The potential of plant and fungal proteins in the control of gastrointestinal nematodes from animals / Potencial de proteínas de plantas e fungos no controle de nematoides gastrintestinais de animais

Gastrointestinal nematode infection is an important cause of high economic losses in livestock production. Nematode control based on a synthetic chemical approach is considered unsustainable due to the increasing incidence of anthelmintic resistance. Control alternatives such as the use of natural products are therefore becoming relevant from an environmental and economic point of view. Proteins are macromolecules with various properties that can be obtained from a wide range of organisms, including plants and fungi. Proteins belonging to different classes have shown great potential for the control of nematodes. The action of proteins can occur at specific stages of the nematode life cycle, depending on the composition of the external layers of the nematode body and the active site of the protein. Advances in biotechnology have resulted in the emergence of numerous protein and peptide therapeutics; however, few have been discussed with a focus on the control of animal nematodes. Here, we discuss the use of exogenous proteins and peptides in the control of gastrointestinal.(AU)

A infecção por nematoides gastrintestinais é uma importante causa de grandes perdas econômicas na pecuária. O controle de nematoides com compostos químicos sintéticos é considerado insustentável devido ao aumento da resistência anti-helmíntica. Alternativas de controle, como o uso de produtos naturais, estão se tornando relevantes do ponto de vista ambiental e econômico. As proteínas são macromoléculas com várias propriedades que podem ser obtidas de uma ampla gama de organismos, incluindo plantas e fungos. Proteínas pertencentes a diferentes classes têm mostrado grande potencial para o controle de nematoides. A ação das proteínas pode ocorrer em estágios específicos do ciclo de vida do nematoide, dependendo da composição das camadas externas do parasito e do sítio ativo da proteína. Avanços na biotecnologia resultaram no surgimento de numerosas terapias de proteínas e peptídeos; no entanto, pouco foi discutido com foco no controle de nematoides parasitos de animais. Na presente revisão foi discutido o uso de proteínas exógenas e peptídeos no controle de nematoides gastrintestinais, os mecanismos sugeridos de ação, e os desafios e perspectivas para o uso dessas biomoléculas como uma classe de anti-helmínticos.(AU)

CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DA LECTINA DA ESPONJA MARINHA Chondrilla caribensis

Os organismos marinhos possuem uma grande diversidade química, sendo capazes de produzir inúmeros compostos diferentes. Dentre esses compostos estão as lectinas, proteínas ou glicoproteínas que apresentam ligação específica e reversível a carboidratos, porém não alteram as propriedades e nem estão envolvidas necessariamente ao metabolismo dos mesmos. O estudo das lectinas e de suas interações proteína-carboidrato são de grande importância, já que o padrão de glicosilação dos componentes celulares é influenciado por alterações fisiológicas, como a ocorrência de doenças. Já os estudos estruturais são relevantes para solucionar e entender o papel fisiológico dentro do organismo e avaliar seu potencial biotecnológico. Apesar dos estudos estruturais de lectinas terem sido impulsionados há muito tempo, poucas lectinas de esponjas possuem sua estrutura primária determinada e apenas uma tem sua estrutura tridimensional resolvida. O objetivo deste trabalho foi caracterizar estruturalmente uma lectina presente na esponja marinha Chondrilla caribensis e avaliar o potencial da mesma em diferentes atividades biológicas. A estrutura primária de CCL foi determinada por sobreposição de peptídeos sequenciados por espectrometria de massas. A sequência de aminoácidos da proteína consiste de 142 aminoácidos com massa molecular calculada de 15.443 Da. A lectina possui uma arquitetura de domínio do tipo galectina, família de lectinas ligantes a -galactosídeos, sendo esta família bastante difundida no reino animal. A sequência assinatura de domínio altamente conservado em galectinas foi identificada em CCL com algumas modificações observadas também em outras galectinas de esponjas. A estrutura tridimensional foi prevista e o local de ligação a carboidratos analisado por meio do docking molecular, onde CCL exibe uma estrutura típica das galectinas que consiste em um -sanduíche com duas -folhas antiparalelas. Os aminoácidos que fazem interações com os ligantes de CCL no sítio de ligação ao monossacarídeo são, na maioria, os mesmos conservados nesta família de lectinas. A função molecular, o processo biológico e a localização da proteína prevista, mostram que CCL é uma típica galectina podendo desempenhar várias funções diferentes tanto intracelular como extracelular. CCL é uma molécula com potencial antitumoral contra células de carcinoma de próstata e adenocarcinoma de mama, com baixa citotoxicidade contra células saudavéis, além de mostrar atividade leishmanicida com resultados bastante promissores.

The organisms have a great chemical diversity, being able to produce countless diferente compounds. Among these compounds are lectins, proteins or glycoproteins that have specific and reversible binding to carbohydrates, however they do not alter their properties and are not necessarily involved in their metabolismo. The study of lectins and their protein-carbohydrate interactions are of great importance, since the pattern of glycosylation of cellular components is influenced by physiological changes, such as the occurrence of diseases. Structural studies are relevant to solve and understand the physiological role within the organismo and to evaluate its biotechnological potential. Although structural studies of lectins have been promoted for a long time, few sponges lectins have their primary strucuture determined and only one of them has its three-dimensional structure resolved. The objective of this work was to structurally characterize the lectin presente in the marine sponge Chondrilla caribensis and to evaluate its potential in diferente biological activities. The primary structure of CCL was determined by mass spectrometry. The amino acid sequence of the protein consists of 142 amino acids with a calculated molecular mass of 15.443 Da. Lectin has a galectin-like domain architecture, a Family of -galactoside-binding lectins, and is very widespread in the animal kingdom. The signature sequence of highly conserved domain in galectins was identified in CCL with some modifications observed also in other sponge galectins. The three-dimensional structure was predicted and the carbohydrate binding site was analyzed using molecular docking, where CCL exhibits a typical galectin structure consisting of a -sandwich with two antiparallel -sheets. The amino acids that interact with the CCL ligands at the monosaccharide binding site are mostly the same conserved in this Family of lectins. The molecular function, the biological process and the location of the predicted protein, show that CCL is a typical galectin and can perform several diferente functions, both intracelular and extracelular. CCL is a molecule with antitumor potential against prostate carcinoma cells and breast adenocarcinoma, with low cytotoxicity against healthy cells, in addition to showing leishmanicidal activity with very promising results.

LECTINA RELACIONADA AO FIBRINOGÊNIO DO OURIÇO-DO-MAR Echinometra lucunter: ISOLAMENTO, SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

Uma das primeiras linhas de defesa dos invertebrados está relacionada ao reconhecimento dos patógenos por receptores/proteínas de reconhecimento padrão (PRRs/PRPs) e moléculas de reconhecimento. Dentre elas, destacam-se as proteínas relacionadas ao fibrinogênio (FRePs) identificadas nos invertebrados e que, em sua maioria, atuam como PRPs desempenhando papéis importantes na aglutinação microbiana, lise e clearance bacteriano e na defesa antiparasitária. Uma lectina relacionada ao fibrinogênio chamada de ELL foi isolada do fluido celomático do ouriço-do-mar Echinometra lucunter por cromatografia de afinidade em goma de xantana. ELL é um dímero composto por subunidades de 25 kDa, unidas por uma ligação dissulfeto. A nova lectina foi inibida por glicoproteínas como mucinas (PSM II, PSM III e BSM) e tiroglobulina. A sequência de aminoácidos de ELL foi determinada por espectrometria de massas. O monômero de ELL consiste de 229 aminoácidos, incluindo sete cisteínas envolvidas em três ligações dissulfeto intracadeia conservadas e uma ligação dissulfeto intercadeia. A sequência completa de ELL possui motivos conservados e domínio de fibrinogênio na porção C-terminal típico de proteínas relacionadas ao fibrinogênio. Um modelo tridimensional de ELL foi previsto por homologia, revelando que a proteína possui dois domínios de reconhecimento a carboidratos, o DRC A está localizado na região N-terminal e parece interagir com N-acetil-manosamina e o DRC B encontra-se na porção C-terminal e pode ligar-se a N-acetil-galactosamina. Em ensaios de atividade biológica, ELL foi capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas patogênicas, além de reduzir a biomassa e viabilidade celular do biofilme formado por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, sugerindo sua capacidade de reconhecer patógenos.

