Seleção de receptoras em um programa de transferência de embriões (pive) em bovinos no nordeste do Brasil / Selection procedure in embryo transfer program in cattle at northeastern Brazil

A seleção de receptoras constitui-se em uma das principais etapas de um programa de transferência de embriões (TE), influenciando substancialmente os resultados econômicos da aplicação dessa biotécnica. Considerando os desafios enfrentados para obtenção deum número de receptoras suficiente para atender à demanda de um programa de TE em bovinos, o presente estudo foi realizado com o objetivo de ampliar os elementos utilizados como critérios de pré-seleção dessas matrizes, visando incrementar o número de fêmeas disponíveis para a etapa de sincronização de ciclo estral. Para tanto, 1017 fêmeas das raças Girolando, Gir Leiteiro e Nelore,oriundas de propriedades localizadas no Nordeste brasileiro, foram avaliadas por meio de exames ginecológicos, desde as etapas preliminares de seleção, até ocorrência de parto a termo; identificando-se dois grupos experimentais,representados pelos animais que apresentavam folículos maduros ou corpos lúteos por ocasião da pré-seleção. Os resultados obtidos revelaram que as matrizes que apresentam folículos maduros por ocasião do exame ginecológico preliminar, de admissão no programa de transferência de embriões na condição dereceptoras, apresentaram rendimentos finais equivalentes aos daquelas admitidas pela presença de corpo lúteo no mesmo momento, independentemente do ovário (direito ou esquerdo). O estudo demonstrou, ainda, que e mbriões em estádios de blastocisto (inicial, tipicamente caracterizado ou expandido) devem ser prioritariamente selecionados para transferência.

Recipent selection comprises an important step for embryo transfer (ET) programs, affecting significantly the economic results of that biotechnology. Considering the challenges for obtaining recipient cows in a number big enough to attend the demand of an ET program, this research was carried out with the aim of to expand criteria of recipient pre-selection, in order to increase the number of females disposable for estrum cycle synchronization. Then, 1017 cows of different breeds (Girolando, GirLeiteiro and Nelore) from farms located in Brazilian Northeast, where evaluated by gynecological exams since preliminary phases of selection up to calving birth, divided into experimental groups represented by females presenting mature follicles or corpus luteal at pre-selection. Results obtained have shown similar final yields for the two experimental groups, revealing that both ovarian structures should be used as criteria for including matrices in ET programs. In addition, embryos in stage of blastocyst (Initial, completely characterized or expanded) must be preferred for ET.

Seleção de receptoras em um programa de transferência de embriões (pive) em bovinos no nordeste do Brasil / Selection procedure in embryo transfer program in cattle at northeastern Brazil

A seleção de receptoras constitui-se em uma das principais etapas de um programa de transferência de embriões (TE), influenciando substancialmente os resultados econômicos da aplicação dessa biotécnica. Considerando os desafios enfrentados para obtenção deum número de receptoras suficiente para atender à demanda de um programa de TE em bovinos, o presente estudo foi realizado com o objetivo de ampliar os elementos utilizados como critérios de pré-seleção dessas matrizes, visando incrementar o número de fêmeas disponíveis para a etapa de sincronização de ciclo estral. Para tanto, 1017 fêmeas das raças Girolando, Gir Leiteiro e Nelore,oriundas de propriedades localizadas no Nordeste brasileiro, foram avaliadas por meio de exames ginecológicos, desde as etapas preliminares de seleção, até ocorrência de parto a termo; identificando-se dois grupos experimentais,representados pelos animais que apresentavam folículos maduros ou corpos lúteos por ocasião da pré-seleção. Os resultados obtidos revelaram que as matrizes que apresentam folículos maduros por ocasião do exame ginecológico preliminar, de admissão no programa de transferência de embriões na condição dereceptoras, apresentaram rendimentos finais equivalentes aos daquelas admitidas pela presença de corpo lúteo no mesmo momento, independentemente do ovário (direito ou esquerdo). O estudo demonstrou, ainda, que e mbriões em estádios de blastocisto (inicial, tipicamente caracterizado ou expandido) devem ser prioritariamente selecionados para transferência.(AU)

Recipent selection comprises an important step for embryo transfer (ET) programs, affecting significantly the economic results of that biotechnology. Considering the challenges for obtaining recipient cows in a number big enough to attend the demand of an ET program, this research was carried out with the aim of to expand criteria of recipient pre-selection, in order to increase the number of females disposable for estrum cycle synchronization. Then, 1017 cows of different breeds (Girolando, GirLeiteiro and Nelore) from farms located in Brazilian Northeast, where evaluated by gynecological exams since preliminary phases of selection up to calving birth, divided into experimental groups represented by females presenting mature follicles or corpus luteal at pre-selection. Results obtained have shown similar final yields for the two experimental groups, revealing that both ovarian structures should be used as criteria for including matrices in ET programs. In addition, embryos in stage of blastocyst (Initial, completely characterized or expanded) must be preferred for ET.(AU)

Utilização do cultivo in vitro de folículos pré-antrais suínos inclusos em tecido ovariano (in situ) como modelo de avaliação da eficiência de medicamentos homeopáticos na foliculogênese inicial / In situ cultured preantral follicles is a useful model to evaluate the effect of homeopathy medicine on early folliculogenesis

Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito dos medicamentos homeopáticos (Pulsatilla nigricans e hormônio folículo estimulante homeopático - FSH) e um complexo homeopático (Bos Stress Fertilis) na foliculogênese inicial, utilizando o cultivo in vitro de folículos pré-antrais suínos como modelo in vitro. Para tanto, fragmentos ovarianos foram cultivados por um ou sete dias em α-MEM+ na ausência (controle cultivado) ou presença de FSH homeopático (6 cH), Pulsatilla (6 CH), Bos Stress Fertilis (6 CH), álcool cereal (50% - v/v) ou FSH recombinante (50 ng/ml) adicionados diariamente. Os fragmentos ovarianos não cultivados (controle fresco) ou cultivados por um e sete dias foram processados para histologia clássica. Somente o composto homeopático Bos Stress Fertilis foi eficiente em manter o percentual de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo semelhante ao controle não cultivado e α-MEM+. Em relação ao crescimento folicular, somente a adição de FSH homeopático aumentou o diâmetro folicular quando comparado ao controle não cultivado e α-MEM+ após um dia de cultivo. Dessa forma, pode-se concluir que a adição dos medicamentos homeopáticos Bos Stress fertilis e FSH homeopático (6 CH) melhoraram, respectivamente, a sobrevivência e o crescimento in vitro de folículos pré-antrais suínos inclusos em fragmentos de tecido ovariano.

This study investigated the effect of homeopathic medicine (Pulsatilla nigricans and homeopathic follicle stimulating hormone - FSH) and the complex (Bos Stress Fertilis) on the initial folliculogenesis, using the in vitro culture of preantral follicles as in vitro model. For this, swine ovarian fragments were cultured for one or seven days in α-MEM+ in the absence (cultured control) or presence of homeopathic FSH (6 cH), Pulsatilla (6 CH), Bos Stress Fertilis (6 CH), grain alcohol (50% v / v) or recombinant FSH (50 ng / ml) added daily. Uncultured ovarian fragments (fresh control) or cultured for one and seven days were processed for classical histology. Only the homeopathic complex Bos Stress Fertilis maintained the percentage of follicular survival after seven days of culture in relation to the uncultured control and α-MEM+. Regarding follicular growth, only the addition of homeopathic FSH increased the follicular diameter when compared to the uncultured control and a-MEM+. Thus, it can be concluded that the addition of the homeopathic remedies Bos Stress fertilis and homeopathic FSH (6 CH) improved, respectively, survival and in vitro growth of swine preantral follicles included in ovarian tissue.

Utilização do cultivo in vitro de folículos pré-antrais suínos inclusos em tecido ovariano (in situ) como modelo de avaliação da eficiência de medicamentos homeopáticos na foliculogênese inicial / In situ cultured preantral follicles is a useful model to evaluate the effect of homeopathy medicine on early folliculogenesis

Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito dos medicamentos homeopáticos (Pulsatilla nigricans e hormônio folículo estimulante homeopático - FSH) e um complexo homeopático (Bos Stress Fertilis) na foliculogênese inicial, utilizando o cultivo in vitro de folículos pré-antrais suínos como modelo in vitro. Para tanto, fragmentos ovarianos foram cultivados por um ou sete dias em α-MEM+ na ausência (controle cultivado) ou presença de FSH homeopático (6 cH), Pulsatilla (6 CH), Bos Stress Fertilis (6 CH), álcool cereal (50% - v/v) ou FSH recombinante (50 ng/ml) adicionados diariamente. Os fragmentos ovarianos não cultivados (controle fresco) ou cultivados por um e sete dias foram processados para histologia clássica. Somente o composto homeopático Bos Stress Fertilis foi eficiente em manter o percentual de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo semelhante ao controle não cultivado e α-MEM+. Em relação ao crescimento folicular, somente a adição de FSH homeopático aumentou o diâmetro folicular quando comparado ao controle não cultivado e α-MEM+ após um dia de cultivo. Dessa forma, pode-se concluir que a adição dos medicamentos homeopáticos Bos Stress fertilis e FSH homeopático (6 CH) melhoraram, respectivamente, a sobrevivência e o crescimento in vitro de folículos pré-antrais suínos inclusos em fragmentos de tecido ovariano.(AU)

This study investigated the effect of homeopathic medicine (Pulsatilla nigricans and homeopathic follicle stimulating hormone - FSH) and the complex (Bos Stress Fertilis) on the initial folliculogenesis, using the in vitro culture of preantral follicles as in vitro model. For this, swine ovarian fragments were cultured for one or seven days in α-MEM+ in the absence (cultured control) or presence of homeopathic FSH (6 cH), Pulsatilla (6 CH), Bos Stress Fertilis (6 CH), grain alcohol (50% v / v) or recombinant FSH (50 ng / ml) added daily. Uncultured ovarian fragments (fresh control) or cultured for one and seven days were processed for classical histology. Only the homeopathic complex Bos Stress Fertilis maintained the percentage of follicular survival after seven days of culture in relation to the uncultured control and α-MEM+. Regarding follicular growth, only the addition of homeopathic FSH increased the follicular diameter when compared to the uncultured control and a-MEM+. Thus, it can be concluded that the addition of the homeopathic remedies Bos Stress fertilis and homeopathic FSH (6 CH) improved, respectively, survival and in vitro growth of swine preantral follicles included in ovarian tissue.(AU)

Toxicity effect of Auxemma oncocalyx fraction and its active principle oncocalyxone A on in vitro culture of caprine secondary follicles and in vitro oocyte maturation / Efeito da toxicidade da fração da Auxemma oncocalyx e seu princípio ativo oncocalyxona A no cultivo in vitro de folículos secundários e na maturação in vitro de oócitos de caprinos

