do Brasil.

Campylobacter thermotolerant species are frequently reported as one of the most important causes of human gastroenteritis, mainly caused by the consumption of contaminated poultry products. The knowledge of the pathogen prevalence in these products and the genetic correlation between the isolates are of extreme epidemiological importance. Therefore, it was proposed to evaluate the prevalence of thermoresistant species using a molecular method for the identification of Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari and the use of molecular markers of genotyping in order to understand the genetic diversity of pathogenic species. For this, 300 carcases of refrigerated chickens collected in seven cold stores submitted to the Federal Inspection Service (SIF) were evaluated. The bacterial isolation technique was used first, and it was possible to determine the prevalence of Campylobacter in 34 carcases, totaling 11.3% of the total samples. It was verified that of the seven industries, two (A and C representing 28.5%) presented Campylobacter, of which only one (industry A) was verified the presence of the pathogen in more than one collection and in different seasons of the year. It was possible to obtain 48 Campylobacter isolates, which were submitted to real-time PCR analysis for genus confirmation and species determination. In addition, it was necessary to perform the conventional PCR analysis to determine the species in some isolates. After the molecular techniques were performed, 34 isolates (70.8%) belonged to the species Campylobacter jejuni; 08 isolates (16.6%) identified as Campylobacter coli and 06 isolates (12.5%) identified as Campylobacter lari. After identification of the species, the isolates were genotyped based on the analysis of restriction fragment polymorphisms of the flaA gene by the RFLP-flaA technique and were also evaluated by the small variable region sequencing technique of the flaA gene (SVR -FlaA). It was observed in this work that some isolates studied have high genomic similarity, which corroborates the hypothesis that the isolates of different companies have a source of contamination in common. In addition, the genetic similarity between thermotolerant species of the pathogen provides support for understanding the difficulty of determining the epidemiology of campylobacteriosis. The different genotypes and different restriction profiles found showed that in the same slaughterhouse there may be different sources of contamination of the carcasses. The number of isolates found here explains what is happening on the rest of the planet; the bacterium is present in poultry plants and should be monitored. In addition, the present study showed that SVR-flaA region sequencing and RFLP-flaA analysis were efficient and suitable methods for the subtyping of Campylobacter strains, it is worth mentioning that this is the first work involving the molecular subtyping of Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari in the central-western region of Brazil.

Estudo clínico e microbiológico de otite externa de cães atendidos em hospital veterinário do noroeste paulista / Clinical and microbiological study of canine otitis in a veterinary hospital in the northwest of São Paulo state, Brazil

A otite canina é doença a mais comum do canal auditivo em cães e representa 8 a 15% dos casos atendidos na clínica médica de animais de pequeno porte. O objetivo deste trabalho fazer a avaliação retrospectiva de 274 fichas clínicas de cães com otite externa atendidos no Hospital "Dr Halim Atique", durante o período de janeiro de 2006 a agosto de 2010. Foi realizada a análise de prontuário formato papel e eletrônico quanto a influência do sexo, idade e raça dos animais nas otites externas. Posteriormente, foi realizada a descrição de agentes etiológicos e teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Duzentas e quatorze culturas foram positivas (78,68%) ao crescimento de microrganismos, e 60 (21,32%) negativas. Quanto ao isolamento em cultura, a freqüência de Staphylococcus spp foi de 47,08%; Proteus spp. de 14,39%; Pseudomonas spp. De 13,23%; Escherichia coli de 10,51% entre outros. Maior isolamento bacteriano foi descrito na faixa etária de 0 a 3 anos (p=0,059), perfazendo 89 casos (32,04%). Quanto às raças, 59 (21,24%) eram cães Sem Raça Definida (SRD) e 40 Poodles (14,40%). Não houve diferença estatística entre o isolamento de microrganismo quanto ao sexo. A distribuição de otite externa de acordo com o sexo e infecção monomicrobiana em fêmeas foi de 113 casos (41,22%) e em 63 machos (22,97%). A infecção monomicrobiana foi significantemente maior em relação à polimicrobiana (p<0,0001). Houve uma maior sensibilidade, estatisticamente significante do Staphylococcus spp. a cefalexina (60,86%), ciprofloxacina (59,09%) e enrofloxacina (59,09%) foram estatisticamente significante em relação a sulfametoxazol/trimetoprima (16,66%).

