Poisoning in domestic cats in Brazil: toxicants, clinical signs, and therapeutic approaches / [Intoxicação em gatos domésticos no Brasil: toxicantes, sinais clínicos e abordagens terapêuticas]

This study evaluated the most common toxic agents affecting domestic cats, the clinical signs of toxicity, and the therapeutic approaches for recovery. A survey on poisoning in cats was conducted among small animal veterinary practitioners from 2017 to 2018. Of the 748 completed questionnaires, 543 (72.6%) were evaluated. Pesticides and household cleaning supplies were the most common causes of poisoning in cats. The toxicant groups included pesticides and household cleaning supplies (organophosphates), human drugs (acetaminophen), plants/plant derivatives (lily), and veterinary drugs (tramadol). The major clinical signs for these four groups of toxicants were (1) acetaminophen poisoning, which caused oxidative erythrocyte damage; (2) muscarinic and nicotinic cholinergic syndrome, which resulted from organophosphate poisoning; (3) acute kidney injury, which resulted from intoxication of lily; and (4) serotonin syndrome, which resulted from tramadol toxicosis. Interventions for treating poisoning in cats were based on the clinical presentation of animals. In the present study, the significant toxins identified to be dangerous for cats were characterized using the obtained data in Brazil as well as the main associated clinical signs and therapy recommended by veterinarians.(AU)

Objetiva-se com este trabalho caracterizar os principais toxicantes para gatos domésticos, bem como os prevalentes sinais clínicos e a terapêutica associada. Uma pesquisa sobre envenenamento em gatos foi realizada entre médicos veterinários no período de 2017 a 2018. Dos 748 questionários preenchidos, 543 (72,6%) foram avaliados. Pesticidas e domissanitários foram os principais causadores de intoxicação em gatos. Entre os grupos tóxicos, destacaram-se, na categoria pesticidas e domissanitários (organofosforados), medicamentos humanos (acetaminofeno), plantas e derivados de planta (lírio) e medicamentos veterinários (tramadol). Os principais sinais clínicos para os quatro grupos de substâncias tóxicas foram: (1) intoxicação por acetaminofeno, que causou dano eritrocitário oxidativo; (2) síndrome colinérgica muscarínica e nicotínica, resultante do envenenamento por organofosforado; (3) lesão renal aguda, causada pela intoxicação por lírio; e (4) síndrome serotoninérgica, resultante da exposição ao tramadol. As intervenções realizadas para o tratamento dos envenenamentos foram justificáveis mediante a apresentação clínica dos animais. Por meio dos dados obtidos, puderam-se caracterizar os principais tóxicos para gatos no Brasil, bem como os principais sinais clínicos associados e a terapêutica preconizada pelos médicos veterinários.(AU)

Antioxidant and hepatoprotective effects of ethanolic and ethyl acetate stem bark extracts of Copaifera multijuga (Fabaceae) in mice / Efeitos antioxidante e hepatoprotetor dos extratos brutos etanólico e acetato de etila da casca do caule da Copaifera multijuga(Fabaceae) em camundongos

The properties of oil-resin of copaiba, Copaifera multijuga are commonly mentioned in the literature, but there are few studies on extracts from its stem bark. We evaluated the antioxidant effects of ethanolic (EE) and ethyl acetate (EA) crude stem bark extracts from copaiba and compared them to rutin in a paracetamol (PCM)-induced oxidative stress model in mice. All test comparisons differed significantly. Hepatic catalase (CAT) and glutathione-S-transferase (GST) activity decreased in the PCM group, and there was an increase of protein carbonyls in the liver, kidney and brain. However, the protein carbonyls decreased in the liver for the PCM + EE group, in the kidneys for the PCM + EA and PCM + Rutin groups, and in the brain for all treatments. Hepatic GSH decreased in the PCM group and increased in the PCM + EE group. The extracts showed a positive effect on ascorbic acid (ASA), since they were able to restore the levels of parameters that had been changed by PCM. There was an increase of ALT and AST activity in the plasma within the PCM group. Even though ALT decreased in the PCM + Rutin, PCM + EE and PCM + EA groups, EE and EA did not have an effect on AST. The strongest antioxidant effect was observed for EE, due to the presence of the phenolic compounds epicatechin and epiafzelechin, as well as the highest concentration of total phenols and an excellent antioxidant potential observed in the DPPH· test.

As propriedades do óleo-resina da copaíba, Copaifera multijuga são comumente citadas na literatura, mas há poucos estudos sobre extratos da casca do caule. Avaliamos os efeitos antioxidantes de extratos brutos etanólico (EE) e acetato de etila (EA) da casca do caule da copaíba e os comparamos à rutina no modelo de estresse oxidativo induzido por paracetamol (PCM) em camundongos. Todas as comparações de teste diferiram significativamente. A atividade da catalase hepática (CAT) e da glutationa-S-transferase (GST) diminuiu no grupo PCM, e houve um aumento de proteínas carboniladas no fígado, rim e cérebro. No entanto, as proteínas carboniladas diminuíram no fígado para o grupo PCM + EE, nos rins para os grupos PCM + EA e PCM + rutina, e no cérebro para todos os tratamentos. A GSH hepática diminuiu no grupo PCM e aumentou no grupo PCM + EE. Os extratos mostraram um efeito positivo sobre o ácido ascórbico (ASA), uma vez que foram capazes de restaurar os níveis dos parâmetros que foram alterados pelo PCM. Houve um aumento da atividade de ALT e AST no plasma dentro do grupo PCM. Embora a ALT tenha diminuído nos grupos PCM + rutina, PCM + EE e PCM + EA, EE e EA não afetaram a AST. O efeito antioxidante mais forte foi observado para o EE, provavelmente devido à presença dos compostos fenólicos epicatequina e epiafzelequina, assim como à maior concentração de fenóis totais e um excelente potencial antioxidante observado no teste DPPH·