One of the first lines of defense for invertebrates is related to the recognition of pathogens by standard recognition receptors / proteins (PRRs / PRPs) and recognition molecules. Among them, fibrinogen-related proteins (FRePs) that are identified in invertebrates stand out, and that, in their majority, act as PRPs playing important roles in microbial agglutination, bacterial lysis and clearance and in antiparasitic defense. A fibrinogen-related lectin called ELL was isolated from the coelomic fluid of the sea urchin Echinometra lucunter by affinity chromatography on xanthan gum. ELL is a dimer composed of 25 kDa subunits, joined by a disulfide bond. The new lectin was inhibited by glycoproteins such as mucins (PSM II, PSM III and BSM) and thyroglobulin. The amino acid sequence of ELL was determined by mass spectrometry. The ELL monomer consists of 229 amino acids, including seven cysteines involved in three conserved intrachain disulfide bonds and an interchain disulfide bond. The complete ELL sequence has conserved motifs and fibrinogen domain in the typical C-terminal portion of fibrinogen-related proteins. A three-dimensional model of ELL was predicted by homology, revealing that the protein has two carbohydrate recognition domains, CRD A is located in the N-terminal region and appears to interact with N-acetyl-mannosamine and CRD B is found in the C-terminal and can bind to N-acetyl-galactosamine. In biological activity assays, ELL was able to inhibit the growth of pathogenic Gram-positive bacteria, in addition to reducing the biomass and cell viability of the biofilm formed by Gram-positive and Gram-negative bacteria, suggesting its ability to recognize pathogens.

DETECÇÃO DA ATIVIDADE HEMAGLUTINANTE EM ESPONJAS MARINHAS DO LITORAL CEARENSE E PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE LECTINAS DAS ESPONJAS MARINHAS Callyspongia vaginalis E Aplysina fulva

As esponjas pertencem ao filo Porífera e são organismos multicelulares constituídos de células embebidas em uma matriz gelatinosa e enrijecidas por um esqueleto de espículas de carbonato de cálcio ou sílica e colágeno. O interesse nesse filo é inerente aos trabalhos relatados que mostram amplo potencial biotecnológico de macromoléculas com propriedades interessantes, mostrando atividade contra doenças e alguns patógenos, e possivelmente capazes de desempenhar o papel de ferramenta biomédica, como as lectinas. Lectinas são proteínas capazes de se ligarem reversivelmente a carboidratos específicos, sem que causem alterações estruturais nos mesmos. Estas proteínas são capazes de atuar como moléculas de reconhecimento no interior das células, superfícies celulares e fluidos fisiológicos. Em esponjas marinhas, as lectinas podem desempenhar uma variedade de funções, incluindo interação celular, espiculogênese e defesa. O objetivo deste trabalho foi detectar a atividade hemaglutinante em extratos proteicos de esponjas marinhas e purificar e caracterizar lectinas presentes nas esponjas marinhas Callyspongia vaginalis e Aplysina fulva. Os extratos das 11 espécies testadas apresentaram atividade hemaglutinante e hemolítica contra eritrócitos humanos e de coelho. Denominada de CvP (Callyspongia vaginalis Protein), a lectina de C. vaginalis foi isolada a partir de combinações cromatográficas de troca iônica em matriz de DEAE-sephacel e DEAE-FF. Esta proteína é composta de três cadeias polipeptídicas ligadas à um cromóforo com absorção a 600 nm. CvP compartilha alta similaridade de sequência com H-3, lectina isolada de Haliclona caerulea. Entretanto, CvP não apresentou atividade hemaglutinante, sendo assim, ela foi considerada uma lectin-like. AFL (Aplysina fulva Lectin), isolada de A. fulva, foi purificada através de precipitação com sulfato de amônio seguida de cromatografia de afinidade em matriz de Sepharose 4B. A nova lectina é um dímero de 30 kDa, formado por duas subunidades iguais de 15 kDa ligadas por pontes dissulfeto. Sua atividade hemaglutinante foi estável em pH neutro-alcalino e em temperaturas abaixo de 60ºC. A atividade de AFL foi inibida pela glicoproteína mucina de estômago de porco. AFL mostrou potencial na redução dos biofilmes das cepas bacteriana de Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Escherichia coli, sendo capaz de desempenhar papel antibacteriano. Assim, duas novas proteínas foram isoladas e caracterizadas bioquimicamente e os resultados apresentados acima servirão como base deaplicação biotecnológica em modelos biológicos diversos.

The sponges belong to the phylum Porífera and are multicellular organisms made up of cells embedded in a gelatinous matrix and stiffened by a skeleton of spicules of calcium carbonate or silica and collagen. The interest in this phylum is inherent in the studies reported that show broad biotechnological potential of macromolecules with interesting properties, showing activity against diseases and some pathogens, and possibly capable of playing the role of a biomedical tool, such as lectins. Lectins are proteins capable of reversibly binding to specific carbohydrates, without causing structural changes in them. These proteins are able to act as recognition molecules inside cells, cell surfaces and physiological fluids. In marine sponges, lectins can perform a variety of functions, including cell interaction, spiculogenesis and defense. The aim of this work was to detect hemagglutinating activity in protein extracts from marine sponges and to purify and characterize lectins present in marine sponges Callyspongia vaginalis and Aplysina fulva. The extracts of the 11 species tested showed hemagglutinating and hemolytic activity against human and rabbit erythrocytes. Called CvP (Callyspongia vaginalis Protein), the C. vaginalis lectin was isolated from chromatographic combinations of ion exchange in DEAE-sephacel and DEAE-FF matrix. This protein is composed of three polypeptide chains linked to a chromophore with absorption at 600 nm. CvP shares high sequence similarity with H-3, lectin isolated from Haliclona caerulea. However, CvP did not show hemagglutinating activity, so it was considered a lectin-like activity. AFL (Aplysina fulva Lectin), isolated from A. fulva, was purified by precipitation with ammonium sulfate followed by affinity chromatography on Sepharose 4B matrix. The new lectin is a 30 kDa dimer, formed by two equal 15 kDa subunits linked by disulfide bridges. Its hemagglutinating activity was stable at neutral-alkaline pH and at temperatures below 60ºC. AFL activity was inhibited by pig stomach mucin glycoprotein. AFL showed potential in reducing the biofilms of the bacterial strains of Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Escherichia coli, being able to play an antibacterial role. Thus, two new proteins were isolated and biochemically characterized and the results presented above will serve as a basis for biotechnological application in different biological models.

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL INSETICIDA DE PREPARAÇÕES DE FLORES DE Moringa oleifera E FOLHAS DE Schinus terebinthifolia CONTRA Sitophilus zeamais E Plutella xylostella