A canine otitis is the most common disease of the ear canal in dogs and represents 8-15% of cases treated in the medical clinic of small animals. This study aimed to do a retrospective evaluation of 274 medical records of dogs with external otitis treated at the "Dr Halim Atique" Hospital during the period of January 2006 to August 2010. It was performed the analysis of paper and electronic records in way to examine the influence of sex, age and breed of animals in external otitis. After that, it was done the description of etiologic agents and sensibility test for antimicrobials. Two hundred and fourteen cultures were positive (78.68%) for the growth of microorganisms, and 60 (21.32%) were negative. Regarding to culture growth, the frequency of Staphylococcus spp. was 47.08%; Proteus spp. of 14.39%; Pseudomonas spp. 13.23%; 10.31% of Escherichia coli and others. Bigger bacterial isolation was described in the age group of 0-3 years (p = 0.059), accounting for 89 cases (32.04%). Regarding the breed, 59 (21.24%) were mongrel dogs and 40 Poodles (14.40%). There was no statistical difference between the microorganism isolation and the sex. The distribution of external otitis according to sex and monomicrobial infection in females was of 113 cases (41.22%) and 63 males (22.97%). Monomicrobial infection was significantly higher compared to polymicrobial (p < 0.0001). There was a higher sensitivity, a statistically significant of Staphylococcus spp., cephalexin (60.86%), ciprofloxacin (59,09%) and enrofloxacin (59,09%) were statistically significant compared to trimethoprim-sulfamethoxazole (16.66%).

Identificação sorológica e perfil de susceptibilidade a antimicrobianos em amostras de Escherichia coli isoladas de peixe e água de pesque-pagues

Pesquisou-se a ocorrência de E. coli (EPEC, EIEC, EHEC) em água e peixe (pele, trato gastrintestinal e músculo) de pesque-pagues da microbacia do Córrego Rico, Jaboticabal, SP. A amostragem foi realizada entre os meses de abril e junho de 2008 em cinco pesque-pagues. Em cada um, foram colhidos dez exemplares de peixes adultos, e para análise foram colhidas amostras do músculo, do trato gastrintestinal e da superfície corpórea. As amostras de água foram colhidas em cinco pontos distintos de todos os pesque-pague. As colônias com características morfológicas relativas à E. coli isoladas do ágar MacConkey foram submetidas a confirmação bioquímica. Posteriormente, os isolados foram identificados sorologicamente como EPEC, EIEC e EHEC e realizado os testes de susceptibilidade a antimicrobianos e atividade hemolítica. Assim, foram isoladas 115 cepas de E. coli, entre as quais 81 (70%) foram sorogrupadas como EPEC, 5 (4%) como EHEC e 8 (7%) como EIEC. Os sorogrupos mais frenquentes foram O125 (13,9%), O126 (11,3%) e O158 (10,4%). Dentre as amostras testadas, 60 (52%) apresentaram resistência simultânea a dois antimicrobianos. A Análise de Correspondência foi realizada com intuito de verificar as possíveis correspondências envolvendo o local de isolamento, sorogrupos e multirresistência e com isso pode-se observar que o músculo foi o local de isolamento com menor correlação aos demais fatores. Enquanto água, trato e pele apresentaram maior correspondência entre si. Assim, a presença de um alto número de isolados EPEC nesse estudo indica contaminação por enteropatógenos possivelmente advindos de fezes de animais, humanas e/ou águas contaminadas, representando risco à saúde dos frequentadores destes pesque-pagues e consumidores do pescado