Antioxidant and hepatoprotective effects of ethanolic and ethyl acetate stem bark extracts of Copaifera multijuga (Fabaceae) in mice / Efeitos antioxidante e hepatoprotetor dos extratos brutos etanólico e acetato de etila da casca do caule da Copaifera multijuga(Fabaceae) em camundongos

The properties of oil-resin of copaiba, Copaifera multijuga are commonly mentioned in the literature, but there are few studies on extracts from its stem bark. We evaluated the antioxidant effects of ethanolic (EE) and ethyl acetate (EA) crude stem bark extracts from copaiba and compared them to rutin in a paracetamol (PCM)-induced oxidative stress model in mice. All test comparisons differed significantly. Hepatic catalase (CAT) and glutathione-S-transferase (GST) activity decreased in the PCM group, and there was an increase of protein carbonyls in the liver, kidney and brain. However, the protein carbonyls decreased in the liver for the PCM + EE group, in the kidneys for the PCM + EA and PCM + Rutin groups, and in the brain for all treatments. Hepatic GSH decreased in the PCM group and increased in the PCM + EE group. The extracts showed a positive effect on ascorbic acid (ASA), since they were able to restore the levels of parameters that had been changed by PCM. There was an increase of ALT and AST activity in the plasma within the PCM group. Even though ALT decreased in the PCM + Rutin, PCM + EE and PCM + EA groups, EE and EA did not have an effect on AST. The strongest antioxidant effect was observed for EE, due to the presence of the phenolic compounds epicatechin and epiafzelechin, as well as the highest concentration of total phenols and an excellent antioxidant potential observed in the DPPH· test.

As propriedades do óleo-resina da copaíba, Copaifera multijuga são comumente citadas na literatura, mas há poucos estudos sobre extratos da casca do caule. Avaliamos os efeitos antioxidantes de extratos brutos etanólico (EE) e acetato de etila (EA) da casca do caule da copaíba e os comparamos à rutina no modelo de estresse oxidativo induzido por paracetamol (PCM) em camundongos. Todas as comparações de teste diferiram significativamente. A atividade da catalase hepática (CAT) e da glutationa-S-transferase (GST) diminuiu no grupo PCM, e houve um aumento de proteínas carboniladas no fígado, rim e cérebro. No entanto, as proteínas carboniladas diminuíram no fígado para o grupo PCM + EE, nos rins para os grupos PCM + EA e PCM + rutina, e no cérebro para todos os tratamentos. A GSH hepática diminuiu no grupo PCM e aumentou no grupo PCM + EE. Os extratos mostraram um efeito positivo sobre o ácido ascórbico (ASA), uma vez que foram capazes de restaurar os níveis dos parâmetros que foram alterados pelo PCM. Houve um aumento da atividade de ALT e AST no plasma dentro do grupo PCM. Embora a ALT tenha diminuído nos grupos PCM + rutina, PCM + EE e PCM + EA, EE e EA não afetaram a AST. O efeito antioxidante mais forte foi observado para o EE, provavelmente devido à presença dos compostos fenólicos epicatequina e epiafzelequina, assim como à maior concentração de fenóis totais e um excelente potencial antioxidante observado no teste DPPH·(AU)

MODELO HEPÁTICO EX VIVO EM SUÍNOS: EFEITO DO ACETAMINOFENO, DA FUMONISINA E DO ÁCIDO FÍTICO

Devido à similaridade orgânica ao homem, suínos são utilizados como modelos 8 experimentais. Os explantes ex vivo são promissores na avaliação de xenobióticos no 9 organismo. Assim, objetivou-se avaliar os efeitos da fumonisina (FB1), acetaminofeno 10 e do ácido fítico (IP6) utilizando-se o modelo de explante hepático de suínos. Foram 11 realizados dois experimentos, nos quais foram analisados: resposta ao estresse 12 oxidativo, morfologia e biomarcadores hepáticos. O experimento (E1) avaliou o efeito 13 de IP6 (5mM) nos explantes expostos ao acetaminofeno (20mM). Utilizou-se nove 14 suínos de terminação provenientes de frigoríficos (grupo experimental 1 - GE1) e seis 15 suínos com 40 dias (grupo experimental 2 - GE2), estes eutanasiados. Os explantes 16 (8 mm) passaram pelos seguintes tratamentos durante quatro horas: controle 4h 17 (somente meio); IP6 (5mM); acetaminofeno (20mM) e IP6 + acetaminofeno. Explantes 18 não incubados (Ctrl 0h) foram colhidos para comparação com incubados (Ctrl 4h). Os 19 sobrenadantes foram colhidos após 1/2h, 2h e 4h de incubação para análise de 20 biomarcadores (ALT, AST, FA, GGT, proteína e colesterol). Após 4h, (3/tratamento) 21 foram fixados, processados para análise histológica ou congelados (2/tratamento) a - 22 80ºC, para avaliação do estresse oxidativo: substâncias reativas ao ácido 23 tiobarbitúrico (TBARS), tetrazólio de nitroazul (NBT), capacidade antioxidante por 24 meio da glutationa reduzida (GSH), potencial de redução do ferro (FRAP) e 25 capacidade de eliminação de radicais livres (ABTS). Para GE1 e GE2, na presença 26 de IP6, observou-se atividade enzimática menor de GGT e FA em relação ao controle. 27 Com acetaminofeno, a atividade enzimática (FA, AST, ALT), PT e colesterol reduziram 28 comparado ao controle. Para o GE2, notou-se queda de FA e ALT para acetaminofeno 29 mais IP6 em relação ao controle. Os explantes incubados apenas com meio de cultura 30 (Ctrl 4h) apresentaram aspectos histológicos similares aos não incubados (Ctrl 0h). 31 Assim, a incubação não interferiu na integridade do tecido. Para o ensaio TBARS 32 (GE1), ocorreu diferença entre controle 4h e acetaminofeno, menor para este último. 33 Estes achados indicam que provavelmente não houve peroxidação lipídica nos 34 explantes expostos ao acetaminofeno. Houve redução da GSH no grupo exposto ao 35 IP6. Para o GE2, houve aumento da capacidade antioxidante (GSH, FRAP e ABTS) 36 do grupo acetaminofeno comparado com controle 4h, IP6 e acetaminofeno acrescido 37 de IP6 e para o NBT diferença entre controle 4h e acetaminofeno, maior para este 38 último, indicando possível lesão oxidativa. No segundo experimento (E2), a 39 metodologia foi similar ao primeiro, sendo os explantes submetidos aos tratamentos: 40 controle 0h; controle 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. Não houve diferença no 41 escore da lesão entre GE1 e GE2. Para o GE1 e GE2, os tratamentos IP6 e FB1 + IP6 42 diminuíram a atividade de FA em relação ao controle e FB1. Quando o IP6 foi 43 adicionado ao FB1, reduziu a atividade de ALT e PT comparado ao FB1 e ao controle. 44 Para o GE1 e GE2, a FB1 induziu ao aumento de GSH comparado ao IP6 e controle, 45 respectivamente, enquanto a incubação com FB1 + IP6 dimininui GSH em 46 comparação ao FB1. Os resultados obtidos evidenciaram uma ação protetora do IP6. 47