Plutella xylostella (traça-das-brássicas) e Sitophilus zeamais (gorgulho-do-milho) são insetos de importância econômica por afetarem plantações de brássicas e grãos armazenados, respectivamente. Extratos vegetais tem sido alvo de estudos acerca de suas propriedades inseticidas. O presente trabalho avaliou o potencial inseticida de preparações de folhas de Schinus terebinthifolia (aroeira-vermelha) contra P. xylostella e de flores de Moringa oleifera (moringa) contra adultos de S. zeamais. Folhas de S. terebinthifolia (10 g) foram secas ao ar e homogeneizadas com NaCl 0,15 M (100 mL). O extrato obtido foi avaliado quanto ao efeito sobre ovos, larvas, pupas e adultos de P. xylostella. Adicionalmente, flores de M. oleifera foram homogeneizadas com água destilada e o extrato obtido foi investigado quanto ao efeito sobre S. zeamais adultos. O extrato de folhas de S. terebinthifolia causou mortalidade das larvas com valores de CL50 de 144,9 [127,3170,6] e 117,4 [88,7146,2] mg/mL para 96 e 144 h, respectivamente. O Tempo médio para dizimar 50% dos indivíduos (RT50) variou de 6,9 a 6,1 dias para o extrato nas concentrações de 50 a 150 % (mg/Ml). O extrato de folhas (150 mg/mL) também reduziu a viabilidade das pupas em 50% e apresentou efeito deterrente de oviposição. Os índices de deterrência foram 63,42% e 77% para o extrato a 20 e 50 mg/mL, respectivamente, após 24 h de tratamento. O extrato de folhas não afetou a eclodibilidade dos ovos de P. xylostella. Uma lectina (SteLL) foi isolada do extrato de folhas utilizando protocolo previamente estabelecido, contudo esta não foi tóxica para as larvas de P. xylostella. O extrato de flores de M. oleifera não promoveu mortalidade nos insetos, porém, apresentou efeito deterrente alimentar moderado nas concentrações de 0,5 a 4,5 mg/g (Índice de deterrência alimentar de 52,8% a 69%) e forte a 6,0 mg/g (Índice de deterrência alimentar de 82%). Um inibidor de tripsina isolado das flores de M. oleifera (MoFTI) por cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-agarose causou a morte dos S. zeamais adultos, provavelmente decorrente da sua má nutrição. Adicionalmente, o extrato (6 a 0,5 mg/g) e MoFTI (3 mg/g) não foram tóxicos para sementes de milho, o que é vantajoso caso essas preparações sejam empregadas para proteção de grãos armazenados. Em conclusão, o extrato de folhas de S. terebinthifolia e o extrato de flores de M. oleifera representam novos biomateriais com potencial para controle populacional dos insetos-praga S. zeamais e P. xylostella, respectivamente.

Plutella xylostella (Diamondback moth) and Sitophilus zeamais (maize weevil) are economically important insects that affect brassica plants and stored grains, respectively. Plant extracts have been the subject of studies on their insecticidal properties. The present work studies the insecticide potential of preparations from Schinus terebinthifolia (Brazilian pepper-tree) leaves against P. xylostella and from Moringa oleifera (Drumstick Tree) against S. zeamais adults. S. terebinthifolia leaves (10 g) were air dried and homogenized with 0.15 M NaCl (100 mL). The resulting extract was evaluated for the effect on P. xylostella eggs, larvae, pupae and adults. M. oleifera flowers (50 g) were homogenized with distilled water (100 mL) and the extract was investigated for their effect on S. zeamais adults. The S. terebinthifolia leaf extract caused larval mortality with LC50 values of 144.9 [127.3-170.6] and 117.4 [88.7-146.2] mg / mL for 96 and 144 h, respectively. The average time to decimate 50% (RT50) ranged from 6.9 to 6.1 days for the leaf extract from 50 to 150% (mg / ml). The leaf extract (150 mg / mL) also reduces pupae viability by 50% and has a determining effect on oviposition. The oviposition deterrent index was 63.42% and 77% for extract at 20 and 50 mg / mL, respectively, after 24 h of treatment. Leaf extract did not affect hatchability of P. xylostella eggs. A lectin (SteLL) was isolated from leaf extract using an established protocol, but its was not toxic to P. xylostella larvae. Flower extract does not promote insect mortality, however, it shows a moderate dietary determinant effect in the 0.5 to 4.5 mg/g (52.8% to 69%) and a strong 6.0 mg/g (82% food dissociation). A trypsin inhibitor isolated from the flowers of M. oleifera (MoFTI) in trypsin-agarose column by affinity chromatography caused the death of adult S. zeamais, probably due to their malnutrition. Additionally, the extract (6 a 0.5 mg/g) and MoFTI (3 mg/g) were not toxic for corn seeds, which is advantageous if these preparations are used to protect stored grains. In conclusion, S. terebintifolia leaf extract and M. oleifera flower extract represents new biomaterials with potential for population control of S. zeamais and P. xylostella.

PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E ATIVIDADES BIOLÓGICAS DE LECTINA OBTIDA DE Dypsis decaryi

O objetivo deste trabalho foi extrair, purificar, caracterizar e avaliar as atividades biológicas da lectina obtida de sementes de D. decaryi, além de analisar os compostos fitoquímicos presentes no extrato do tegumento das sementes, como também a atividade carrapaticida deste extrato. As sementes foram lavadas em água destilada e secas durante 5 dias. Foram preparados extratos a 10% com NaCl 0,15 M da casca, tegumento e endosperma da semente. Foram determinadas a atividade hemaglutinante (AH), dosagem proteica e atividade hemaglutinante específica (AHE) de todos os extratos. O extrato do tegumento apresentou maior AHE (196,03), sendo utilizado para precipitação com acetona 70% e purificação em Superdex G-75 em sistema AKTA, apresentando único pico no cromatograma, com massa molecular em condições nativas estimada em 34,8kDa. A lectina purificada de D. decaryi foi denominada DdeL. A lectina não foi específica para os tipos sanguíneos avaliados (A, B, AB, O e de coelho), porém maior AH foi observada quando na presença de sangue humano do tipo O e sangue de coelho. Esta lectina foi inibida apenas por glicoproteínas (albumina, azoalbumina e azocaseína), sua atividade foi estável na faixa de pH 5-10, no entanto, apresentou AH maior em pH ácido (pH 5-6), foi termoresistente, pois permaneceu ativa após 3h em temperatura a 100 °C. A atividade antibacteriana de DdeL (2,9 - 1500 µg/mL) foi realizada utilizando o método de microdiluição em caldo. Este ensaio demonstrou que DdeL exibiu atividade bacteriostática frente às bactérias patogênicas testadas, embora a concentração inibitória mínima (CIM) tenha sido elevada. As cepas mais sensíveis foram o isolado clínico Providencia stuartii e Staphylococcus aureus ATCC 29213, as quais apresentaram CIM de 750 µg/mL. A atividade bactericida não foi detectada para os isolados testados. A atividade antifúngica do extrato e DdeL foi realizada pelo teste de microdiluição em placas de 96 poços. Na atividade antifúngica foram avaliadas dez concentrações (2,6 1325 µg/mL) do extrato do tegumento das sementes de D. decaryi, como também, dez concentrações (0,03 16,5 µg/mL) de DdeL. O extrato do tegumento apresentou CMI50 de 5,18 µg/mL para os fungos da espécie Sporotrichum schenckii, e CMI100 ficou entre 10,35 - 82,81 µg/ml para estes fungos. Para os fungos da espécie Candida albicans, o extrato apresentou CMI50 entre 2,59 - 20,7 µg/mL, onde o mais resistente foi o C. albicans URM 6401 com CMI50 de 20,7 µg/mL. A CMI100 do extrato do tegumento para C. albicans foi de 662,5 - 1325 µg/mL. Em relação a DdeL, o S. schenckii URM 7971 foi o mais sensível na CMI50 de 0,26 µg/mL e os demais na CMI50 de 0,52 µg/mL. DdeL não apresentou CMI100 para as espécies de S. schenckii. Para C. albicans, DdeL apresentou CIM50 de 2,06 µg/mL e não foi capaz de inibir em 100% o crescimento destes fungos. A citotoxicidade para macrófagos (J774.A1) e células embrionárias renais (HEK-293) mostraram que a lectina não apresentou efeito citotóxico, além de ter estimulado a proliferação destas células. O extrato do tegumento de D. decaryi indicou a presença de diferentes grupos de metabólitos secundários e alguns constituintes, sugerindo biodisponibilidade de saponinas, taninos e flavonoides. Este extrato, avaliado em diferentes concentrações, apresentou capacidade do consumo de DPPH. O comportamento cinético da reação do DPPH com as diferentes concentrações do extrato, mostrou que as três concentrações maiores (1,73 mg/mL; 0,87 mg/mL; 0,35 mg/mL) atigiram o consumo máximo com dois minutos da reação, e o decaimento do DPPH foi estabilizando-se rapidamente. A maior concentração do extrato (1,73 mg/mL) sequestrou em torno de 100% do radical com dois minutos da reação. Na menor concentração, praticamente não houve sequestro de DPPH. No bioensaio carrapaticida frente a Dermacentor nitens, o controle positivo Cipermetrina 15%, foi ineficiente, pois, os carrapatos apresentaram resistência de 98,81% a este carrapaticida. O extrato bruto na concentração de 17,3 mg/mL também não foi eficiente e os carrapatos apresentaram 100% de resistência às concentrações mais elevadas do extrato. A concentração do extrato a 1,73 mg/mL apresentou 19,23% de eficiência, superior ao cipermetrina que apresentou 1,19% de eficiência. O precipitado proteico na concentração de 1,25 mg/mL obteve maior eficiência com 71,65%. O sobrenadante cetônico foi avaliado e apresentou 38,62% de eficiência. Os resultados mostraram a purificação e caracterização de uma nova lectina, termoresistente, com atividade bacteriostática a bactérias patogênicas, antifúngica a patógenos de humanos e que não apresentou efeitos citotóxicos, sendo uma proteína com potencial para aplicações biotecnológicas. Além disso, apresenta a composição fitoquímica do extrato do tegumento, a atividade sequestradora do radical DPPH e a atividade carrapaticida deste extrato, precipitado proteico e sobrenadante cetônico. Demonstrando o potencial biotecnológico do uso dessa espécie, ainda pouco estudada na comunidade científica, na medicina humana e animal.