The extract of Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) and its main component, oncocalyxone A (onco A), possess anti-tumoral activity that may affect fertility. There is limited literature on the action of these substances regarding caprine folliculogenesis. In this study, we evaluated the effect of A. oncocaly and onco A on the in vitro culture of isolated secondary follicles (Experiment 1) and on the in vitro maturation (IVM) of oocytes from caprine antral follicles grown in vivo (Experiment 2). Isolated secondary follicles were distributed in six groups: the non-cultured control was immediately fixed in 4% paraformaldehyde. The remaining follicles were cultured for 7 days in α-minimal essential medium (α-MEM+ ) alone (control) or with dimethyl sulfoxide (DMSO), doxorubicin (DXR), A. oncocalyx, or onco A. After culture, the follicles were evaluated for antrum formation, growth rate, apoptosis (TUNEL), cellular proliferation (PCNA), as well as the expression of BCL2 and BAX. In addition, cumulus oocyte complexes (COCs) were aspirated and allocated into five treatments for IVM: control, cultured only in maturation base medium (TCM 199+ ); or supplemented with DMSO; DXR; A. oncocalyx or onco A. After IVM, oocyte chromatin configuration and viability were assessed. After 7 days of culture, a reduction was noted in the percent of morphologically intact follicles, antrum formation, growth rate, and numbers of PCNApositive granulosa cells (P < 0.05). After culture, the DXR treatment showed a higher percent of TUNELpositive follicles and relative BAX:BCL2 mRNA ratio’s (P < 0.05). After IVM of the COCs, DXR, A. oncocalyx, and onco A treatments showed a greater percent (P < 0.05) of abnormal oocytes and a lower percent of viable oocytes as compared with the control group (P < 0.05)...

O extrato da Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) e seu componente, Oncocalyxona A (onco A), possui atividade antitumoral, podendo afetar a fertilidade. Entretanto, estudos sobre a ação dessas substâncias em relação à foliculogênese caprina são desconhecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da A. oncocalyx e onco A no cultivo in vitro de folículos secundários isolados (Experimento 1) e na maturação in vitro (MIV) de oócitos de folículos antrais caprinos crescidos in vivo (Experimento 2). Folículos secundários isolados foram distribuídos em seis grupos, em que o controle não-cultivado foi imediatamente fixado em paraformaldeído 4%. Os folículos restantes foram cultivados durante 7 dias em α-MEM+ sozinho (controle) ou suplementado com DMSO, doxorrubicina (DXR), A. oncocalyx ou onco A. Após o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à formação de antro, taxa de crescimento, apoptose (TUNEL) e proliferação celular (PCNA), bem como a expressão dos genes BCL2 e BAX. Além disso, os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram aspirados e distribuídos em cinco tratamentos para MIV: o controle em meio de maturação (TCM 199+), e os demais tratamentos suplementados com DMSO, DXR, A. oncocalyx ou onco A. Depois da MIV, a configuração da cromatina e viabilidade oocitária foram avaliadas. Após 7 dias de cultivo, observou-se redução na percentagem de folículos morfologicamente intactos, na formação de antro, na taxa de crescimento e no número de células PCNA positivas (P < 0,05). Depois do cultivo, no tratamento DXR foi observada maior percentagem de folículos TUNEL positivos (P < 0,05) e também aumento na taxa de RNAm BAX: BCL2 (P < 0,05). Após MIV dos CCOs, nos tratamentos com DXR, A. oncocalyx e onco A, observou-se maior (P < 0,05) percentagem de oócitos anormais e menor de oócitos viáveis quando comparados ao grupo controle (P < 0,05)...

Toxicity effect of Auxemma oncocalyx fraction and its active principle oncocalyxone A on in vitro culture of caprine secondary follicles and in vitro oocyte maturation / Efeito da toxicidade da fração da Auxemma oncocalyx e seu princípio ativo oncocalyxona A no cultivo in vitro de folículos secundários e na maturação in vitro de oócitos de caprinos

The extract of Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) and its main component, oncocalyxone A (onco A), possess anti-tumoral activity that may affect fertility. There is limited literature on the action of these substances regarding caprine folliculogenesis. In this study, we evaluated the effect of A. oncocaly and onco A on the in vitro culture of isolated secondary follicles (Experiment 1) and on the in vitro maturation (IVM) of oocytes from caprine antral follicles grown in vivo (Experiment 2). Isolated secondary follicles were distributed in six groups: the non-cultured control was immediately fixed in 4% paraformaldehyde. The remaining follicles were cultured for 7 days in α-minimal essential medium (α-MEM+ ) alone (control) or with dimethyl sulfoxide (DMSO), doxorubicin (DXR), A. oncocalyx, or onco A. After culture, the follicles were evaluated for antrum formation, growth rate, apoptosis (TUNEL), cellular proliferation (PCNA), as well as the expression of BCL2 and BAX. In addition, cumulus oocyte complexes (COCs) were aspirated and allocated into five treatments for IVM: control, cultured only in maturation base medium (TCM 199+ ); or supplemented with DMSO; DXR; A. oncocalyx or onco A. After IVM, oocyte chromatin configuration and viability were assessed. After 7 days of culture, a reduction was noted in the percent of morphologically intact follicles, antrum formation, growth rate, and numbers of PCNApositive granulosa cells (P < 0.05). After culture, the DXR treatment showed a higher percent of TUNELpositive follicles and relative BAX:BCL2 mRNA ratios (P < 0.05). After IVM of the COCs, DXR, A. oncocalyx, and onco A treatments showed a greater percent (P < 0.05) of abnormal oocytes and a lower percent of viable oocytes as compared with the control group (P < 0.05)...(AU)