Due to the organic similarity to man, pigs are used as experimental models. Ex 6 vivo explants are promising in the evaluation of xenobiotics in the body. Thus, the 7 objective was to evaluate the effects of fumonisin (FB1), acetaminophen and phytic 8 acid (IP6) using the swine liver explant model. Two experiments were carried out, in 9 which it where analyzed: response to oxidative stress, liver morphology and 10 biomarkers. The experiment (E1) evaluated the effect of IP6 (5mM) on explants 11 exposed to acetaminophen (20mM). Nine finishing pigs were used from 12 slaughterhouses (experimental group 1 - GE1) and six 40-day-old pigs (experimental 13 group 2 - GE2) were used, euthanized. The explants (8 mm) underwent the following 14 treatments for four hours: control 4h (media only); IP6 (5mM); acetaminophen (20mM) 15 and IP6 + acetaminophen. Un incubated explants (Ctrl 0h) were collected for 16 comparison with incubated. Supernatants were collected after 1 / 2h, 2h and 4h of 17 incubation for analysis of biomarkers (ALT, AST, FA, GGT, protein and cholesterol). 18 After 4h, (3 / treatment) were fixed, processed for histological analysis or frozen (2 / 19 treatment) at -80ºC, to assess oxidative stress: substances reactive to thiobarbituric 20 acid (TBARS), nitro-blue tetrazolium (NBT) and capacity antioxidant by means of 21 reduced glutathione (GSH), iron reduction potential (FRAP) and ability to eliminate free 22 radicals (ABTS). For GE1 and GE2, in the presence of IP6, less GGT and FA enzyme 23 activity was observed compared to the control. With acetaminophen, the enzymatic 24 activity (FA, AST, ALT), PT ando cholesterol decreased compared to the control. For 25 GE2, there was a decrease in FA and ALT for acetaminophen plus IP6 compared to 26 control. The explants incubated only with culture media (Ctrl 4h) presented similar 27 histological aspects to those not incubated (Ctrl 0h). Thus, incubation did not interfere 28 with tissue integrity. For the TBARS trial (GE1), there was a difference between the 4h 29 control and acetaminophen, which was smaller for the latter. These findings indicate 30 that there was probably no lipid peroxidation in the explants exposed to 31 acetaminophen. There was a reduction in GSH in the group exposed to IP6. For GE2, 32 there was an increase in the antioxidant capacity (GSH, FRAP and ABTS) of the 33 acetaminophen group compared to the 4h control, IP6 and acetaminophen plus IP6 34 and for the NBT, the difference between the 4h control and acetaminophen, greater for 35 the latter, indicating possible oxidative damage. In the second experiment (E2), the 36 methodology was similar to the first, with the explants subjected to treatments: control 37 0h; control 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. There was no difference in the 38 injury score between GE1 and GE2. For GE1 and GE2, treatments IP6 and FB1 + IP6 39 decreased the activity of AF in relation to control and FB1. When IP6 was added to 40 FB1, it reduced the activity of ALT and PT compared to FB1 and the control. For GE1 41 and GE2, FB1 induced an increase in GSH compared to IP6 and control, respectively, 42 while incubation with FB1 + IP6 decreased GSH compared to FB1. The results 43 obtained showed a protective action of IP6.

POTENCIAL HEPATOPROTETOR, ANTINEOPLÁSICO E GENOPROTETOR DA GEOPRÓPOLIS PRODUZIDA POR ABELHA JANDAÍRA (Melipona subnitida D.) NO SEMIÁRIDO DO RIO GRANDE DO NORTE, BRASIL