The occurrence of Escherichia coli (EPEC, EIEC, EHEC) in water and fish (skin, gastrointestinal tract and muscle) was surveyed in fee fishing from the stream Rico micro-basin, Jaboticabal, São Paulo/Brazil. Samples were collected between april and june 2008 in five fee fishing. In each fee fishing, ten copies were collected from adult fish and for analysis were sampled muscle, gastrointestinal tract and body surface. Water samples were collected from five different points of all fee fishing. Thus, we isolated colonies from the MacConkey agar with morphological characteristics related to E. coli for biochemical confirmation. Subsequently, the isolates were identified serologically as EPEC, EIEC and EHEC and performed tests of antimicrobial susceptibility and hemolytic activity. It was found that among 115 strains of E. coli isolated, 81 (70%) were serologically classified as EPEC, 5 (4%) as EHEC and 8 (7%) as EIEC. The most common serogroups were O125 (13.9%), O126 (11.3%) e O158 (10.4%). From the 115 bacterial isolates, 60 (52%) were resistant to two antimicrobials. The Correspondence Analysis was performed to verify possible matches involving the location of isolation, serogroup and antimicrobial resistance and that can be observed that the muscle had lower correlation to other factors. While water and tract and skin had correlation with each other. Probably, the isolation of EPEC serogroups in this study indicates contamination by pathogens coming from animals, human and/or contaminated water, constituting a potential risk to the consumer health of these fee fishing

Clinical and microbiological study of canine otitis in a veterinary hospital in the northwest of São Paulo state, Brazil / ESTUDO CLÍNICO E MICROBIOLÓGICO DE OTITE EXTERNA DE CÃES ATENDIDOS EM HOSPITAL VETERINÁRIO DO NOROESTE PAULISTA

A canine otitis is the most common disease of the ear canal in dogs and represents 8-15% of cases treated in the medical clinic of small animals. This study aimed to do a retrospective evaluation of 274 medical records of dogs with external otitis treated at the Dr Halim Atique Hospital during the period of January 2006 to August 2010. It was performed the analysis of paper and electronic records in way to examine the influence of sex, age and breed of animals in external otitis. After that, it was done the description of etiologic agents and sensibility test for antimicrobials. Two hundred and fourteen cultures were positive (78.68%) for the growth of microorganisms, and 60 (21.32%) were negative. Regarding to culture growth, the frequency of Staphylococcus spp. was 47.08%; Proteus spp. of 14.39%; Pseudomonas spp. 13.23%; 10.31% of Escherichia coli and others. Bigger bacterial isolation was described in the age group of 0-3 years (p = 0.059), accounting for 89 cases (32.04%). Regarding the breed, 59 (21.24%) were mongrel dogs and 40 Poodles (14.40%). There was no statistical difference between the microorganism isolation and the sex. The distribution of external otitis according to sex and monomicrobial infection in females was of 113 cases (41.22%) and 63 males (22.97%). Monomicrobial infection was significantly higher compared to polymicrobial (p 0.0001). There was a

A otite canina é doença a mais comum do canal auditivo em cães e representa 8 a 15% dos casos atendidos na clínica médica de animais de pequeno porte. O objetivo deste trabalho fazer a avaliação retrospectiva de 274 fichas clínicas de cães com otite externa atendidos no Hospital Dr Halim Atique, durante o período de janeiro de 2006 a agosto de 2010. Foi realizada a análise de prontuário formato papel e eletrônico quanto a influência do sexo, idade e raça dos animais nas otites externas. Posteriormente, foi realizada a descrição de agentes etiológicos e teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Duzentas e quatorze culturas foram positivas (78,68%) ao crescimento de microrganismos, e 60 (21,32%) negativas. Quanto ao isolamento em cultura, a freqüência de Staphylococcus spp foi de 47,08%; Proteus spp. de 14,39%; Pseudomonas spp. de 13,23%; Escherichia coli de 10,51% entre outros. Maior isolamento bacteriano foi descrito na faixa etária de 0 a 3 anos (p=0,059), perfazendo 89 casos (32,04%). Quanto às raças, 59 (21,24%) eram cães Sem Raça Definida (SRD) e 40 Poodles (14,40%). Não houve diferença estatística entre o isolamento de microrganismo quanto ao sexo. A distribuição de otite externa de acordo com o sexo e infecção monomicrobiana em fêmeas foi de 113 casos (41,22%) e em 63 machos (22,97%). A infecção monomicrobiana foi significantemente maior em relação à polimicrobiana

