Overexpression of ribonuclease inhibitor defines good prognosis and suppresses proliferation and metastasis in human colorectal cancer cells via PI3K/AKT pathway

Purpose: We aim to evaluate the diagnostic value of ribonuclease inhibitor (RI) in colorectal cancer (CRC) and investigate the important role of RI in cell growth and metastasis of CRC. Methods/patients: In this study, the expression of RI was evaluated in human CRC samples with different histological grade and the association between RI expression and clinicopathological parameters was investigated. Furthermore, the exogenous RI gene was introduced into human HT29 CRC cells and the effects of RI on cell proliferation and metastasis were determined in vitro. The PI3K/Akt signaling pathway and some related protein molecules were detected. Results: RI is downregulated in CRC tissues compared to adjacent normal tissues and its expression is inversely associated with histological grade, pathological stage, and venous invasion, respectively. Multivariate analysis showed that RI expression was an independent prognostic factor for overall survival. In addition, the exogenous overexpression of RI reduced the proliferation and migration of HT29 CRC cell line in vitro by inhibiting the PI3K/Akt signaling pathway and suppressing the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and upregulating phosphatase and tensin homolog (PTEN). Conclusions: RI represents an important predictor of progression in patients with CRC and suppresses proliferation and metastasis in CRC cells through inhibiting PI3K/AkT pathway (AU)

No disponible

Expression of epidermal growth factors and a tight junction protein in the nasal mucosa of patients with chronic hypertrophic rhinitis

Background: ErbB family receptors and tight junction proteins participate in the pathologic process including tissue remodelling of inflammatory diseases in the upper and lower respiratory tracts. This study aimed at investigating the expressions of erbB1, 2, 3, 4, and a tight junction protein, claudin-1, in the nasal mucosa of patients with chronic hypertrophic rhinitis. Methods: Inferior turbinates were collected from 10 turbinectomised patients with allergic and non-allergic chronic hypertrophic rhinitis. The expressions of erbB1, 2, 3, 4, and claudin-1 were examined by fluorescence immunohistochemistry and by quantitative real-time transcription-polymerase chain reaction (qRT-PCR). Results: All erbB1-4 and claudin-1 were detected, and mainly localised in the epithelial cells and nasal gland cells. The immunoreactivity for claudin-1 was positively correlated with the expressions of erbB1, 2 and 4, but negatively correlated with that of erbB3. The mRNA expressions of erbB1, 2 and 4 were positively correlated with one another, whereas the expression of erbB3 showed negative correlation with the immunoreactivity for erbB2 and 4. Conclusions: These results suggest a possible participation of erbBs and claudin-1 in tissue remodelling in chronic hypertrophic rhinitis (AU)

Análisis de sondas y técnicas de amplificación de genes para el diagnóstico y control del tratamiento en la lepra infantil / No disponible

Se detectaron secuencias de ácidos nucleídos de Mycobacterium leprae utilizando sonda de genes que hibridan con secuencias diana RNA ribosómicas (16SrRNA), DNA ribosómico (16S rDNA) y técnicas de amplificación de genes (PCR) en lesiones cutáneas de pacientes de lepra infantil y el efecto del tratamiento farmacológico sobre estas técnicas. Se incluyeron en este trabajo 80 pacientes de lepra infantil. La mayoría de caso (79%) tenía entre 9-16 años. Se dividieron los caso en 3 grupos de acuerdo con el tratamiento, sin tratar (30) en tratamiento (39) y al finalizar el tratamiento (20). Se efectuaron exámenes clínicos y baciloscopia para la detección de bacilos ácido-alcohol resistente BAAR y de las biopsias se extrajeron y fraccionaron los ácidos nucleídos. Se detectó rRNA y rDNA 16S específico de M.leprae mediante hibridación con sondas, mientras que la secuencia del gen 36 kDa se detectó mediante técnicas de amplificación de genes (PCR). Los casos se clasificaron en lepra paucibacilar (PB) y multibacilar (MB) de acuerdo a los criterios de la OMS (1988). La positividad del rRNA 16S en los casos PB disminuyó desde 60% en los casos no tratados al 10,5% después de 4-8 meses de tratamietno, mientras el rDNA 16S disminuyó del 50% al 21% y con PCR desde 70% al 36.8% para la misma muestra y todos se negativizaron al año. La misma tendencia se observó en el grupo MB, donde la positividad en los casos baciloscopia positivos decreció desde el 100% al 56,2% con rRNA 16S y al 42,8% con rDNA 16S y PCR respectivamente, después de los 9-12 meses de tratamiento, siendo a los 2 años todos negativos, menos un caso que permaneció positivo con PCR. Los casos MB con baciloscopia negativa siguieron la misma tendencia, 100% de positividad detectado por rRNA 16S y PCR, 75% detectado por rDNA 16S y decreció hasta la negatividad a los 9-12 meses de tratamiento. Estos resultados apuntan hacia un posible potencial de estas técnicas como apoyo molecular para el diagnóstico de casos MB baciloscopia negativos y el control de la respuesta al tratamiento. Sin embargo, la prueba definitiva exige ser valorada mediante estudios prospectivos de seguimiento