Objetivou-se avaliar o potencial hepatoprotetor frente as injúrias induzidas por acetaminofen, a atividade antineoplásica e genoprotetora do extrato hidroetanólico da geoprópolis produzida por Melipona subnitida D., na região semiárida do Nordeste brasileiro. Foram avaliadas a composição química e atividade antioxidante das seis amostras (A1, A2, A3, A4, A5, A6) de extrato hidroetanólico da geoprópolis. Foram avaliados o potencial hepatoprotetor através das análises bioquímica da função hepática, avaliação macroscópica, histológica e estereológica dos fígados em 04 grupos experimentais (G1- controle negativo, G2- 50 mg/kg de extrato hidroetanólico da geoprópolis, G3- 50 mg/kg de extrato hidroetanólico da geoprópolis e 600 mg/kg de acetaminofen, G4- 600 mg/kg de acetaminofen) constituídos por 06 roedores da espécie Rattus norvegicus Berkenhout, 1769, linhagem Wistar, com lesão hepática aguda induzida por acetaminofen. O potencial antineoplásico foi determinado pela avaliação do efeito citotóxico do extrato hidroetanólico da geoprópolis em linhagens celulares de carcinoma hepatocelular humano (HepG2) e fibroblastos de camundongos L929. O efeito genoprotetor foi analisado em linhagem celular de fibroblastos de camundongo L929. As amostras do extrato hidroetanólico da geoprópolis apresentaram 41 compostos fenólicos, distribuídos entre fenóis e flavonoides. Relata-se pela primeira vez, em geoprópolis de meliponídeos, a presença de lignan 4- demethyldeoxypodophyllotoxin 4-O-glucopyranoside. As amostras A1, A2, A4, A5 e A6 apresentaram moderada atividade antioxidante expressas pelos valores de IC50 igual a 82,50,122,20, 98,80, 76,30 e 144,0, respectivamente, correlacionados com os elevados teores de fenóis e flavonoides totais que variaram entre 16,62 ± 3,91 a 28,46 ± 1,73 e 14,72 ± 3,75 a 32,22 ± 4,43, respectivamente. Os resultados dos níveis séricos das enzimas TGO e TGP dos ratos, indicaram que o extrato hidroetanólico da geoprópolis de M. subnitida D. não causou hepatotoxicidade. Na avaliação macroscópica dos fígados, no grupo G3 foi possível constatar coloração marrom pálida e discreta hemorragia, no G4 presença de sufusões hemorrágicas na cápsula, contornos irregulares e acentuação do padrão lobular. Na histoarquitetura dos fígados verificou no G3 focos de hepatócitos tumefeitos, vacuolizados e necrosados, no G4 degeneração e necrose difusa de hepatócitos. Na estereologia, observou aumento no percentual de hepatócitos e sinusóides, bem como, redução de colágeno no grupo G3 em relação ao G4. O extrato hidroetanólico da geoprópolis apresentou efeito citotóxico contra linhagem celular HepG2 e fibroblastos-L929, após 72 h de exposição, com valores de IC50 igual a 365,00 e 250,9 g/mL, respectivamente. Também apresentou efeito genoprotetor, com percentuais de redução de genotoxicidade de 90,74%, 73,12% e 48,18%, nas concentrações de 500, 250 e 100 l/mL do extrato, respectivamente. Conclui-se que o extrato hidroetanólico da geoprópolis de M. subnitida D. apresenta composição química variada, elevados teores de fenóis e flavonoides totais, potencial hepatoprotetor contra lesões hepáticas agudas, efeito citotóxico em células neoplásicas e atividade genoprotetora, podendo ser um produto natural promissor na quimioterapia.

The objective was to evaluate the hepatoprotective potential against injuries induced by acetaminophen, the antineoplastic and genoprotective activity of the hydroethanolic extract of the geopropolis produced by Melipona subnitida D., in the semiarid region of Northeast Brazil. The chemical composition and antioxidant activity of the six samples (A1, A2, A3, A4, A5, A6) of geopropolis hydroethanolic extract were evaluated. The hepatoprotective potential was evaluated through biochemical analysis of liver function, macroscopic, histological and stereological evaluation of the livers in 04 experimental groups (G1- negative control, G2- 50 mg/kg of hydroethanolic extract from geopropolis, G3- 50 mg/kg of hydroethanolic extract of geopropolis and 600 mg/kg of acetaminophen, G4- 600 mg/kg of acetaminophen) consisting of 06 rodents of the species Rattus norvegicus Berkenhout, 1769, Wistar strain, with acute liver damage induced by acetaminophen. The antineoplastic potential was determined by evaluating the cytotoxic effect of the hydroethanolic extract of geopropolis in human hepatocellular carcinoma (HepG2) cell lines and fibroblasts from L929 mice. The genoprotective effect was analyzed in the L929 mouse fibroblast cell line. Samples of the geopropolis hydroethanolic extract showed 41 phenolic compounds, distributed between phenols and flavonoids. The presence of 4-demethyldeoxypodophyllotoxin 4-O-glucopyranoside is reported for the first time in a meliponid geopropolis. Samples A1, A2, A4, A5 and A6 showed moderate antioxidant activity expressed by IC50 values equal to 82.50, 122.20, 98.80, 76.30 and 144.0, respectively, correlated with high levels of total phenols and flavonoids ranging from 16.62 ± 3.91 to 28.46 ± 1.73 and 14.72 ± 3.75 to 32.22 ± 4.43, respectively. The results of the serum levels of the enzymes TGO and TGP of the rats, indicated that the hydroethanolic extract of the geopropolis of M. subnitida D. did not cause hepatotoxicity. In the macroscopic evaluation of the livers, in the G3 group it was possible to observe a pale brown color and slight hemorrhage, in the G4 the presence of hemorrhagic suffusions in the capsule, irregular contours and accentuation of the lobular pattern. In the histoarchitecture of the livers, in G3 it was found foci of tumefied, vacuolized and necrotic hepatocytes, in G4 degeneration and diffuse necrosis of hepatocytes. In stereology, there was an increase in the percentage of hepatocytes and sinusoids, as well as a reduction in collagen in the G3 group compared to G4. The hydroethanolic extract of the geopropolis showed a cytotoxic effect against HepG2 cell line and L929 fibroblasts, after 72 h of exposure, with IC50 values equal to 365.00 and 250.9 g/mL, respectively. It also had a genoprotective effect, with percentages of genotoxicity reduction of 90.74%, 73.12% and 48.18%, at concentrations of 500, 250 and 100 l/mL of the extract, respectively. It is concluded that the hydroethanolic extract of the M. subnitida D. geopropolis presents varied chemical composition, high levels of total phenols and flavonoids, hepatoprotective potential against acute liver lesions, cytotoxic effect on neoplastic cells and genoprotective activity, being a promising natural product in chemotherapy.