The objective of this study was to extract, purify, characterize and evaluate the biological activities of lectin obtained from D. decaryi seed, and analyzing the phytochemical compounds in the extract of the tegument as well as the acaricide activity of this extract. The seeds were washed in distilled water and dried for 5 days. Were prepared extracts 10% with 0.15 M NaCl of the bark, tegument and endosperm of the seed. The hemagglutinating activity (HA), protein dosage and specific hemagglutinating activity (AHE) of all extracts were determined. The extract of the tegument presented higher AHE (196,03), being used for precipitation with 70% acetone and purification in Superdex G-75 in AKTA system, presenting single peak in the chromatogram, with molecular mass in native conditions estimated at 34.8kDa. The purified lectin of D. decaryi was named DdeL. The lectin was not specific for the blood types evaluated (A, B, AB, O and rabbit), but higher AH was observed when in the presence of human type O blood and rabbit blood. This lectin was inhibited only by glycoproteins (albumin, azoalbumin and azocasein), its activity was stable in the range of pH 5-10, however, it presented higher AH in acid pH (pH 5-6), it was thermo-resistant, since it remained active after 3h at 100 ° C. The antibacterial activity of DdeL (2.9 - 1500 g/mL) was performed using the broth microdilution method. This assay demonstrated that DdeL exhibited bacteriostatic activity against the pathogenic bacteria tested, although the minimal inhibitory concentration (MIC) was elevated. The most sensitive strains were the clinical isolate Providencia stuartii and Staphylococcus aureus ATCC 29213, which presented MICs of 750 g/mL. The bactericidal activity was not detected for the tested isolates. The antifungal activity of the extract and DdeL was performed by the microdilution test in 96-well plates. In the antifungal activity, ten concentrations (2.6 -1325 g/mL) of the extract of the tegument of the seed of D. decaryi, as well as 10 concentrations (0.03 - 16.5 g/mL) of DdeL were evaluated. The extract of the tegument had a MIC50 of 5.18 g/mL for the fungi of the Sporotrichum schenckii species, and MIC100 was between 10.35 - 82.81 g/mL for these fungi. For the fungi of Candida albicans, the extract presented MIC50 between 2.59 - 20.7 g/mL, where the most resistant was C. albicans URM 6401 with MIC50 of 20.7 g/mL. The MIC100 of the extract of the tegument for C. albicans was 662.5 - 1325 g/mL. In relation to DdeL, S. schenckii URM 7971 was the most sensitive in MIC50 of 0.26 g/mL and the others in MIC50 of 0.52 g/mL. DdeL did not present MIC100 for S. schenckii species. For C. albicans, DdeL presented a MIC50 of 2.06 g/mL and was not able to inhibit the growth of these fungi in 100%. Cytotoxicity to macrophages (J774.A1) and renal embryonic cells (HEK-293) showed that the lectin did not present a cytotoxic effect and stimulated the proliferation of these cells. The extract of the tegument of the seeds of D. decaryi indicated the presence of different groups of secondary metabolites and some constituents, suggesting bioavailability of saponins, tannins and flavonoids. This extract, evaluated at different concentrations, showed DPPH consumption capacity. The kinetic behavior of DPPH reaction with different concentrations of the extract showed that the three highest concentrations (1.73 mg/mL, 0.87 mg/mL, 0.35 mg/mL) achieved the maximum consumption in two minutes from reaction, and DPPH decay rapidly stabilized. The highest concentration of the extract (1.73 mg/mL) sequestered around 100% of the radical with two minutes of the reaction. At the lowest concentration, there was practically no sequestration of DPPH. In the bioassay against ticks Dermacentor nitens, the positive control Cypermethrin 15%, was inefficient because the ticks were resistant to 98.81% this acaricide. The crude extract at the concentration of 17.3 mg/mL was also not efficient and the ticks showed 100% resistance at the highest concentrations of the extract. The extract concentration at 1.73 mg/mL presented 19.23% efficiency, higher than cypermethrin, which presented 1.19% efficiency. The protein precipitate at the concentration of 1.25 mg / mL obtained higher efficiency with 71.65%. The ketone supernatant was evaluated and presented 38.62% efficiency. The results showed the purification and characterization of a new lectin, thermoresistant, with bacteriostatic activity to pathogenic bacteria, antifungal to human pathogens and that did not present cytotoxic effects, being a protein with potential for biotechnological applications. In addition, it presents the phytochemical composition of the extract of the tegument of the seeds of D. decaryi, the sequestering activity of the DPPH radical and the acaricide activity of this extract, protein precipitate and ketone supernatant. Demonstrating the biotechnological potential of the use of this species, still little studied in the scientific community, in human and animal medicine.

Estudo da atividade cicatrizante da Lectina de folhas da Bauhinia Monandra Kurz em feridas cutâneas em ratos

As lectinas de origem vegetal, são proteínas não imunológicas que aglutinam hemácias devido sua alta capacidade de se ligar reversivelmente a carboidratos. Diversas pesquisas têm evidenciado a sua ação como agente inseticida, antimicrobiano, antitumoral, anti-inflamatório e cicatrizante. Portanto, este trabalho tem como objetivo avaliar a atividade cicatrizante em creme contendo a lectina BmoLL em folhas de Bauhinia Monandra Kurz (pata-devaca) aplicada diariamente em feridas cutâneas em ratos Wistar, avaliada através de técnicas macroscópicas, morfométricas e histológicas. Foram utilizados 40 animais, divididos em dois grupos contendo 20 animais cada, formando um grupo tratado (recebeu o creme e identificados por LL) e o grupo controle (recebeu o veículo e identificados por L). Cada grupo foi dividido em quatro subgrupos contendo cinco animais cada (por exemplo, para o grupo controle, L1, L2, L3, L4 e L5), os quais foram avaliados com 4°, 7°, 14° e 21° dias de pós-operatório, respectivamente. Em cada animal foram realizadas duas feridas cirúrgicas (antímero direito e esquerdo) deixando a fáscia muscular adjacente. As feridas foram mensuradas quanto ao grau de contração e avaliadas morfológica e histologicamente quanto ao número de mastócitos, densidade das fibras colágenas e neovascularização. O grau de contração das feridas foi significativamente maior no grupo tratado (p<0,05) quando comparado ao grupo controle. O grupo tratado apresentou também maior quantidade de vasos sanguíneos, fibras colágenas e mastócitos. O creme contendo lectina BmoLL de folhas da Bauhinia Monandra Kurz, mostrou ser eficiente no processo de cicatrização de feridas, na qual, foi capaz de expressar propriedades de modular o processo inflamatório e de estimular a multiplicação celular e das estruturas necessárias ao processo cicatricial.