Nucleic acid sequences of Mycobacterium leprae were detected using gene probes hybridizing with targeting ribosomal RNA (16S rRNA), ribosomal DNA (16s rDNA) and gene amplification techniques (PCR) in skin lesion of paediatric leprosy patients and the effect of treatment on the by these methods. Eighty paediatric leprosy patients were included in the study. Most cases (79%) were between 9 and 16 years of age. Cases were divided into three groups according to treatment status, viz- untreated (30=, undergoing treatment (30), and at the end to treatment (20). Clinical and slit smear examination for acid fast bacilli (AFB) was performed and nucleic acids were extracted and fractionated form skin biopsies. M. leprae specific 16S rRNA and 16S rDNA was detected by hybridization with gene probes whereas the 36kKa gene sequence was detected by a gene amplification assay (PCR). The cases were classified as paucibacillary (PB) and multibacillary (MB) by the standard criteria of WHO (1988). Positivity of 16S rRNA in PB cases decreased from 60% in untreated to 10.5% after 4-8 months of treatment whereas for 16S rDNA, it decreased from 50% to 21% for PCR form 70% to 36.8% for the same specimen, and all became negative at 1 year. Similar trends were seen in MB cases where positivity in smear positive untreated cases decreased from 100% to 56.2% with 16S rRNA and 42.8% with 16S rDNA and PCR, respectively, after 9-12 months of treatment and all became negative at 2 years except one case which remained positive with PCR. Similar results were observed in smear negative MB cases, 100% positivity detected by 16S r RNA and PCR, 75% detected by 16S rDNA decreased to zero after 9-12 months of therapy. This study suggests the potential usefulness of gene probes targeting 16S rRNA and 16S rDNA and PCR as supportive molecular tools for diagnosis of smear negative evolving MB disease and also monitoring the response to treatment, these observation however, needs to be validated in prospective follow up studies

Ensayo colorimétrico de hibridación en microplacas para la detección de Mycobacterium leprae 16s rRNA en muestras clínicas

Se ha desarrollado un ensayo colorimétrico de hibridación en microplacas para simplificar la detección de Mycobacterium leprae en muestras clínicas. La técnica detecta los productos amplificados por un ensayo muy sensible RT-PCR con diana sobre una secuencia especie-específica del rRNA 16S bacteriano. El test detectó hasta 10 bacilos aislados de los nódulos linfáticos de ratones desnudos infectados o biopsias cutáneas humanas. La sensibilidad para el diagnóstico en nuestras clínicas se evaluó en 58 biopsias cutáneas de 58 pacientes de lepra sin tratar. El ensayo detectó amplificados RT-PCR de M. leprae en el 100 por ciento de las biopsias de pacientes con lepra multibacilar y el 80 por ciento de biopsias de pacientes paucibacilares, con una sensibilidad total de 91.3 por ciento. El test resultó ser muy específico ya que no se detectaron amplificaciones en las biopsias de pacientes normales o afectados de otras enfermedades distintas a la lepra. La variante colorimétrica es más rápido, sensible y simplifica la detección de los amplificados RT-PCR comparado con el análisis por Southern blot. Puede ser útil para el diagnóstico de los casos difíciles de lepra y como el RNA se degrada rápidamente después de la inactivación celular siendo útil para la evaluación de la respuesta al tratamiento y distinción de recidivas de reacción (AU)

Asthma attack severity and urinary concentration of Eosinophil X protein in children