POTENCIAL TERAPÊUTICO DA COENZIMA-Q10 E N-ACETILCISTEÍNA NA INTOXICAÇÃO EXPERIMENTAL POR PARACETAMOL EM RATOS WISTAR

O paracetamol (PAR) é um medicamento muito utilizado na medicina e na veterinária como analgésico e antipirético, frequentemente envolvido em quadros de intoxicação. O objetivo do estudo foi avaliar o potencial terapêutico da coenzima Q10 (CoQ10) e da N-acetilcisteína (NAC) em modelo de intoxicação por PAR. Foram utilizados 31 ratos adultos, divididos aleatoriamente em cinco grupos. O grupo controle negativo (CON-) recebeu por via oral (VO) 1ml de NaCl 0,9%. Os demais grupos receberam 1,2g /kg de PAR por VO, em dose única. O grupo controle positivo (CON+) recebeu apenas o PAR, como acima descrito. O grupo NAC recebeu 800 mg/kg de NAC por via intraperitoneal (IP), 1h após a administração de PAR. O quarto grupo (CoQ10) recebeu, 1h e 12h após a intoxicação, CoQ10 (10 mg/kg por via IP). E o quinto grupo (NAC+CoQ10) recebeu a associação: NAC (800 mg/Kg IP) e CoQ10 (10mg/kg IP). Transcorridas 12 horas, os animais foram submetidos à eutanásia para a obtenção de amostras direcionadas para as avaliações hematológicas, bioquímicas, avaliações de lesões em DNA e avaliações histopatológicas. Não foram observadas alterações relevantes na hematologia, bioquímica renal e lesões em DNA, contudo foi possível constatar por meio de microscopia óptica, lesões significativas em hepatócitos nos grupos CON+ e NAC, associadas com o aumento de AST. O grupo que recebeu apenas a CoQ10 como tratamento apresentou lesões hepáticas discretas, assim como aumento brando de AST, o que sugere que a sua utilização, de forma individualizada, exerce um efeito hepatoprotetor frente à hepatotoxicidade induzida por PAR.

Acetaminophen (APAP) is a widely used drug in medicine and veterinary medicine as an analgesic and antipyretic and it is frequently involved in intoxications. The study aimed to evaluate the therapeutic potential of coenzyme Q10 (CoQ10) and N-acetylcysteine (NAC) in a model of APAP intoxication. 31 adult Wistar rats were randomly divided into five groups. The negative control group (CON-) received orally (PO) 1 ml of 0.9% NaCl. The other groups received 1.2 g/kg of PAR, PO, single dose. The positive control group (CON +) received only APAP as previously described. The NAC group received 800 mg/kg of NAC, intraperitoneal injection (IP), 1 hour after the APAP administration. The fourth group (CoQ10) received Q-10 (10 mg /kg, intraperitoneal injection- IP) after 1 hour and 12 hours after intoxication. And the fifth group (NAC + Q10) received NAC (800 mg /kg, IP) and Q-10 (10 mg/kg, IP). After 12 hours, the animals were euthanized to collect samples and send them to hematological, biochemical, histopathological, and DNA assessments. No relevant alterations were observed in hematology, kidney biochemistry, and comet assay, however, it was possible to conjecture through optic microscopy significant damage in hepatocytes of NAC and CON+ groups, correlated to the increased AST values. The group that only received CoQ10 as treatment presented discreet hepatic damage as a mild increase of AST, suggesting that the sole use of CoQ10 has a hepatoprotective effect when facing hepatotoxicity induced by APAP.

Efeito analgésico do tratamento com cloreto de amônio 2% e acetaminofeno associado a fenilbutazona em equinos

O manejo da dor crônica é um fator de grande importância dentro da medicina veterinária por estar relacionado com o bem-estar dos animais. A claudicação crônica de origem no casco é um problema frequente dentro da clínica de equinos e o seu tratamento apresenta diferentes índices de sucesso. Os compostos neurolíticos possuem ação similar à neurectomia, porém permitem que os animais mantenham seu sistema fisiológico de defesa com menos efeitos colaterais. Contudo, estes fármacos perderam credibilidade quanto ao seu emprego pelo uso incorreto. Acreditava-se, equivocadamente, que estes produtos atuavam de forma similar aos anestésicos locais. Desta forma, a primeira parte deste trabalho foi dividido em duas etapa. A primeira etapa consisitu da avaliação objetiva do efeito analgésico do cloreto de amônio 2 % (CA2%) em diferentes casos de claudicações crônicas ligadas ao casco (aparelho podotroclear, n=5; aparelho podotroclear associado à articulação interfalangena distal, n=6; articulação interfalangeana distal, n= 2; laminite, n=1; e dor solear, n=1) por um período de 62 dias. A injeção perineural do CA2% no nervo digital palmar foi capaz de induzir uma melhora parcial a completa na claudicação, sendo observados melhores resultados nos dias 12 e 19 após o tratamento. Observou-se que lesões radiográficas de moderada a severa do osso navicular e articulação interfalangeana distal podem interferir negativamente na eficácia do CA2%. Posteriormente, a segunda etapa, avaliou-se a neurotoxicidade do CA2% para melhor entendimento do mecanismo de ação deste composto. Assim, 18 e 6 nervos digitais palmares foram tratados com CA2% e com solução fisiológica respectivamente, para posterior coleta por neurectomia seguida da avaliação histológica. O CA2% induziu degeneração Walleriana de moderada à severa até 62 dias após o tratamento, similar ao observado nos nervos tratados com solução fisiológica. A injeção perineural com CA2% não apresentou interferência em neurectomias futuras. Os resultados reforçam que o CA2% demonstra ser uma opção terapêutica útil e segura para o manejo da dor crônica ligada ao casco em equinos. A analgesia multimodal, por sua vez, é uma importante técnica de manejo da dor crônica e apresenta menores índices de efeitos colaterais quando comparada com a utilização de um medicamento para a mesma finalidade. Dessa forma, a terceira parte deste estudo avaliou o efeito analgésico e a toxicidade do acetaminofeno (AC, 20 mg Kg-1 ) associado à fenilbutazona (FBZ, 2.2 mg Kg-1 ) sobre a claudicação com origem no casco induzida por cintas metálicas. Pôde-se observar, baseado na diferença da intensidade da claudicação, que a associação de AC com FBZ apresentou um potencial analgésico total superior ao tratamento com AC (p=0.008), FBZ (p= 0.0117) e o grupo controle (p<0.0001). A associação de AC com FBZ, duas vezes ao dia, por 14 dias não apresentou alterações significativas dos parâmetros hematológicos e bioquímicos quando comparados aos valores de referência. Estes dados reafirmam o potencial analgésico do acetaminofeno associado com a fenilbutazona para o manejo da dor em equinos. Estudos futuros sobre a ação do acetaminofeno, associado ou não a outros fármacos, em diferentes modelos experimentais ou clínicos, se fazem necessários antes da recomendação na rotina clínica.