Abstract Lectins of plant origin are non-immunological proteins that agglutinate red blood cells due to their high ability to bind reversibly to carbohydrates. Several researches have evidenced its action as insecticidal, antimicrobial, antitumor, anti-inflammatory and healing agent. Therefore, this work aims to evaluate the healing activity in cream containing lectin BmoLL in Bauhinia Monandra Kurz (cowpaw) leaves applied daily to skin wounds in Wistar rats, evaluated by macroscopic, morphometric and histological techniques. Forty animals were used, divided into two groups containing 20 animals each, forming a treated group (received the cream and identified by LL) and the control group (received the vehicle and identified by L). Each group was divided into four subgroups containing five animals each (for example, for the control group, L1, L2, L3, L4, and L5), which were evaluated at 4th, 7th, 14th, and 21st postoperative days. - operatively, respectively. In each animal were made two surgical wounds (right and left antimer) leaving the adjacent muscle fascia. Wounds were measured for degree of contraction and evaluated morphologically and histologically for mast cell number, collagen fiber density and neovascularization. The degree of wound contraction was significantly higher in the treated group (p <0.05) when compared to the control group. The treated group also presented larger amount of blood vessels, collagen fibers and mast cells. Bauhinia Monandra Kurz's BmoLL lectin-containing cream showed to be efficient in the wound healing process, in which it was able to express properties of modulating the inflammatory process and stimulating cell multiplication and the structures necessary for the healing process.

Lectin, hemolysin and protease inhibitors in seed fractions with ovicidal activity against Haemonchus contortus / Lectina, hemolisina e inibidores de protease em frações de sementes com atividade ovicida contra Haemonchus contortus

Bioactive molecules of plant species are promising alternatives for the chemical control of gastrointestinal nematodes in ruminants. Extracts of native and exotic seed species from Brazil's semi-arid region were tested in vitro in an egg hatch assay and the bioactivity of their proteins was investigated. Each seed species was subjected to three extractions with three types of solvents. All the seeds showed ovicidal activity, which varied according to the solvents. Higher ovicidal activity was found in the molecule fractions of low molecular weight (<12 kDa) for Albizia lebbeck, Ipomoea asarifolia, Jatropha curcas, Libidibia ferrea, Moringa oleifera and Ricinus communis (P<0.05, Bonferroni test). The two fractions of Crotalaria spectabilis showed the same ovicidal activity (P>0.05, Bonferroni test). Hemagglutinating activity was detected in the fractions of C. spectabilis and M. oleifera fractions, hemolysin activity in the A. lebbeck and M. oleifera fractions, serine protease inhibitory activity in the A. lebbeck, I. asarifolia, J. curcas, M. oleifera and R. communis fractions, cysteine protease inhibitor activity in the M. oleifera fraction, and no protein activity in the L. ferrea fraction. The results of this work reveal new plant species with a potential for use in controlling nematode parasites in goats, thus opening a new field of research involving plant protein molecules with ovicidal properties.

Moléculas bioativas de espécies vegetais são alternativas promissoras ao controle químico dos nematoides gastrintestinais em ruminantes. Extratos de sementes de espécies nativas e exóticas do Semiárido Brasileiro foram testados in vitro em ensaio de eclosão de ovos e investigada a natureza proteica da bioatividade. Três extrações com três solventes foram feitas para cada semente estudada. Todas as sementes apresentaram atividade ovicida, variando com o solvente utilizado. Maior taxa de inibição da eclosão concentrou-se nas frações de moléculas de baixa massa molecular (<12 kDa) para Albizia lebbeck, Ipomoea asarifolia, Jatropha curcas, Libidibia ferrea, Moringa oleifera e Ricinus communis (P<0,05, teste de Bonferroni). Crotalaria spectabilis mostrou atividade nas duas frações, sem diferença entre elas (P>0,05, teste de Bonferroni). Observou-se atividade hemaglutinante nas frações de C. spectabilis e M. oleifera, de hemolisina em A. lebbeck e M. oleifera, de atividade inibidora de protease da serina em A. lebbeck, I. asarifolia, J. curcas, M. oleifera e R. communis, de atividade inibidora de protease da cisteína em M. oleifera e nenhuma atividade proteica na fração de L. ferrea. Os resultados revelaram novas espécies botânicas com potencial de controle de nematoides em caprinos e um novo campo de pesquisa, o estudo de moléculas de origem proteica com atividade ovicida.

PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA E EFEITO NA INIBIÇÃO DE BIOFILME BACTERIANO DE UMA LECTINA PRESENTE NA ESPONJA MARINHA Chondrilla caribensis. FORTALEZA-CE 2017

As esponjas estão incluídas no filo Porífera, são animais sésseis, filtradores e multicelulares. Elas possuem um grande potencial biotecnológico e farmacológico. Vários compostos têm sido descobertos nesses animais, tais como metabolitos com atividade anti-inflamatória, atividade antimicrobiana, atividade antitumoral, atividade anti-incrustante, atividade citotóxica e lecinas. As lectinas podem ser definidas como proteínas ou glicoproteínas que se ligam reversivelmente aos carboidratos e são capazes de aglutinar eritrócitos e outros tipos de células e/ou precipitar polissacarídeos. As esponjas marinhas são consideradas uma rica fonte de lectinas, com grande potencial biotecnológico. Dessa forma, objetivo do presente trabalho foi purificar, caracterizar bioquimicamente e avaliar o efeito na inibição do biofilme bacteriano de uma lectina isolada na esponja marinha Chodrilla caribensis do litoral do Ceará. CCL (Chodrilla caribensis lectin) foi purificada a partir da combinação de cromatografia de troca iônica e cromatografia de afinidade. A nova lectina é uma glicoproteina, com um teor de 5,2% de carboidratos e com um tamanho de aproximadamente 15 kDa. CCL apresentou afinidade por lactose, sua atividade foi melhor em pH na faixa neutro-alcalina e a perdeu sua atividade completamente quando aquecida a 100°C. A estrutura teórica secundária de CCL consistiu em 10,4% de hélice, 73,4% de estrutura e 16,2 % de região desestruturada. Além disso, a CCL foi cristalizada, através do ensaio preliminar de cristalização. A proteína foi altamente tóxica contra naúplios de Artemia sp., apresentando um LC50 = 6,3 g.mL-1 e foi eficaz na inibição da formação de biofilme das bactérias Gram-positivas, S. aureus e S. epidermidis. Em relação ao número de células viáveis, CCL foi eficaz no tratamento com S. epidermidis, em todas as concentrações.

The sponges are included in the phylum Porífera, are sessile, filtering and multicellular animals. They have great biotechnological and pharmacological potential. Several compounds have been discovered in these animals, such as metabolites with anti-inflammatory activity, antimicrobial activity, antitumor activity, antifouling activity, cytotoxic activity and lectin. Lectins can be defined as proteins or glycoproteins that bind reversibly to carbohydrates and are capable of binding erythrocytes and other cell types and / or precipitating polysaccharides. Marine sponges are considered a rich source of lectins, with great biotechnological potential. Thus, the objective of the present work was to purify, characterize biochemically and evaluate the effect on bacterial biofilm inhibition of an isolated lectin in the marine sponge Chodrilla caribensis from the coast of Ceará. CCL (Chodrilla caribensis lectin) was purified from the combination of ion exchange chromatography and affinity chromatography. The new lectin is a glycoprotein, with a content of 5.2% carbohydrate and a size of approximately 15 kDa. CCL showed affinity for lactose, its activity was better at pH in the neutral-alkaline range and the protein only lost its activity completely when heated to 100 ° C. The theoretical secondary structure of CCL consisted of 10.4% of -helix, 73.4% of -structure and 16.2% of unstructured region. In addition, the CCL was crystallized through the preliminary crystallization test. The protein was highly toxic against Artemia sp. Nauplii, presenting an LC 50 = 6.3 g.mL-1 and was effective in inhibiting the biofilm formation of Gram-positive bacteria, S. aureus and S. epidermidis. Regarding the number of viable cells, CCL was effective only in treatment with S. epidermidis, at all concentrations.

PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA E EFEITO NA INIBIÇÃO DE BIOFILMES BACTERIANOS DE UMA LECTINA ISOLADA DA ESPONJA MARINHA Aaptos sp. FORTALEZA 2017

Pertencentes ao filo porifera (do latim porus, poro, + fera, portador de), as esponjas são os animais multicelulares mais primitivos do planeta. São sésseis, bentônicas, sendo predominantemente marinhas. Nas últimas décadas, as esponjas têm se revelado como uma abundante e promissora fonte de compostos bioativos, como por exemplo as lectinas. As lectinas podem ser definidas como proteínas/glicoproteínas de origem não imune que se ligam e/ou precipitam carboidratos e glicoconjugados e substâncias que os contenham, livres em solução ou na superfície celular, não alterando a estrutura covalente das ligações glicosídicas, de forma reversível e não covalente. Dessa forma, objetivo do presente trabalho foi purificar, caracterizar bioquimicamente e avaliar o efeito na inibição de biofilmes bacterianos de uma lectina isolada da esponja marinha Aaptos sp. A nova lectina (AL Aaptos Lectin) foi isolada a partir da combinação das cromatografias de afinidade em matriz goma de Guar seguida por cromatografia de exclusão molecular em sistema UPLC. AL foi capaz de aglutinar eritrócitos de coelho nativos e tratados enzimaticamente, sendo inibida por galactosídeos. A proteína é estável em pH neutro a alcalino e perde a atividade a partir de 40ºC. A massa molecular determinada por espectrometria de massas foi de 13.655 +/- 2 Da. Análises de dicroísmo circular sugerem que a lectina é constituída de 28% de -hélice, 26% de folha-, e de 46% de região randômica. AL não foi tóxica contra náuplios de artemia e não foi capaz de reduzir a biomassa dos biofilmes bacterianos, mas foi capaz de reduzir o número de células viáveis da bactéria E. coli. Estudos posteriores serão necessários para elucidação da estrutura da lectina e para se descobrir possíveis aplicações biotecnológicas da nova proteína.

Belonging to the porifera phylum (from Latin porus, pore, + beast, bearer of), sponges are the most primitive multicellular animals on the planet. They are sessile, benthic, being predominantly marine. In recent decades, sponges have proved to be an abundant and promising source of bioactive compounds, such as lectins. Lectins can be defined as proteins/ glycoproteins of nonimmune origin that bind and/or precipitate carbohydrates and glycoconjugates and substances containing them, free in solution or on the cell surface, without changing the covalent structure of the glycosidic bonds, reversibly and not covalent. Thus, the objective of the present work was to purify, characterize biochemically and test possible biological activities of a lectin present in the marine sponge Aaptos sp. The novel lectin (AL - Aaptos Lectin) was isolated from the combination of affinity chromatography on Guar gum matrix followed by molecular exclusion chromatography on UPLC system. AL was able to agglutinate native and enzymatically treated rabbit erythrocytes and was inhibited by galactosides. The new protein is stable at neutral to alkaline pH, is thermolabile by totally losing its activity at 40 ° C, and its molecular mass determined by spectrometry was 13.655 ± 2 Da. According to circular dichroism the lectin consists of 28% -helix, 26% -sheet, and 46% random region. AL was nontoxic against artemia nauplii and was not able to inhibit bacterial biofilm formation but was able to reduce the number of viable E. coli bacteria cells. Further studies will be needed to elucidate the structure of the lectin and to discover possible biotechnological applications of the new protein.

Pathological findings in fetuses of goats and cattle poisoned by Sida carpinifolia (Malvaceae) / Achados patológicos em fetos de caprinos e bovinos intoxicados por Sida carpinifolia (Malvaceae)

In Brazil, the consumption of Sida carpinifolia by livestock has been associated with neurological diseases linked to lysosomal storage disorders. This paper describes the pathological findings in two caprine fetuses from dams that were experimentally poisoned with S. carpinifolia. The goats were orally dosed with 10 and 13g/kg of a paste of green chopped S. carpinifolia for 30 days and were observed for an additional 15 days period after the last dosage with the plant; thereafter they were euthanized and necropsied. The dams showed only slight clinical signs. The study also includes the findings in one bovine fetus from a naturally S. carpinifolia poisoned cow which showed mild incoordination, generalized tremors, staggering, and frequent falls. The cow was euthanized and necropsied. While there were no significant histopathological changes in the goats, in the cow vacuolation of Purkinje neurons of the cerebellum, pancreatic acinar cells, and thyroid follicular cells were observed. The main microscopic changes observed in the caprine and bovine fetuses were vacuolation in the epithelium of renal tubules, thyroid follicular cells, and Purkinje neurons of the cerebellum. Transmission electron microscopy of sections from CNS of the cow and its fetus revealed vacuoles containing fine granular material surrounded by membrane. Lectin-histochemistry of CNS sections from goat fetuses marked lightly to sWGA lectins, WGA, and Con-A.(AU)

No Brasil, o consumo de Sida carpinifolia por animais de produção tem sido associada a doenças neurológicas relacionadas com doença de depósito lisossômico. Este trabalho descreve os achados patológicos observados em dois fetos caprinos de mães que foram experimentalmente intoxicadas por S. carpinifolia. As cabras foram intoxicadas experimentalmente com S. carpinifolia nas doses de 10 e 13g/kg durante 30 dias e foram acompanhadas durante 15 dias após o consumo da planta. Após este período foram eutanasiadas e necropsiadas. O estudo também inclui os achados patológicos encontrados em um feto de uma fêmea bovina intoxicada naturalmente pela planta, que mostrou leve incoordenação, tremores generalizados, andar desequilibrado e quedas frequentes. A vaca foi eutanasiada e necropsiada. Embora não houvesse alterações histológicas significativas nas cabras, vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, das células acinares do pâncreas e nas células foliculares da tireoide foram observadas na vaca. As principais alterações histológicas observadas nos fetos caprinos e no feto bovino foram vacuolização no epitélio dos túbulos renais, nas células foliculares da tireoide e nos neurônios de Purkinje do cerebelo. Na microscopia eletrônica de transmissão do sistema nervoso central da vaca e de seu feto revelaram-se vacúolos contendo material finamente granulado e delimitado por membrana. Na técnica de lectina-histoquímica dos fetos caprinos houve marcação leve no SNC para as lectinas sWGA, WGA e para Con-A.(AU)

DETERMINAÇÃO DA ESTRUTURA PRIMÁRIA E ANÁLISE DO POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE UMA LECTINA DA ALGA MARINHA VERMELHA Amansia multifida J.V. LAMOUROUX

Os oceanos guardam 50% da biodiversidade do planeta sendo o maior reservatório de compostos bioativos. As algas marinhas participam de um grupo diversificado de organismos que são fonte de uma gama de compostos bioativos com aplicação diversificada para benefício humano. Dentre esses compostos estão as lectinas, (glico) proteínas ubíquas com pelo menos um domínio não catalítico que se ligam específica e reversivelmente a carboidratos podendo aglutinar células e/ou glicoconjugados. Estudos com lectinas de algas, embora ainda recentes quando comparados a lectina de outros organismos, mostram que essas proteínas possuem uma ampla possibilidade de aplicação biotecnológica. A AIDS, o câncer, e também infecções causadas por bactérias resistentes a antibióticos são problemas de saúde pública que matam centenas de milhares de pessoas anualmente, e as lectinas de algas, têm atraído atenção especial com relação a estudos com atividades antivirais, contra células cancerígenas e antibióticas. Por outro lado, estudos investigando a atividade antioxidante de lectinas é pouco explorado havendo apenas um estudo com lectina de alga relatado até o momento. O objetivo desse trabalho foi determinar a estrutura primária da lectina de Amansia multifida (AML) através da combinação das técnicas de espectrometria de massas, Degradação de Edman e clonagem de cDNA, bem como avaliar o potencial biotecnológico da AML através de ensaios de atividade contra células de câncer colorretal, vírus HIV-I e HIV-II, atividade antioxidante e formação de biofilmes bacterianos. A estrutura primária da AML, associada às suas características físico-químcas, comprovou que ela é mais uma integrante da família OAAH que possui quatro domínios repetidos na sua sequência de aminoácidos além de um sítio de ligação a carboidrato conservado e com alta identidade com os das lectinas da família OAAH. A AML foi capaz de reduzir a viabilidade celular de células de câncer colorretal e de reduzir o número de células viáveis de S. aureus e E.coli. Apresentou atividade contra vírus HIV em concentrações 0,77 µM para HIV-1 e 2,08 µM para HIV-2 com células de linfócitos T, e EC50 foi de 1,55 µM para -1 em células SUPT1 co-cultivadas com HUT78. Este trabalho também é o primeiro relato de atividade antioxidante de uma lectina de alga marinha vermelha.