Objective: Determination of the urinary concentration of eosinophil protein X (U-EPX) may objectively predict the severity and activity of asthma in children. Methods: Concentrations of U-EPX in 80 non- atopic asthmatic children were compared with those in 25 healthy control children. The patients were studied during attacks and two weeks later. The severity of asthma attacks was determined according to a pre-existing score. U-EPX was measured by the specific radioimmunoassay technique (Pharmacia, Uppsala, Sweden). This measurement was correlated with the clinical and radiological investigations as well as with other variables such as blood oxygen saturation, peak expiratory rate and eosinophil count. Results: U-EPX concentrations were significantly higher in all asthmatic children during attacks (139.6 ± 11.7 μg/mmol of creatinine) than those in the control group (35.3 ± 6.2 μg/mmol of creatinine) (p < 0.001). Two weeks after resolution of the exacerbation, U-EPX significantly decreased (66.5 ± 9.3 μg/mmol of creatinine) (p < 0.001). U-EPX concentrations were highest in patients with severe attacks (191.5 ± 11.3 μg/mmol of creatinine) (p < 0.001). No statistically significant differences were found between mild (88.2 ± 7.2 μg/mmol of creatinine) and moderate attacks (119.6 ± 8.5 μg/mmol of creatinine). At the two-week follow-up, U-EPX concentrations in patients with mild or moderate attacks was similar to those in controls but were persistently elevated in the subgroup with severe attacks (103.8 ± 9.4 μg/mmol of creatinine) (p < 0.001). No significant correlation was found between U-EPX concentrations and blood oxygen saturation, peak expiratory rate or eosinophil count. Conclusion: A statistically significant correlation was found between U-EPX concentrations and the severity of attacks in asthmatic children. This substance could be useful in quantifying bronchial inflammation. This result could further be used as a marker of severity of disease exacerbation and would not only facilitate early diagnosis and staging of inflammatory and allergic disorders but would also allow therapy and interventions to be monitored (AU)

Objetivo: La determinación de la concentración urinaria de proteína X de los eosinófilos (U-EPX) puede predecir de manera objetiva la intensidad y la actividad del asma infantil. Métodos: Se compararon las concentraciones de U-EPX de 80 niños asmáticos no atópicos con las de 25 niños de control sanos. Se estudió a los pacientes durante las crisis y dos semanas más tarde. La intensidad de las crisis asmáticas se determinó con arreglo a una puntuación previa. La U-EPX se midió mediante una técnica específica de radioinmunoanálisis (Pharamacia, Uppsala, Suecia). Esta medición se correlacionó con los estudios clínicos y radiológicos y con otras variables, como la saturación sanguínea de oxígeno, la frecuencia espiratoria máxima y el recuento de eosinófilos. Resultados: Las concentraciones de U-EPX fueron significativamente mayores en todos los niños asmáticos durante las crisis (139,6 ñ 11,7 g por mmol de creatinina) que en el grupo de control (35,3 ñ 6,2 g/mmol de creatinina) (p < 0,001). Dos semanas después de la resolución de la reagudización, la U-EPX disminuyó de modo significativo (66,5 ñ 9,3 g/mmol de creatinina) (p < 0,001). Las concentraciones de U-EPX fueron máximas en los pacientes con crisis graves (191,5 ñ 11,3 g/mmol de creatinina) (p < 0,001). No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre las crisis leves (88,2 ñ 7,2 g/mmol de creatinina) y las moderadas (119,6 ñ 8,5 g/mmol de creatinina). A las dos semanas de seguimiento, las concentraciones de U-EPX de los pacientes con crisis leves o moderadas eran parecidas a las de los testigos, pero se mantenían persistentemente elevadas en el subgrupo con crisis graves (103,8 ñ 9,4 g/mmol de creatinina) (p < 0,001). No hubo una correlación significativa entre las concentraciones de U-EPX y la saturación sanguínea de oxígeno, la frecuencia espiratoria máxima o el recuento de eosinófilos. Conclusión: Se observó una correlación estadísticamente significativa entre las concentraciones de U-EPX y la intensidad de las crisis de niños asmáticos. Esta sustancia podría ser útil para cuantificar la inflamación bronquial. Este resultado se podría emplear también como marcador del grado de reagudización de la enfermedad y no solo facilitaría un diagnóstico y una estadificación precoces de los trastornos alérgicos e inflamatorios, sino que permitiría también controlar las intervenciones y el tratamiento (AU)