O extrato da Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) e seu componente, Oncocalyxona A (onco A), possui atividade antitumoral, podendo afetar a fertilidade. Entretanto, estudos sobre a ação dessas substâncias em relação à foliculogênese caprina são desconhecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da A. oncocalyx e onco A no cultivo in vitro de folículos secundários isolados (Experimento 1) e na maturação in vitro (MIV) de oócitos de folículos antrais caprinos crescidos in vivo (Experimento 2). Folículos secundários isolados foram distribuídos em seis grupos, em que o controle não-cultivado foi imediatamente fixado em paraformaldeído 4%. Os folículos restantes foram cultivados durante 7 dias em α-MEM+ sozinho (controle) ou suplementado com DMSO, doxorrubicina (DXR), A. oncocalyx ou onco A. Após o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à formação de antro, taxa de crescimento, apoptose (TUNEL) e proliferação celular (PCNA), bem como a expressão dos genes BCL2 e BAX. Além disso, os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram aspirados e distribuídos em cinco tratamentos para MIV: o controle em meio de maturação (TCM 199+), e os demais tratamentos suplementados com DMSO, DXR, A. oncocalyx ou onco A. Depois da MIV, a configuração da cromatina e viabilidade oocitária foram avaliadas. Após 7 dias de cultivo, observou-se redução na percentagem de folículos morfologicamente intactos, na formação de antro, na taxa de crescimento e no número de células PCNA positivas (P < 0,05). Depois do cultivo, no tratamento DXR foi observada maior percentagem de folículos TUNEL positivos (P < 0,05) e também aumento na taxa de RNAm BAX: BCL2 (P < 0,05). Após MIV dos CCOs, nos tratamentos com DXR, A. oncocalyx e onco A, observou-se maior (P < 0,05) percentagem de oócitos anormais e menor de oócitos viáveis quando comparados ao grupo controle (P < 0,05)...(AU)

Sensitivity and specificity of indirect ELISA for the detection of antibody titers against BVDV from beef cattle raised in Pará State / Sensibilidade e especificidade do ELISA indireto na detecção de anticorpos anti-BVDV em bovinos de corte criados no Estado do Pará

The aims of this study were to establish the prevalence of anti-bovine viral diarrhea virus (BVDV)antibodies (Ab) in beef cattle raised in Pará state, to compare the prevalence of seropositive animals toBVDV using a commercial indirect enzyme-linked immunosorbent assay kit (iELISA) and the virusneutralization (VN) test, and finally, to determine the sensitivity (Se) and specificity (Sp) of the iELISAfor the detection of anti-BVDV Ab using VN as a gold standard. A total of 400 serum blood samplesfrom Nelore cows aged at least 24 months from five farms in the Pará state from two mesoregions(Metropolitan Region of Belem and Northeast of Pará) were analyzed. All animals were vaccinatedagainst brucellosis and foot-and-mouth disease. The examination of anti-BVDV Ab with VN wasperformed in the Laboratory of Bovine Viruses of the Biological Institute of Sao Paulo as described in theManual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. For VN, bovine kidney epithelial cellsfrom the Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) strain were used. The determinations of anti-BVDVAb were performed with the iELISA test at the Laboratory of Immunology and Microbiology of theFederal Rural University of Amazonia according to the manufacturers recommendations. The resultswere classified as follows: (a) correct positive diagnosis, (b) incorrect positive diagnosis, (c) correctnegative diagnosis, and (d) incorrect negative diagnosis, according to the results obtained from VN.From the values obtained from VN and iELISA, Se [(a ÷ a + d) × 100], Sp [(c ÷ c + b) × 100], positivepredictive value [(a ÷ a + B) × 100], and negative predictive value [(c ÷ c + d) × 100] were calculatedfor iELISA. The frequencies (%) of seropositive animals were determined and compared both betweenthe different tests (iELISA and VN) and between the different farms (1, 2, 3, 4, and 5). The statisticalanalysis was performed with a significance level of 5%...(AU)

Para se estabelecer a prevalência de anticorpos (Ac) anti-BVDV em rebanhos bovinos de corte noEstado do Pará e comparar a prevalência de animais soropositivos para o BVDV utilizando-se umkit comercial de ELISA-I (“Enzyme-linked Immunosorbent Assay” indireto) frente ao teste de VN(virusneutralização) e determinar a Se (sensibilidade) e Sp (especificidade) do ELISA-I para detecçãode Ac anti-BVDV frente a VN, foram analisadas 400 amostras de soros sanguíneos de vacas Nelorecom idade mínima superior a 24 meses, vacinadas contra brucelose e febre aftosa, provenientes de cincofazendas no estado do Pará, localizadas em duas Mesorregiões (Metropolitana de Belém e do NordesteParaense). A pesquisa de Ac anti-BVDV determinados pela VN foi realizada no Laboratório de Virosesde Bovídeos do Instituto Biológico de São Paulo, conforme descrito no Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals. Foram utilizadas células epiteliais de rim bovino da linhagem MadinDarby Bovine Kidney MDBK). Já as determinações dos Ac anti-BVDV pelo ELISA-I foram realizadasno Laboratório de Imunologia e Microbiologia da Universidade Federal Rural da Amazônia, conformerecomendações do fabricante. Os resultados verificados foram classificados como diagnóstico positivocorreto (a), diagnóstico positivo incorreto (b), diagnóstico negativo correto (c), diagnóstico negativoincorreto (d), em função dos resultados obtidos na VN. A partir desses valores, calculou-se para oELISA-I a sensibilidade [(a / a + d) x 100], a especificidade [(c / c + b) x 100], o valor preditivo positivo[(a / a + b) x 100] e o valor preditivo negativo [(c / c + d) x 100]. Foram determinadas as frequências(%) de animais positivos, tanto entre os testes (ELISA-I e VN) como entre as diferentes fazendas (1,2, 3, 4 e 5). A estatística de inferência foi realizada com nível de significância de 5%...(AU)

Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) improves follicular survival, oocyte and follicular diameters, in a dose-dependent manner, after the in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue fragments

The aims of this study were to investigate the effects of different concentrations of Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) on the survival, activation, levels of ROS, and growth of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in Alpha Minimum Essential Medium (α-MEM+ ) with or without PDGF-BB (0, 25, 50 and 100 ng/ml). The results showed that both the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments maintained the percentage of morphologically normal follicles from day 1 to day 7. In addition, the 25 ng/ml PDGF treatment showed a significantly higher percentage of morphologically normal follicles when compared to the other treatments. At day 7, greater (P < 0.05) follicular and oocyte diameters were observed in the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments when compared to the cultured control treatment. On day 7 of culture, all the treatments tested had a significant increase in the percentage of developing follicles when compared to the non-cultured control. However, the percentage of follicle activation, as well as ROS production, were similar (P < 0.05) among the treatments, irrespective of culture time. In conclusion, PDGF-BB improved, in a concentration-dependent manner, follicular survival as well as oocyte and follicular diameter after in vitro culture of goat preantral follicle-enclosed in ovarian tissue fragments.

Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) improves follicular survival, oocyte and follicular diameters, in a dose-dependent manner, after the in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue fragments

The aims of this study were to investigate the effects of different concentrations of Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) on the survival, activation, levels of ROS, and growth of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in Alpha Minimum Essential Medium (α-MEM+ ) with or without PDGF-BB (0, 25, 50 and 100 ng/ml). The results showed that both the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments maintained the percentage of morphologically normal follicles from day 1 to day 7. In addition, the 25 ng/ml PDGF treatment showed a significantly higher percentage of morphologically normal follicles when compared to the other treatments. At day 7, greater (P < 0.05) follicular and oocyte diameters were observed in the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments when compared to the cultured control treatment. On day 7 of culture, all the treatments tested had a significant increase in the percentage of developing follicles when compared to the non-cultured control. However, the percentage of follicle activation, as well as ROS production, were similar (P < 0.05) among the treatments, irrespective of culture time. In conclusion, PDGF-BB improved, in a concentration-dependent manner, follicular survival as well as oocyte and follicular diameter after in vitro culture of goat preantral follicle-enclosed in ovarian tissue fragments.(AU)

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...(AU)

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...(AU)

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...

Intervalos de referência sanguíneos e a influência da idade e sexo sobre parâmetros hematológicos e bioquímicos de ovinos da raça Santa Inês criados na Amazônia Oriental / Blood reference intervals and the influence of age and gender on hematologic and biochemical parameters of Santa Ines sheep bred in the eastern Amazon

Blood count and biochemical tests are used to diagnose diseases in domestic animals. These tests can be influenced by age, gender, nutrition, breed, species and environmental conditions. Thus, data from one region should not be extrapolated to animals raised in other regions. The objective of this study was to determine the hematological and biochemical values of different ages and genders of Santa Inês sheep, raised in the eastern Amazon. There were examined 91 sheep that were assigned to three groups: G1 (three to six months old, n = 31); G2 (seven to 24 months old, n = 30) and G3 (above 24 months old, n = 30). The blood cell count, white blood count and biochemical determinations were made with an automatic counter and a semi-automatic analyzer, respectively. Mean values were compared using the Tukey test. The number of erythrocytes, the red blood indices, the thrombogram, eosinophils, total protein, urea and creatinine concentrations were influenced by the age of the animals. The erythrocyte coefficient of variation and the creatinine concentration were influenced by gender, and were greater in males. The neutrophil:lymphocyte (N:L) ratio was greater than one for all age groups. This study led to the determination of reference values for sheep raised in the Eastern Amazon and demonstrated that when interpreting hematological and biochemical tests of sheep, age and gender must be considered.(AU)

O hemograma e o perfil bioquímico são usados para diagnosticar doenças em animais domésticos. Esses exames podem ser influenciados pela idade, sexo, nutrição, raça, espécie e condições ambientais. Portanto, dados de uma região não podem ser totalmente extrapolados para animais criados em regiões geograficamente distintas. Isso se aplica a ovinos criados no Bioma Amazônico. O objetivo deste estudo foi determinar os valores hematológicos e bioquímicos de ovinos Santa Inês, de diferentes idades e gêneros criados na Amazônia oriental. Foram examinados 91 ovinos divididos em três grupos: G1 (3-6 meses de idade, n = 31); G2 (7 a 24 meses de idade, n = 30) e G3 (mais de 24 meses de idade, n = 30). O hemograma e as determinações bioquímicas foram realizados com um contador automático e um analisador semi-automático, respectivamente. Os resultados foram comparados pelo teste de Tukey. O número de eritrócitos, índices eritrocitários, plaquetograma, número de eosinófilos, teor de proteína total, de ureia e de creatinina foram influenciados pela idade dos animais. O coeficiente de variação dos eritrócitos e a concentração de creatinina foram influenciados pelo sexo, sendo maiores nos machos. A relação neutrófilos:linfócitos (N:L) foi maior que um para todos os grupos etários. Neste estudo foram determinados valores de referência para ovinos criados na Amazônia Oriental. Além disso, demonstrou-se que ao interpretar exames hematológicos e bioquímicos de ovinos, a idade e o sexo devem ser considerados.(AU)

Intervalos de referência sanguíneos e a influência da idade e sexo sobre parâmetros hematológicos e bioquímicos de ovinos da raça Santa Inês criados na Amazônia Oriental / Blood reference intervals and the influence of age and gender on hematologic and biochemical parameters of Santa Ines sheep bred in the eastern Amazon