The management of chronic pain is an important factor within veterinary medicine since it is related to animals welfare. Chronic hoof lameness is a frequent problem in the practitioners routine and it presents different success rates. Neurolytic compounds have a mechanism of action similar to the neurectomy, but they allow animals to maintain their physiological defense system. However, these drugs have lost credibility regarding their use due to their misuse. It was mistakenly believed that these have similar mechanism of action than local anesthetics. Thus, the first part of this work aimed to objectively assess the analgesic effect of ammonium chloride 2% (2%AC) in different cases of chronic hoof (podotrochlear apparatus, n= 5; podotrochlear apparatus associated with the distal interphalangeal joint, n= 6; distal interphalangeal joint, n= 2; laminitis, n= 1; and bruised sole, n= 1) for a period of 62 days. Perineural injection of 2%AC into the palmar digital nerve was able to induce partial to complete lameness improvement, with better results being observed on days 12 and 19 after treatment. Moderate to severe radiographic lesions of navicular bone and distal interphalangeal joint can negatively interfere on the 2%AC analgesic effect. Subsequently, in a second study was carried out to assess the neurotoxicity of 2%AC to better understand the mechanism of action of this drug. Thus, 18 and 6 digital palmar nerves were treated with 2%AC and saline solution, respectively, and later nerve samples were collect by neurectomy for histological evaluation. 2%AC induced moderate to severe Wallerian degeneration for up to 62 days after treatment, similar to those observed in nerves treated with saline. Perineural injection with 2%AC did not interfere in future neurectomy. The results of both studies reinforce that 2%AC can be a useful and safe therapeutic option for the management of chronic hoof lameness in horses. In turn, multimodal analgesia is also an important technique for managing chronic pain and has lower rates of side effects when compared to administration of one medication for the same purpose. Therefore, the third part of this study evaluated the analgesic effect and toxicity of acetaminophen (ACET, 20 mg Kg-1) associated with phenylbutazone (PBZ, 2.2 mg Kg-1) on lameness induced by hoof clamps. The association of ACET with PBZ demonstrated an overall analgesic effect, based on the change in the lameness, superior to the treatment with only ACET (p=0.008), PBZ (p=0.0117) and the control group (p<0.0001). The association of ACET with PBZ twice a day for 14 days did not show significant changes in hematological and biochemical parameters when compared to reference values. These data reaffirm the analgesic potential of acetaminophen associated with phenylbutazone for pain management in horses. Future studies to evaluate potential analgesic of different therapeutic protocols with ACET, associate or not with others drugs, in different experimental or clinical models, are necessary before the recommendation of its use in the clinical routine.

Attenuation of copaiba oil in hepatic damage in rats

PURPOSE:To investigate the copaiba oil on the hepatic damage induced by acetaminophen, comparing against corn oil.METHODS:Fifty four rats were distributed into nine study groups (N=6): control group, that didn't receive the acetaminophen; Acetaminophen Group, that only received the acetaminophen; Prophylactic Copaiba Group 1, that received copaiba oil two hours before the acetaminophen; Prophylactic Copaiba Group 7, that received copaiba oil seven days, once by day, before the acetaminophen; Therapy Copaiba Group, that received the copaiba oil two hours after the acetaminophen, the corn's groups were similar than copaiba oil groups; and N-Acetyl-Cysteine Group, that received the N-Acetyl-Cysteine two hours after the acetaminophen. Euthanasia was performed after 24 hours. The serum levels transaminases, bilirubin and canalicular enzymes were analyzed.RESULTS:The prophylactic copaiba group 7, therapy copaiba group and N-Acetyl-Cysteine Group showed amounts of AST and ALT similar to the control group; and the prophylactic copaiba group 1 and corn's groups showed similar levels to the acetaminophen group. There was no significant difference between the groups regarding the amount of alkaline phosphatase and ɤ GT (p>0.05). The therapy copaiba group showed the highest levels of total bilirubin and was statistically different from the other groups (p<0.01).CONCLUSIONS:Copaiba oil administered prophylactically for seven days and therapeutically 2 hours after the acetaminophen acute intoxication offered a potential hepato protection against paracetamol-induced hepatic damage, normalizing the biochemical parameters similarly to N-Acetyl-Cysteine, and the treatment with corn oil shows no effect on the liver damage.(AU)