Inmunoterapia sublingual con extracto de epitelio de gato. Experiencia personal / Sublingual immunotherapy with cat dander extract. Personal experience

El estudio Alergológica 92 demostró que el 19,2 por ciento de los pacientes con asma extrínseca estaban sensibilizados a epitelios, con un porcentaje de mayor convivencia con gatos, 18,1 por ciento en nuestro medio que en el resto de España, 11,9 por ciento. Otros estudios epidemiológicos sobre sensibilizaciones cutáneas, comprobó cómo el 21,45 de las madres de niños atópicos estaban más sensibilizadas al epitelio de gato que las madres de niños no atópicos, 1,9 por ciento.Muchos pacientes asmáticos extrínsecos sensibilizados a los ácaros del polvo doméstico, sometidos a inmunoterapia subcutánea convencional, no evolucionan lo favorablemente deseado, por la coexistencia de una sensibilización al epitelio de gato con o sin la presencia de gato. La inmunoterapia subcutánea con Feld 1 a dosis de mantenimiento de 13,2 g ha presentado reacciones adversas en 1,9 por ciento.El motivo del presente trabajo es estudiar la eficacia clínica de la inmunoterapia sublingual con extracto de epitelio de gato en pacientes monosensibilizados con rinitis perenne alérgica y/o asma bronquial.Para nuestro estudio el diseño estadístico usado ha sido el test de Wilcoxon para comparación intragrupo y el test de Mann-Whitney, para el estudio comparativo intergrupo. Se consideraba el test estadístico comparativo con p < 0,05. Se seleccionaron 40 pacientes monosensibilizados al epitelio de gato. Veinte de ellos recibieron la inmunoterapia sublingual quedando a una dosis acumulativa de 3,6 g de Feld 1, después de 1 año de inmunoterapia. Otros 20 recibieron placebo.Hicimos una valoración clínica de los síntomas, pruebas cutáneas, provocación nasal, determinación de IgE específica, IgG4 y proteína catiónica de eosinófilo.Los resultados se pueden ver en las tablas.Mientras que la IgG4, proteína catiónica de eosinófilo y las pruebas cutáneas no se modifican en el grupo activo después de 1 año de tratamiento, sí encontramos una mejoría en la sintomatología clínica con respecto al grupo control placebo. Por otro lado, la provocación nasal fue estadísticamente significativa en el grupo activo después de 1 año, requiriendo concentración de 100 unidades HEP en el 77,8 por ciento de los pacientes, cosa que no ocurría en el grupo control.De todo lo anteriormente expuesto podemos concluir lo siguiente: 1. Inmunoterapia sublingual al epitelio de gato en nuestro medio con nuestros pacientes ha mostrado una mejoría clínica significativa basándonos en los síntomas y en la provocación nasal.2. Esta mejoría clínica se correlaciona con el aumento de la IgG4.3. En nuestros 20 pacientes solamente uno presentó una reacción urticarial con prurito nasal, lo que significa que es bastante segura dicha inmunoterapia.4. La inmunoterapia sublingual al epitelio de gato constituye un tratamiento complementario de los pacientes polisensibilizados que están con inmunoterapia subcutánea a los dermatofagoides (AU)

Because cats are a common pet in many houses and tourist complexes in the Canary Islands, sensitization to cat epithelium is a frequent problem. A total of 19.2 % of patients with intrinsic asthma are sensitized to cat epithelium. In the Canary Islands, the percentage of sensitization among patients with a household cat is 18.1 %, which higher is higher than in the rest of Spain (11.9). Many patients with extrinsic asthma sensitized to house dust mites undergo conventional subcutaneous immunotherapy but evolution is unsatisfactory due to sensitization to cat epithelium (whether a cat is present or not). The aim of this study was to evaluate the clinical effectiveness of sublingual immunotherapy with extract of cat epithelium in monosensitized patients with perennial allergic rhinitis and/or bronchial asthma. Forty patients monosensitized to cat epithelium were selected. Of these, 20 were administered sublingual immunotherapy and another 20 received placebo. The following evaluation was carried out in both groups: in vivo and in vitro: symptom score, skin tests, nasal challenge with cat epithelium, specific IgE determination, specific IgG4 and eosinophilic cationic protein. After 1 year of treatment the cumulative dose was 3.6 mg of Felt 1, equivalent to 10 ng/drop. Duration of treatment was 365 days. Our conclusions, based on our patients in the Canary Islands, were the following: 1. Sublingual Feld 1 therapy is effective after 1 year of treatment. 2. There were no modifications in IgE, eosinophilic cationic protein or skin tests. 3. An increase in IgG4 occurred which was related to clinical improvement. 4. In general, tolerance was good, except in one patient who presented urticaria and sublingual pruritus. 5. In polysensitized patients, sublingual immunotherapy to cat epithelium is complementary to immunotherapy to dermatophagoides (AU)