Blood count and biochemical tests are used to diagnose diseases in domestic animals. These tests can be influenced by age, gender, nutrition, breed, species and environmental conditions. Thus, data from one region should not be extrapolated to animals raised in other regions. The objective of this study was to determine the hematological and biochemical values of different ages and genders of Santa Inês sheep, raised in the eastern Amazon. There were examined 91 sheep that were assigned to three groups: G1 (three to six months old, n = 31); G2 (seven to 24 months old, n = 30) and G3 (above 24 months old, n = 30). The blood cell count, white blood count and biochemical determinations were made with an automatic counter and a semi-automatic analyzer, respectively. Mean values were compared using the Tukey test. The number of erythrocytes, the red blood indices, the thrombogram, eosinophils, total protein, urea and creatinine concentrations were influenced by the age of the animals. The erythrocyte coefficient of variation and the creatinine concentration were influenced by gender, and were greater in males. The neutrophil:lymphocyte (N:L) ratio was greater than one for all age groups. This study led to the determination of reference values for sheep raised in the Eastern Amazon and demonstrated that when interpreting hematological and biochemical tests of sheep, age and gender must be considered.

O hemograma e o perfil bioquímico são usados para diagnosticar doenças em animais domésticos. Esses exames podem ser influenciados pela idade, sexo, nutrição, raça, espécie e condições ambientais. Portanto, dados de uma região não podem ser totalmente extrapolados para animais criados em regiões geograficamente distintas. Isso se aplica a ovinos criados no Bioma Amazônico. O objetivo deste estudo foi determinar os valores hematológicos e bioquímicos de ovinos Santa Inês, de diferentes idades e gêneros criados na Amazônia oriental. Foram examinados 91 ovinos divididos em três grupos: G1 (3-6 meses de idade, n = 31); G2 (7 a 24 meses de idade, n = 30) e G3 (mais de 24 meses de idade, n = 30). O hemograma e as determinações bioquímicas foram realizados com um contador automático e um analisador semi-automático, respectivamente. Os resultados foram comparados pelo teste de Tukey. O número de eritrócitos, índices eritrocitários, plaquetograma, número de eosinófilos, teor de proteína total, de ureia e de creatinina foram influenciados pela idade dos animais. O coeficiente de variação dos eritrócitos e a concentração de creatinina foram influenciados pelo sexo, sendo maiores nos machos. A relação neutrófilos:linfócitos (N:L) foi maior que um para todos os grupos etários. Neste estudo foram determinados valores de referência para ovinos criados na Amazônia Oriental. Além disso, demonstrou-se que ao interpretar exames hematológicos e bioquímicos de ovinos, a idade e o sexo devem ser considerados.

Tissue thickness may influence the outcome of vitrification of goat ovarian cortex

Background: The main advantage of the cryopreservation of ovarian fragments is a thinner tissue, which facilitates the penetration of cryoprotective agents, but the size of tissue may not be a limiting factor in achieving a successful cryopreservation of the ovarian tissue. This information is highly significant considering that the cryopreservation of hemi-ovary or whole ovary may preserve the entire or major part of the contingent of primordial follicles of ovarian fragments. Therefore, the aim of this study was to evaluate the vitrification of different dimensions goat ovarian tissue on the follicular morphology, viability, diameter, and the stromal cell density. Materials, Methods & Results: The ovarian tissue was vitrified as fragment, hemi-ovary, or whole ovary, and after warming, the preantral follicles were examined by trypan blue dye exclusion test and histological analysis. Preantral follicles incubated with trypan blue were considered viable if the oocyte and granulosa cells remained unstained. Preantral follicles were classified as morphologically normal only when they contained intact oocyte and granulosa cells. The follicular diameter was measured considering the major and minor axes of each follicle; the average of these 2 measurements was used to determine the diameter of each follicle. Ovarian stroma cells density was evaluated by calculating the number of stromal cell in an area of 100 × 100 µm. There was no difference in the percentage of morphologically normal and viable follicles after vitrification compared to the control (fresh tissue), regardless of the dimension of the vitrified ovarian tissue (P > 0.05). In addition, there were no differences in the follicular diameter after ovarian tissue vitrification, independent of the dimension (P > 0.05). However, after vitrifi cation, a decrease in the ovarian stromal cells density was observed (P < 0.05). This reduction was more intense after the vitrification of the hemi-ovary and whole ovary, compared to the ovarian fragment vitrification (P < 0.05). Discussion: No differences were observed in the percentages of morphologically normal and viable follicles from fresh or vitrified ovarian tissue (fragment, hemi-ovary, and whole ovary). These results are in agreement with other reports which no showed morphological changes after cryopreservation of the whole ovary, and the ovarian fragments. With respect to follicular diameter, only the diameter of the preantral follicles in ovarian tissue vitrified as hemi-ovary was similar to that observed in the fresh control, in the present study. The results demonstrate that fragments and whole ovary vitrification had greater cell dehydration (exposure to VS) and/or less cell rehydration (VS removal), showing that minor adjustments are needed in the protocols of cryoprotectants addition or removal from the fragments and the whole ovary. However, this reduction in follicular diameter did not appear to have affected the follicular architecture or cellular viability, which were maintained in all dimensions of ovarian tissue undergoing vitrifi cation. A reduction in the stromal cell density was observed, especially in the hemi-ovary and whole ovary as compared to the ovarian fragment. Previous reports have shown that ovarian stromal cells are responsible for the production of essential substances for follicular development and these substances are fundamental for follicles development and these cells tend to be more sensitive to cryopreservation procedure than ovarian follicles. In conclusion, the maintenance of follicular morphology and viability demonstrated that vitrification of goat ovarian tissue under the conditions applied in this study can be performed in any dimension of ovarian tissue (fragment, hemi-ovary, and whole ovary).