Effect of copaiba oil in hepatic damage induced by acetaminophen in rats

PURPOSE: To investigate the effects of copaiba oil on the hepatic damage induced by paracetamol. METHODS: Thirty six rats were distributed into six study groups (N=6): control group, that didn't receive the acetaminophen; Acetaminophen Group, that only received the acetaminophen; Prophylactic Copaiba Group 1, that received copaiba oil two hours before the acetaminophen; Prophylactic Copaiba Group 7, that received copaiba oil seven days, once by day, before the acetaminophen; Therapy Copaiba Group, that received the copaiba oil two hours afther the acetaminophen; and N-Acetyl-Cysteine Group, , that received the N-Acetyl-Cysteine two hours afther the acetaminophen. Euthanasia was performed after 24 hours. The serum levels of AST, ALT, alkaline phosphatase, GT, total bilirubin, direct bilirubin and indirect bilirubin and histological analisis were analized. RESULTS: The prophylactic copaiba group 7, therapy copaiba group and N-Acetyl-Cysteine Group showed amounts of AST and ALT similar to the control group; and the prophylactic copaiba group 1 showed similar levels to the acetaminophen group. There was no significant difference between the groups regarding the amount of alkaline phosphatase and GT (p>0.05). The therapy copaiba group showed the highest levels of bilirubin and was statistically different from the other groups (p<0.01) and this increased the costs of direct bilirubin. Regarding histopathology, the oil of copaiba administered prophylactic or therapeutic form for 7 days could decrease the amount of necrosis and inflammatory infiltrate.(AU)

Intoxicação por paracetamol em gatos / Acetaminophen toxicity in cats

intoxicação por paracetamol em gatos ocorre por exposição acidental ou de forma iatrogênica, quando um responsável o administra na intenção de tratar seu animal. Os gatos apresentam defi ciência em sua biotransformação e por isso mesmo pequenas doses do fármaco podem provocar sinais de intoxicação. Dentre os sinais clínicos pode-se observar cianose, depressão, icterícia, edema de face e membros, taquipnéia, dispnéia, anorexia, fraqueza, vômito, hipotermia e hematúria. Felizmente, com um tratamento agressivo e cuidado de suporte adequado, a maioria dos animais se recupera completamente. O proprietário deve ser orientado a nunca administrar paracetamol em gatos. Considerando a grande quantidade de gatos atendidos na emergência veterinária com sinais clínicos de intoxicação por paracetamol, tem-se por objetivo apresentar informações sobre essa enfermidade para que os clínicos de pequenos animais possam identifi car o quadro e assim tratá-lo com sucesso.

Paracetamol intoxication in cats occurs due to accidental or iatrogenic exposure, when the owners administers the medication with the intention of treating their pet. Cats are defi cient in terms of biotransformation, so even small doses of the drug can cause toxicity. Among the clinical signs, cyanosis, depression, icterus, edema of face and limbs, tachypnea, dyspnea, anorexia, weakness,vomiting, hypothermia and hematuria can be observed. Fortunately, with aggressive treatment and appropriate supportive care, most animals are able to recover completely. Owners should be advised not to administer acetaminophen in cats. Considering the large number of cats treated in emergency veterinary with clinical signs of acetaminophen toxicity, we have the objective of presenting information about this disease for clinicians of small animals to identify the framework and thus treat it successfully.

Intoxicação por paracetamol em gatos / Acetaminophen toxicity in cats

intoxicação por paracetamol em gatos ocorre por exposição acidental ou de forma iatrogênica, quando um responsável o administra na intenção de tratar seu animal. Os gatos apresentam defi ciência em sua biotransformação e por isso mesmo pequenas doses do fármaco podem provocar sinais de intoxicação. Dentre os sinais clínicos pode-se observar cianose, depressão, icterícia, edema de face e membros, taquipnéia, dispnéia, anorexia, fraqueza, vômito, hipotermia e hematúria. Felizmente, com um tratamento agressivo e cuidado de suporte adequado, a maioria dos animais se recupera completamente. O proprietário deve ser orientado a nunca administrar paracetamol em gatos. Considerando a grande quantidade de gatos atendidos na emergência veterinária com sinais clínicos de intoxicação por paracetamol, tem-se por objetivo apresentar informações sobre essa enfermidade para que os clínicos de pequenos animais possam identifi car o quadro e assim tratá-lo com sucesso.(AU)

Paracetamol intoxication in cats occurs due to accidental or iatrogenic exposure, when the owners administers the medication with the intention of treating their pet. Cats are defi cient in terms of biotransformation, so even small doses of the drug can cause toxicity. Among the clinical signs, cyanosis, depression, icterus, edema of face and limbs, tachypnea, dyspnea, anorexia, weakness,vomiting, hypothermia and hematuria can be observed. Fortunately, with aggressive treatment and appropriate supportive care, most animals are able to recover completely. Owners should be advised not to administer acetaminophen in cats. Considering the large number of cats treated in emergency veterinary with clinical signs of acetaminophen toxicity, we have the objective of presenting information about this disease for clinicians of small animals to identify the framework and thus treat it successfully.(AU)