Is serum ECP level helpful in determining discontinuation of inhaled corticosteroid therapy in asthmatic children?

BACKGROUND: Serum eosinophil cationic protein (ECP) has been promoted as a direct marker of eosinophilic inflammation of the airways in patients with asthma. However, its role in monitoring disease activity and management of inhaled corticosteroid (ICS) therapy is not well defined. METHODS: We determined serum ECP (s-ECP) levels in 95 children (mean +/- SD age, 6.2 +/- 3.9 years) with asthma. At the time of measurements, 34 out of 95 children were symptomatic whereas 61 were in stable condition; and 56 of 95 patients were on maintenance ICS therapy. ICS prophylaxis was withdrawn in 16 of those 56 patients who remained asymptomatic with a dose of 100 micrograms/day of budesonide for 8 weeks. Eight out of these 16 children had to restart ICS therapy within the following 12 weeks, while the remaining 8 children continued to be asymptomatic within the same period. RESULTS: ECP values and number of patients with a high ECP level (> or = 15 micrograms/L) were significantly higher in the symptomatic group (p = 0.01 and p = 0.006, respectively). Also, ECP levels were significantly lower in the group who achieved clinical remission (n = 16) in which ICS therapy was withdrawn when compared with those who needed to continue ICS prophylaxis. On the other hand, no difference was observed in the comparison of the ECP levels of children who had to restart ICS therapy and those who did not. CONCLUSION: Our results suggest that, although the determination of s-ECP levels are in accordance with clinical evaluation of disease activity, it is not useful in determining discontinuation of ICS therapy (AU)

Antecedentes: la proteína catiónica eosinófila (PCE) en suero ha sido propuesta como un marcador directo de la inflamación por eosinófilos de las vías aéreas en los pacientes que padecen asma.Sin embargo, su utilidad en la monitorización de la actividad de la enfermedad y el tratamiento de corticoides inhalados (CI) no ha sido bien definida.Métodos: determinamos la concentración sérica de PCE (PCE-s) en 95 niños asmáticos (edad media ñ DE 6.2 ñ 3.9 años). En el momento de realizar las mediciones, 34 de los 95 niños estuvieron sintomáticos y 61 estables; 56 de los 95 pacientes estaban recibiendo tratamiento de mantenimiento con CI. Se retiró la profilaxis de CI en 16 de los 56 pacientes que permanecieron asintomáticos con una dosis de 100 mg/día de budenosida durante ocho semanas. Ocho de estos 16 niños tuvieron que reanudar el tratamiento con CI en las 12 semanas siguientes, mientras que los ocho restantes permanecieron asintomáticos en el mismo período.Resultados: los valores de la PCE y el número de pacientes que tuvieron un nivel elevado de PCE ( 15 mg/L) fueron significativamente mayores en el grupo de pacientes sintomáticos (p = 0,01 y p = 0,006, respectivamente). Los niveles de PCE fueron significativamente más bajos en el grupo que lograron la remisión clínica (n = 16) y pudieron interrumpir el tratamiento de CI, comparado con los pacientes que precisaron el tratamiento profiláctico de CI. Por otro lado, no se observaron diferencias en los niveles de PCE de los niños que tuvieron que reanudar el tratamiento con CI y los niños que no tuvieron que hacerlo.Conclusión: nuestros resultados sugieren que, aunque los niveles de PCE-s corresponden a la evaluación clínica de la actividad de la enfermedad, éste no es un marcador útil para determinar cuando puede interrumpirse el tratamiento con CI. (AU)

¿Qué lugar tiene la medición de la proteína catiónica de los eosinófilos (ECP) en la valoración de la gravedad del asma? / What role does eosinophil cationic protein have in the evaluation of asthma severity?