Fifty percent of the biodiversity of the world are in the oceans. The seaweeds are a diverse group of organisms that are the source of bioactive compounds with diverse application for human benefit. Among these compounds are lectins, ubiquitous proteins or glycoproteins with at least one non-catalytic domain binding reversibly to a specific mono- or oligosaccharides. Studies with algae lectin, although still recent when compared to lectins from other organisms, show that these proteins have a wide possibility of biotechnological applications. AIDS, cancer as well infections caused by antibiotic-resistant bacteria are public health problems that kill hundreds of thousands of people each year, lectins from algae have been shown proteins with highly potent activity because of their specificity to carbohydrates high mannose. Because of that, algae lectins have attracted particular attention with regard to studies of antiviral activities, against cancer cells and antibiotic. Furthermore, studies researching antioxidant activity of lectins are underexplored with only one reported with this property. The aim of this study was to determine the primary structure of the Amansia multifida lectin (AML) by combining mass spectrometry, Edman degradation and molecular biology, evaluate its antioxidant activity, biotechnological potential of AML against cancer cells, HIV-I and HIV- II and against growth of bacterial biofilms. The sequence when compared to databases (NCBI) showed homology to lectins belonging to the family OAAH. The results have shown that AML is a protein of OAAH family with four repeated domains in its aminoacid sequence as well as a conserved carbohydrate binding site with high identity with the lectins of OAAH family. AML is the first lectin from red marine alga with antioxidant activity, capable to reduce cell viability of colon cancer cells, it also reduces the number of viable cells of S. aureus and E. coli, and exhibit activity at micromolar concentrations against HIV-I and HIV-II virus.

Intoxicação por sementes de pitombeira (Talisia esculenta) em um cão - relato de caso / Intoxication by pitomba (Talisia esculenta) seeds in a dog - case report / Intoxicación con semillas de pitombeira (Talisia esculenta) en un perro - reporte de caso

Uma cadela sem raça definida, de cinco anos de idade, deu entrada para atendimento apresentando sintomatologia neurológica aguda caracterizada por ataxia, rigidez muscular de membros torácicos, marcante depressão, letargia, fraqueza, incoordenação, midríase e diminuição bilateral de reflexo pupilar. A paciente foi internada, sendo observada uma evolução do quadro para tetraparesia com sialorreia e prostração após 12 horas. Houve dois episódios de vômito 24 horas após o internamento, evidenciando-se grande quantidade de sementes de Talisia esculenta inteiras e trituradas. A literatura cita casos de intoxicação por ingestão de folhas e frutos da T. esculenta em bovinos e ovinos com sintomatologia semelhante. O objetivo do presente relato é registrar o referido caso, uma vez que não foram encontradas referências abordando tal tema em animais de companhia na literatura consultada.

A five-year-old mongrel bitch was admitted for acute care presenting neurological symptoms such as ataxia, muscular stiffness on forelimbs, pronounced depression, lethargy, weakness, incoordination, mydriasis and bilaterally decreased pupillary reflex. Twelve hours post-admittance, the patient developed tetraparesis, salivation and prostration; 24 hours post-admittance, the patient vomited both crushed and intact seeds of Talisia esculenta. Literature reports cases of sheep and cattle poisoning with similar symptoms by ingestion of fruits and leaves of T. esculenta. The aim of this article is to report this case, since no such records in companion animals are available.

Una perra mestiza de cinco años fue atendida presentando sintomatología neurológica aguda caracterizada por ataxia, rigidez muscular en miembros anteriores, marcada depresión, letargia, debilidad, incoordinación, midriasis y disminución bilateral del reflejo pupilar. La paciente fue internada y se pudo observar una evolución del cuadro a una tetraparesia com sialorrea y postración después de 12 horas. Veinticuatro horas después de internada, la paciente vomitó, momento en el cual se hizo evidente la presencia de una gran cantidad de semillas enteras y trituradas de Talisia esculenta. La literatura cita casos de intoxicación por ingesta de hojas y frutos de T. esculenta en bovinos y ovinos, que presentan una sintomatología similar. El objetivo del presente relato es registrar el caso referido, ya que no se encontraron trabajos en la literatura consultada, relacionados con este tema en animales de compañía.

Intoxicação por sementes de pitombeira (Talisia esculenta) em um cão - relato de caso / Intoxication by pitomba (Talisia esculenta) seeds in a dog - case report / Intoxicación con semillas de pitombeira (Talisia esculenta) en un perro - reporte de caso

Uma cadela sem raça definida, de cinco anos de idade, deu entrada para atendimento apresentando sintomatologia neurológica aguda caracterizada por ataxia, rigidez muscular de membros torácicos, marcante depressão, letargia, fraqueza, incoordenação, midríase e diminuição bilateral de reflexo pupilar. A paciente foi internada, sendo observada uma evolução do quadro para tetraparesia com sialorreia e prostração após 12 horas. Houve dois episódios de vômito 24 horas após o internamento, evidenciando-se grande quantidade de sementes de Talisia esculenta inteiras e trituradas. A literatura cita casos de intoxicação por ingestão de folhas e frutos da T. esculenta em bovinos e ovinos com sintomatologia semelhante. O objetivo do presente relato é registrar o referido caso, uma vez que não foram encontradas referências abordando tal tema em animais de companhia na literatura consultada.(AU)

A five-year-old mongrel bitch was admitted for acute care presenting neurological symptoms such as ataxia, muscular stiffness on forelimbs, pronounced depression, lethargy, weakness, incoordination, mydriasis and bilaterally decreased pupillary reflex. Twelve hours post-admittance, the patient developed tetraparesis, salivation and prostration; 24 hours post-admittance, the patient vomited both crushed and intact seeds of Talisia esculenta. Literature reports cases of sheep and cattle poisoning with similar symptoms by ingestion of fruits and leaves of T. esculenta. The aim of this article is to report this case, since no such records in companion animals are available.(AU)

Una perra mestiza de cinco años fue atendida presentando sintomatología neurológica aguda caracterizada por ataxia, rigidez muscular en miembros anteriores, marcada depresión, letargia, debilidad, incoordinación, midriasis y disminución bilateral del reflejo pupilar. La paciente fue internada y se pudo observar una evolución del cuadro a una tetraparesia com sialorrea y postración después de 12 horas. Veinticuatro horas después de internada, la paciente vomitó, momento en el cual se hizo evidente la presencia de una gran cantidad de semillas enteras y trituradas de Talisia esculenta. La literatura cita casos de intoxicación por ingesta de hojas y frutos de T. esculenta en bovinos y ovinos, que presentan una sintomatología similar. El objetivo del presente relato es registrar el caso referido, ya que no se encontraron trabajos en la literatura consultada, relacionados con este tema en animales de compañía.(AU)

INVESTIGAÇÃO DO PERFIL PROTEÔMICO DE Oreochromis niloticus (TILÁPIA DO NILO): IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS RELACIONADAS AO ESTRESSE CAUSADO POR AMÔNIA.

investigação do proteoma é um componente essencial para fornecer informações acerca das proteínas envolvidas em estresses. O presente trabalho tem o objetivo de determinar possíveis alterações no perfil de expressão de proteínas induzidas por estresse com amônia, em tecido hepático e branquial de Oreochromis niloticus (Tilápia do Nilo) e identificar possíveis biomarcadores relacionados a esse estresse, bem como, isolar e caracterizar uma lectina identificada no tecido hepático de tilápia. Os peixes foram cultivados em sistema outdoor e divididos em dois grupos: grupo experimental (que não recebeu aeração mecânica) grupo controle (que recebeu aeração mecânica da água). Foram utilizados 10 peixes de cada grupo para análise proteômica. O perfil das proteínas foi obtido através da técnica de eletroforese bidimensional e a identificação por espectrometria de massas. Para o isolamento e caracterização da lectina foi utilizado peixes comercialmente disponíveis. A análise proteômica comparativa revelou alteração na expressão de 24 spots no fígado e 6 spots em brânquias do grupo experimental. Os spots diferencialmente expressos foram submetidos à análise de espectrometria de massas, com identificação resultante de 5 proteínas para fígado e nenhuma para brânquias. As proteínas com nível de expressão alterado no fígado estão envolvidas na estrutura celular, transdução de sinal, modificação proteica, metabolismo e transporte, as quais podem ser fortes candidatas a biomarcadores de estresse por amônia. Estas podem estar relacionadas à recuperação e proteção celular, evitando danos severos na célula. Esses resultados podem fornecer uma melhor compreensão sobre as proteínas que estão envolvidas na resposta ao estresse estudado. Também foi isolada uma lectina do fígado de tilápia a partir da combinação das cromatografias de afinidade e troca iônica, apresentando um peso molecular estimado por SDS-PAGE em 26 kDa, foi inibida com mais eficiência pelo açúcar 4-Nitrofenil ß-Galactopironosídeo, inibindo a atividade lectínica a uma concentração de 1.562 mM, exibiu toxicidade a náuplios de Artemia sp após 48 horas e apresentou interferência na formação de biofilmes nas concentrações de 31,25 e 62, 5 g/mL para Staphylococcus aureus e de 125 e 250 g/mL para Escherichia coli e inibiu significantemente o número de células viáveis nas bactérias testadas.