Produção e composição do leite de búfalas tratadas com somatotropina recombinante bovina no pico de lactação / Production and composition of buffaloes milk at peak lactation treated with bovine recombinant somatotropin

Objetivou-se avaliar a produção e composição do leite de búfalas leiteiras tratadas com somatotropina recombinante bovina (rbST) no pico da lactação. Foram utilizadas 18 búfalas adultas distribuídas em dois grupos experimentais. Grupo tratado (rbST): composto por 9 animais que receberam a aplicação de 500 mg de rbST a cada 14 dias, por via subcutânea, totalizando três aplicações. Grupo não tratado(controle): 9 búfalas que não receberam aplicação de rbST. Semanalmente, foi colhida uma amostra de leite para análise e mensurada a produção leiteira de todas as búfalas. As variáveis produtivas e as análises laboratoriais foram avaliadas como medidas repetidas no tempo, referentes aos tempos de colheita dos dados (tempo) de acordo com cada tratamento (rbST e controle). Quando a premissa de esfericidade não foi respeitada (P<0,05), as probabilidades de tempo (P tempo) e das interações dos tratamentos com o tempo (P trat*tempo) foram corrigidas pelo teste de Greenhouse-Geisse Epsilon. A média dos parâmetros estudados, segundo o grupo experimental (tratamento e controle) foi: produção de leite(7,51 e 7,37 kg), gordura (6,12 e 5,94%), proteína (3,82 e 3,66 %), lactose (4,98 e 5,03%), sólidos totais(15,87 e 15,61%), extrato seco desengordurado (7,35 e 7,37%), contagem de células somáticas (411,38 e 237,74 cél/mil/mL), respectivamente. A administração da rbST não influenciou os índices de produção e composição do leite de búfalas tratadas por 28 dias.

This study aimed to evaluate the production and milk composition of dairy buffaloes treated with recombinant bovine somatotropin (rbST) at peak lactation. Were used 18 adult buffaloes divided into two experimental groups. Treated group (rbST), consisting of 9 animals that received the application of rbST 500 mg every 14 days, by subcutaneous injection, totaling three applications. Untreated group (control):9 buffaloes that did not receive rbST treatment. Weekly was measured milk production of all buffaloes and one sample of milk. Production variables and those originating from laboratory tests were evaluated as repeated measures, referring to the times of collection data (time) according to each treatment (control and rbST). When the assumption of sphericity was not observed (P <0.05), the probabilities of time (P time) and interactions of treatment with time (P trat*time) were corrected by the Greenhouse-Geisse Epsilon test. The average of the parameters studied according to the experimental groups (treatment and control group) was: Milk Production (7.51 and 7.37 kg) fat (6.12 and 5.94%), protein (3.82 and 3.66 %), lactose (4.98 and 5.03%), total solids (15.87 and 15.61%), nonfat solids (7.35 and 7.37%), somatic cell count (411.38 and 237.74 cells / mil / mL), respectively. The administration of rbST did not affect production rates and composition of milk of buffaloes treated for 28 days.

Produção e composição do leite de búfalas tratadas com somatotropina recombinante bovina no pico de lactação / Production and composition of buffaloes milk at peak lactation treated with bovine recombinant somatotropin

Objetivou-se avaliar a produção e composição do leite de búfalas leiteiras tratadas com somatotropina recombinante bovina (rbST) no pico da lactação. Foram utilizadas 18 búfalas adultas distribuídas em dois grupos experimentais. Grupo tratado (rbST): composto por 9 animais que receberam a aplicação de 500 mg de rbST a cada 14 dias, por via subcutânea, totalizando três aplicações. Grupo não tratado(controle): 9 búfalas que não receberam aplicação de rbST. Semanalmente, foi colhida uma amostra de leite para análise e mensurada a produção leiteira de todas as búfalas. As variáveis produtivas e as análises laboratoriais foram avaliadas como medidas repetidas no tempo, referentes aos tempos de colheita dos dados (tempo) de acordo com cada tratamento (rbST e controle). Quando a premissa de esfericidade não foi respeitada (P<0,05), as probabilidades de tempo (P tempo) e das interações dos tratamentos com o tempo (P trat*tempo) foram corrigidas pelo teste de Greenhouse-Geisse Epsilon. A média dos parâmetros estudados, segundo o grupo experimental (tratamento e controle) foi: produção de leite(7,51 e 7,37 kg), gordura (6,12 e 5,94%), proteína (3,82 e 3,66 %), lactose (4,98 e 5,03%), sólidos totais(15,87 e 15,61%), extrato seco desengordurado (7,35 e 7,37%), contagem de células somáticas (411,38 e 237,74 cél/mil/mL), respectivamente. A administração da rbST não influenciou os índices de produção e composição do leite de búfalas tratadas por 28 dias.(AU)

This study aimed to evaluate the production and milk composition of dairy buffaloes treated with recombinant bovine somatotropin (rbST) at peak lactation. Were used 18 adult buffaloes divided into two experimental groups. Treated group (rbST), consisting of 9 animals that received the application of rbST 500 mg every 14 days, by subcutaneous injection, totaling three applications. Untreated group (control):9 buffaloes that did not receive rbST treatment. Weekly was measured milk production of all buffaloes and one sample of milk. Production variables and those originating from laboratory tests were evaluated as repeated measures, referring to the times of collection data (time) according to each treatment (control and rbST). When the assumption of sphericity was not observed (P <0.05), the probabilities of time (P time) and interactions of treatment with time (P trat*time) were corrected by the Greenhouse-Geisse Epsilon test. The average of the parameters studied according to the experimental groups (treatment and control group) was: Milk Production (7.51 and 7.37 kg) fat (6.12 and 5.94%), protein (3.82 and 3.66 %), lactose (4.98 and 5.03%), total solids (15.87 and 15.61%), nonfat solids (7.35 and 7.37%), somatic cell count (411.38 and 237.74 cells / mil / mL), respectively. The administration of rbST did not affect production rates and composition of milk of buffaloes treated for 28 days.(AU)