El resurgimiento del concepto del asma como enfermedad inflamatoria crónica ha conducido al desarrollo de métodos para la monitorización y el control del proceso inflamatorio subyacente. Siendo el eosinófilo uno de los protagonistas principales en dicho proceso, el control de las proteínas por él liberadas cuando se activa (en concreto la ECP) podría aportar valiosa información con este propósito. No obstante, la gran complejidad de la inflamación asmática obliga a tener en cuenta una serie de consideraciones, con el fin de no atribuir ni esperar de la ECP información que no pueda proporcionar. La ECP se ha utilizado en el diagnóstico del asma, en el pronóstico de lactantes con sibilancias, como marcador de la exposición al alergeno, para evaluar los resultados de los tests de provocación, con la gravedad clínica y funcional del asma, para controlar el efecto de diferentes tratamientos antiinflamatorios así como para monitorizar el cumplimiento de dichos tratamientos, etc. Sin embargo, es necesario tener en cuenta que este marcador es un reflejo de la activación eosinofílica, sin precisar dónde dicha activación se ha producido y, así, hay estudios que documentan incrementos de la ECP en relación con otras condiciones aparte del asma (rinitis, dermatitis atópica, tabaquismo materno, parasitosis, atopia en sí misma, etc.). Por otra parte, existe un cierto solapamiento de los valores de ECP de pacientes con enfermedad activa y de controles normales. Incluso pacientes con formas no leves de asma, en ocasiones muestran valores de ECP normales, lo que podría reflejar que, en ciertos casos, la inflamación eosinofílica puede no ser un factor relevante o, al menos, predominante. Por otra parte, en el control del asma, la determinación de ECP en esputo inducido podría tener mayor precisión diagnóstica, en tanto podría ser un reflejo más exacto de la inflamación existente a nivel local, aunque este es un hecho que precisa posterior comprobación. La mayor utilidad de la ECP estaría en el seguimiento y control individualizado de cada paciente concreto. En cualquier caso, y puesto que la inflamación subyacente del asma es un proceso muy complejo, su control requiere una adecuada combinación de diferentes marcadores, lo cual previsiblemente mejorará su fidelidad diagnóstica y pronóstica y permitirá un control más preciso de la inflamación asmática (AU)

The revival of the concept of asthma as being a chronic inflammatory disease has led to the development of methods to monitor and control the underlying inflammatory process. The eosinophil is one of the main protagonists in this process, the control of the proteins that are released by the eosinophil when it is activated (more specifically the ECP) could provide valuable information for this purpose. However, the great complexity of the asthmatic inflammation obliges us to take into account a series of considerations, aiming at nor attributing nor expecting information from the ECP that it cannot provide. The ECP has been used in the diagnosis of asthma, in the prognosis of wheezing infants, as a marker for the exposure to the allergen, to evaluate the results of the provocation tests, with the clinical and functional seriousness of asthma, to control the effect of different anti-inflammatory treatments as well as to monitor the performance of these treatment, etc. However, it is necessary to take into account the fact that this marker is a reflection of the activation of the eosinophil, without specifying where the said activation has been produced and therefore there are studies that document increases of the ECP in relation to other conditions besides asthma (rhinitis, atopic dermatitis, the mother's addiction to tobacco, parasitosis, athopia, etc.). On the other hand there is a certain overlapping of the ECP values of patients with the active illness and with normal controls. Even patients with strong signs of asthma on occasions show normal ECP values, which could reflect that, in some cases, the eosinophilic inflammation may not be a relevant factor or, at least, it isn't a predominant one. On the other hand, when the asthma is being controlled, the determination of the ECP in induced sputum, could have a more precise diagnosis, while it could be a more exact reflection of the inflammation that exists on a local level, although this is a fact that needs to be proved subsequently. The principal usefulness of the ECP is for the individual follow up and control of each specific patient. Whatever the case, and given that the underlying asthmatic inflammation is a very complex process, in order to control it, a suitable combination of different markers is needed, which predictably improves the reliability of the diagnosis and prognosis and allows for a more precise control of the asthmatic inflammation (AU)