Dinâmica da infecção e influência de fatores ambientais e populacionais na ocorência de escherichia coli produtora de toxina shiga (stec) em bovinos no estado do rio de janeiro

Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) é uma categoria enterovirulenta de E. coli causadora de uma zoonose emergente de distribuição mundial e que tem como principal reservatório os ruminantes, especialmente bovinos. Está associada a doenças humanas graves como colite hemorrágica (CH), síndrome hemolítica urêmica (HUS) e púrpura trombótica trombocitopênica. Apesar de ser um patógeno relativamente raro em infecções humanas no Brasil, sua elevada ocorrência em bovinos já foi relatada, principalmente no estado do Rio de Janeiro. No entanto, nenhuma avaliação mais detalhada sobre a persistência de STEC no reservatório animal no Brasil foi realizada até o momento. O presente estudo teve como objetivos avaliar a dinâmica de infecção e a influência de fatores ambientais e populacionais na ocorrência de STEC em bovinos do Estado do Rio de Janeiro. Na avaliação da dinâmica de infecção, 72 bovinos de 3 faixas etárias e 2 regimes de produção, pertencentes a 4 propriedades no município de Miracema, RJ foram analisados durante 12 meses para presença de STEC através de ensaios de PCR para os genes stx e eae. Um subgrupo de 15 animais foi avaliado adicionalmente quanto à ocorrência de sorogrupos específicos de STEC através de ensaios de PCR para rfb O111, O113 e O157. Colônias STEC foram isoladas destes animais e de 5 outros positivos para apenas para stx visando sua caracterização fenotípica e genotípica. Amostras de água, alimento e solo também foram analisadas os 3 últimos meses. Para a avaliação da influência de fatores ambientais e populacionais foram analisados dados prévios de 2318 amostras fecais de bovinos de diferentes faixas etárias pertencentes a 5 sub-regiões distintas do estado do Rio de Janeiro. A ocorrência média de STEC em bovinos no município de Miracema foi de 86%. Presença simultânea de stx e eae foi detectada em 28% dos animais sendo significativamente maior em animais de regime leiteiro (30%) e bezerros (40%). O perfil stx1/stx2 predominou em 11 dos 12 meses analisados. A maioria dos animais (99%) foi positiva para stx em ao menos 6 meses e apresentou o mesmo perfil toxigênico (79%) por até 4 meses. Os genes stx associados ou não a eae foram detectados nas amostras de água, solo e alimento por 2 ou 3 meses consecutivos. Os 15 animais apresentaram-se positivos para rfb de 1 a 9 meses no período estudado, predominando a ocorrência de rfb O113 (77%). Foram isoladas 22 colônias STEC de 9 animais, 11 destas positivas para rfb O 113. A maioria (86%) expressou stx, apresentando o gene stx2 (77%). O gene ehxA foi detectado em 9 (41%) colônias, no entanto apenas 7 (32%) revelaram a expressão de enterohemolisina nos testes fenotípicos. Doze sorotipos foram identificados. Dentre os fatores ambientais avaliados, a localização (Norte Fluminense, p<0,0001), topografia (acima de 50% de morro, p=0,02), época do ano (inverno, p=0,02), alimentação (pastagem, p<0,0001) e regime de produção (corte, p<0,0001) se associaram significativamente a ocorrência mais elevada de STEC em bovinos. Ao contrário, o tamanho e a hidrografia da propriedade e, dentre os fatores populacionais, a faixa etária e o perfil racial do rebanho, não influenciaram de forma significativa à ocorrência de STEC. O perfil toxigênico stx1/stx2 (32%) foi maior em adultos (43%) e em animais do regime de corte (42%) na maioria das sub-regiões. A elevada ocorrência de STEC, freqüente ao longo do ano, detectada nos animais confirma a importância de bovinos como reserva