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.(AU)

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.(AU)

Efeito de diferentes concentrações de hormônio folículo-estimulante recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados / Effect of different concentrations of recombinant follicle stimulating hormone on the in vitro development of preantral follicles isolated from goats and sheeps

Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) caprinos e ovinos isolados. Folículos pré-antrais (≥ 150 µ m) foram isolados de fragmentos do córtex ovariano de cabras e ovelhas e cultivados individualmente por 24 dias em α-MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de antibióticos e 50µg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo avaliou-se a morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, o cultivo com FSHr apresentou percentuais de folículos morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), ocorrendo uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi semelhante em todos os tratamentos, observando-se um decréscimo a partir do 12º dia (P<0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em caprinos, a adição de FSHr aumentou a taxa de crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, em ovinos, isso só foi observado no tratamento com 1000 ng/mL de FSHr. No que se refere à formação de antro, em ambas as espécies, não houve diferença significativa entre os tratamentos com FSHr e o controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, pôde-se concluir que FOPA caprinos e ovinos são capazes de manter a sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este hormônio teve um papel importante na taxa de crescimento folicular em ambas as espécies.

The aim of this work was to evaluate the effects of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) on the in vitro development of isolated caprine and ovine preantral follicles. Preantral follicles (≥ 150 micron) were isolated from fragments of goats and sheeps ovarian cortex and individually cultured for 24 days in α-MEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin -selenium (ITS), 1% antibiotics and 50 mg / mL ascorbic acid, in the absence (control) or presence of FSHR (100 or 1000 ng / mL) at 39 ° C with 5% CO2 in air. Follicular morphology, growth and antral cavity formation were assessed throughout the culture. The results showed that addition of rFSH to the medium had no effect on the percentages of caprine morphologically normal follicles until day 12 as compared with the control, but a decrease was observed on day 18 with the use of the hormone (p<0.05) only rFSH (1000 ng/mL). Regarding ovine follicles, percentages of normal follicles were significantly reduced from day 12 onwards in all treatments, which led to similar results. Growth rates were increased in caprine follicles by use of rFSH (100 and 1000 ng/ml) in comparison to the control (p<0,05). In ovine follicles, such effect was observed only when rFSH was used at 1000 ng/ml. With respect to antral cavity formation, no diference among treatments was observed for both species. The analysis of chromatin configuration revealed that all oocytes remained at the germinal vesicle stage. In conclusion, caprine and ovine preantral follicles are capable to survive and develop to the antral stage in vitro without FSH. However, this hormone is important for increasing follicular growth rates in both species.

Efeito de diferentes concentrações de hormônio folículo-estimulante recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados / Effect of different concentrations of recombinant follicle stimulating hormone on the in vitro development of preantral follicles isolated from goats and sheeps

Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) caprinos e ovinos isolados. Folículos pré-antrais ( 150 µm) foram isolados de fragmentos do córtex ovariano de cabras e ovelhas e cultivados individualmente por 24 dias em -MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de antibióticos e 50 µg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo avaliou-se a morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, o cultivo com FSHr apresentou percentuais de folículos morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), ocorrendo uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi semelhante em todos os tratamentos, observando-se um decréscimo a partir do 12º dia (P<0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em caprinos, a adição de FSHr aumentou a taxa de crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, em ovinos, isso só foi observado no tratamento com 1000 ng/mL de FSHr. No que se refere à formação de antro, em ambas as espécies, não houve diferença significativa entre os tratamentos com FSHr e o controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, pôde-se concluir que FOPA caprinos e ovinos são capazes de manter a sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este hormônio teve um papel importante na taxa de crescimento folicular em ambas as espécies.(AU)

The aim of this work was to evaluate the effects of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) on the in vitro development of isolated caprine and ovine preantral follicles. Preantral follicles ( 150 micron) were isolated from fragments of goats and sheeps ovarian cortex and individually cultured for 24 days in-MEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin -selenium (ITS), 1% antibiotics and 50 mg / mL ascorbic acid, in the absence (control) or presence of FSHR (100 or 1000 ng / mL) at 39 ° C with 5% CO2 in air. Follicular morphology, growth and antral cavity formation were assessed throughout the culture. The results showed that addition of rFSH to the medium had no effect on the percentages of caprine morphologically normal follicles until day 12 as compared with the control, but a decrease was observed on day 18 with the use of the hormone (p<0.05) only rFSH (1000 ng/mL). Regarding ovine follicles, percentages of normal follicles were significantly reduced from day 12 onwards in all treatments, which led to similar results. Growth rates were increased in caprine follicles by use of rFSH (100 and 1000 ng/ml) in comparison to the control (p<0,05). In ovine follicles, such effect was observed only when rFSH was used at 1000 ng/ml. With respect to antral cavity formation, no diference among treatments was observed for both species. The analysis of chromatin configuration revealed that all oocytes remained at the germinal vesicle stage. In conclusion, caprine and ovine preantral follicles are capable to survive and develop to the antral stage in vitro without FSH. However, this hormone is important for increasing follicular growth rates in both species.(AU)