THE ROLE OF CONNEXINS, PANNEXINS AND THEIR CHANNELS IN ACUTE LIVER FAILURE

A homeostase tecidual é controlada por uma série de mecanismos de comunicação. Ao nível intercelular, as junções gap permitem o tráfego de mensageiros pequenos e hidrofílicos, menores do que 1.5 kilodalton, entre duas células adjacentes. As junções gap são formadas por dois hemicanais, que por sua vez são compostos por seis proteínas denominadas conexinas (Cx). No fígado, os hepatócitos produzem principalmente Cx32, enquanto as células hepáticas não parenquimatosas contem predominantemente Cx43. As junções gap hepáticas são conhecidas por serem essenciais em diversas funções específicas do fígado, tais como secreção de albumina e metabolismo de xenobióticos. Na última década, tem-se tornado claro que os hemicanais de conexinas não são apenas precursores das junções gap, mas eles também podem participar da via de comunicação, contudo entre o citoplasma de células individuais e seus ambientes extracelulares. Além disso, foi descrita uma nova classe de proteínas semelhantes às conexinas, as panexinas (Panx), das quais a Panx1 é expressa no fígado. As pannexins se reúnem em uma configuração que lembra os hemicanais de conexinas e também participam da sinalização extracelular. Acredita-se que tanto os hemicanais de conexinas como os canais de pannexinas se tornam ativados preferencialmente em condições patológicas e, deste modo, promovam a morte celular e inflamação. O presente projeto de doutorado foi estabelecido para verificar se esta hipótese também é verdadeira nas doenças hepáticas, em particular na insuficiência hepática aguda. Inicialmente, o padrão de expressão das conexinas hepáticas foi totalmente caracterizado em um modelo murino de insuficiência hepática aguda induzida pelo paracetamol (APAP). Isto revelou uma mudança da Cx32 para Cx43 após a hepatotoxicidade induzida por APAP, com expressão de novo de Cx43 nos hepatócitos. Subsequentemente, a relevância funcional da expressão aumentada de Cx43 na insuficiência hepática aguda foi testada utilizando camundongos deficientes em Cx43. Verificou-se que a Cx43 tem um efeito protetor, uma vez que a lesão hepática induzida por APAP se agravou após a ablação genética da Cx43. Em paralelo, foi realizado um estudo semelhante utilizando camundongos knockout para Cx32, não mostrando diferenças significativas na extensão da hepatotoxicidade induzida pelo APAP em comparação aos animais selvagens. Uma vez que os animais deficientes em conexina não permitem diferenciar entre a comunicação via junções gap e a sinalização pelos hemicanais de conexina, uma série de experimentos seguintes baseou-se na utilização de inibidores dos hemicanais de Cx32 e Cx43, chamados de TAT-Gap24 e TAT-Gap19, respectivamente. Após os testes in vitro quanto a sua especificidade e eficiência in vitro, ambos os peptídeos foram administrados em camundongos com overdose pelo APAP. Enquanto TAT-Gap24 reduziu claramente a morte celular e inflamação, TAT-Gap19 apresentou apenas efeitos discretos sobre a lesão hepática. Além disso, o co-tratamento 12 de camundongos intoxicados pelo APAP com ambos os peptídeos revelou um efeito aditivo na redução da lesão hepática. Um estudo final foi focado na elucidação da expressão hepática e função da Panx1 na hepatotoxicidade induzida pelo APAP, utilizando o peptídeo inibidor da Panx1, 10Panx1. Verificou-se que a inibição dos canais de Panx1 minimiza as características clínicas da hepatotoxicidade desencadeada pelo APAP, em particular a relacionada com morte celular e inflamação. Em geral, este projeto de doutorado demonstra, pela primeira vez, o envolvimento dos hemicanais de conexina e canais de pannexina na insuficiência hepática aguda induzida pelo APAP, o que sugere um papel como alvos terapêuticos para fármacos.

Tissue homeostasis is controlled by a plethora of communication mechanisms. At the intercellular level, gap junctions allow the trafficking of small and hydrophilic messengers of less than 1.5 kilodalton between two adjacent cells. Gap junctions are built up by two hemichannels, which in turn are composed of six connexin (Cx) proteins. In liver, hepatocytes mainly produce Cx32, while non-parenchymal hepatic cells predominantly harbor Cx43. Hepatic gap junctions are known to underlie several liver-specific functions, such as albumin secretion and xenobiotic metabolism. In the last decade, it has become clear that the connexin hemichannels are not only precursors of gap junctions, but that they can also provide a communication pathway, albeit between the cytosol of individual cells and their extracellular environment. In addition, a novel class of connexin-like proteins has been identified, the pannexins (Panx), of which Panx1 is expressed in the liver. Pannexins gather in a configuration reminiscent of connexin hemichannels and also support extracellular signaling. Both connexin hemichannels and pannexin channels are believed to become preferably activated in pathological conditions and thereby to promote cell death and inflammation. The present doctoral project was set up to verify the hypothesis that this also holds true for liver disease, in particular acute liver failure. In a first instance, the hepatic connexin expression pattern was fully characterized in a mouse model of acute liver failure induced by acetaminophen (APAP). This revealed a switch from Cx32-to-Cx43 upon APAP-induced hepatotoxicity with de novo expression of Cx43 in hepatocytes. Subsequently, the functional relevance of enhanced Cx43 expression in acute liver failure was tested using Cx43-deficient mice. It was found that Cx43 has a protective effect, since liver APAP-induced injury became aggravated upon genetic ablation of Cx43. In parallel, a similar study was set up using Cx32 knock-out mice, showing no major differences in the extent of APAP-induced hepatotoxicity compared to wild type animals. Since connexin-deficient animals do not allow to discriminate between gap junction communication and connexin hemichannel signaling, a next set of experiments relied on the use of claimed peptide-based inhibitors of Cx32 and Cx43 hemichannels, namely TAT-Gap24 and TAT-Gap19, respectively. Following testing of their specificity and efficiency in vitro, both peptides were administered to APAPoverdosed mice. While TAT-Gap24 clearly reduced liver cell death and inflammation, TAT-Gap19 only had marginal effects on liver injury. Furthermore, co-treatment of APAPintoxicated mice with both peptides revealed an additive effect in lowering liver injury. A final study was focused on elucidating the hepatic expression and role of Panx1 in APAPinduced hepatotoxicity using the Panx1 inhibiting peptide 10Panx1. It was found that inhibition of Panx1 channels counteracts the clinical features of APAP-triggered hepatotoxicity, in particular related to cell death and inflammation. Overall, this doctoral 10 project shows for the first time the involvement of connexin hemichannels and pannexin channels in APAP-induced acute liver failure, which suggests a role as therapeutic drug targets.