The investigation of the proteome is an essential component to provide information about the proteins involved in stress. This study aims to determine possible changes in the expression profile of proteins induced by stress with ammonia in liver and gill tissues of Oreochromis. niloticus (Nile tilapia) and identify potential biomarkers related to stress, as well, purify a lectin identified in the liver of tilapia. The fish were grown in outdoor system and divided into two groups: negative control (they received no mechanical aeration) positive control (which received mechanical aeration of water). 10 fishes from each group were used for proteomic analysis. The proteins profiles were obtained by two-dimensional electrophoresis and identified by mass spectrometry. Lectin was isolated from liver of commercially available fish. Comparative proteomic analysis revealed changes in the expression of 24 spots in the liver and 6 spots in the gills at the negative control. The differentially expressed spots were subjected to analysis of mass spectrometry, with resulting identification of 5 proteins for liver and in gills were not identified. The altered expression levels proteins in the liver are involved in cell structure, signal transduction, protein modification, metabolism and transport, which can be strong candidates for ammonia biomarkers stress. This may be related to the recovery and cell protection by preventing severe damage to the cell. These results may provide a better understanding of the proteins that are involved in the stress response studied. It has also been isolated lectin of tilapia liver from the combination of affinity and ion exchange chromatographies, having a molecular weight estimated by SDS-PAGE at 26 kDa, was inhibited more efficiently by the 4-Nitrophenyl ß-Galactopironoside sugar, inhibiting the lectin activity at a concentration of 1,562 mM, exhibited toxicity at Artemia sp after 48 hours and showed interference in the formation of biofilms in concentrations of 31,25 and 62 5 µg/mL for Staphylococcus aureus and 125 and 250 µg/mL for Escherichia coli and inhibited significantly the number of viable cells in the tested bacteria.

Vacina contendo isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis para avaliação da resposta imunológica em fêmeas ovinas

A ovino-caprinocultura é uma área que vem apresentando um forte crescimento no Brasil nas últimas décadas, com um rebanho constituído por 17.668.063 e 9.386.316 cabeças, respectivamente. Com o crescimento dos rebanhos, vem aumentando também a incidência das doenças bacterianas. Para o combate a essas enfermidades, tem-se estudado a utilização de vacinas. A constituição destas vacinas podem variar entre DNA, células bacterianas mortas, as bacterinas, e células bacterianas vivas, pela toxina inativada, os toxóides, do Corynebacterium pseudotuberculosis, ou pela associação destes componentes, utilizando ou não algum tipo de adjuvante. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi elaborar uma vacina à base de células bacterianas de C. pseudotuberculosis, avaliar a resposta imunológica com base na técnica da atividade bactericida do soro de fêmeas ovinas vacinadas, avaliando ainda a atividade hemaglutinante no extrato de C. pseudotuberculosis. Para o alcance desses objetivos foram utilizadas as seguintes metodologias: os isolados utilizados para elaboração da vacina foram isolados de caprinos pertencentes as cidades de Petrolândia e Jatobá, PE, isolados e cultivados na bacterioteca do laboratório de microbiologia e imunologia animal da Univasf. Os animais após vacinados, passaram por coletas de sangue semanais e com o soro obtido através destas coletas foi realizada a atividade bactericida. O extrato obtido dos três isolados, foi colocado em contato com hemácias de coelho para avaliar a atividade hemaglutinante no extrato, a qual foi avaliada visualmente. Foi possível observar que após a vacinação, o sistema imunológico dos animais respondeu de forma positiva, sendo possível observar do aumento da atividade bactericida do soro desses animais, diminuindo a contagem de UFC/mL com o passar das coletas, fato este que está relacionado com a ativação do sistema de defesa dos animais, conhecido como sistema complemento. O ensaio de hemaglutinação utilizando hemácias de coelho foi positivo para função biológica da proteína com o extrato proteico, indicando presença de lectinas no conjunto de proteínas do C. pseudotuberculosis.

The sheep-goat is an area that has shown strong growth in Brazil in recent decades, with a herd consisting of 17,668,063 and 9,386,316 heads, respectively. With the growth of herds, it has also increased the incidence of bacterial diseases. To combat these diseases, we have studied the use of vaccines. The constitution of these vaccines may vary between DNA killed bacterial cells, bacterins, and live bacterial cells, the inactivated toxin toxoids of Corynebacterium pseudotuberculosis, or the combination of these components, with or without some type of adjuvant. Thus, the objective of this study was to develop a vaccine based on bacterial cells of C. pseudotuberculosis, evaluate the immune response based on the technique of bactericidal activity of serum from vaccinated sheep females still evaluating the hemagglutination activity in extract C. pseudotuberculosis. To achieve these objectives, the following methodologies were used: the isolates used for the preparation of the vaccine were isolated from goats belonging to the towns of Petrolândia and Jatoba, PE, isolated and cultured in bacterioteca microbiology laboratory animal and Immunology UNIVASF. The animals vaccinated after, underwent weekly blood samples and serum obtained through these collections was held bactericidal activity. The extract obtained from three isolated, was put in contact with rabbit red blood cells to evaluate the hemagglutination activity in the extract, which was assessed visually. It was observed that after vaccination, the immune system of animals responded positively and are recording increased bactericidal activity of the serum of these animals, reducing the CFU / mL count over the collections, a fact that is related to activation of the animal defense system known as the complement system. The hemagglutination assay using rabbit erythrocytes was positive for biological function of the protein with the protein extract, indicating the presence of lectins on the set proteins of C. pseudotuberculosis.

Uso da lectina do quiabo (Abelmoschus esculentus) como marcador da célula espermática ovina

As lectinas estão sendo empregadas como marcadores de superfície na membrana plasmática de espermatozoides devido sua ligação ao sacarídeos das mesmas. O objetivo consiste em buscar a localização de ligação e a colaboração da lectina de quiado (Abelmoschus esculentus) nos espermatozoides de ovinos. A lectina de A. esculentus foi purificada como o descrito em Soares et al. (2012). Foram utilizados 8 ejaculados de carneiros. As amostras foram diluídas em diluente padrão tris-gema acrescida de diferentes concentrações de lectinas conforme o tratamento: T1 0µg de lectina; T2 1µg de lectina; T3 3µg de lectina; T4 5µg de lectina. As amostras foram acondicionadas a 5°C. Para avaliações espermáticas nos períodos 0h, 2hs e 24hs elas eram aquecidas a 37°C. Para as análises de integridade de membrana, mitocôndria, fluidez e ROS, foi utilizada a citometria de fluxo. Para avaliação da cinética dos espermatozoides, foi utilizado o sistema Computer-Assisted Sperm Analysis (CASA). A marcação da lectina na célula espermática foi feita com FITC e observada através do Microscópio Confocal Invertido de Varredura a Laser e observamos que a fluorescência foi detectada na peça intermediária do espermatozoide. Em nenhum período de acondicionamento foi observada diferença em relação a integridade de membrana, mitocôndria e fluidez espermática. No período de 0 h na cinética espermática o deslocamento e a velocidade foram inferiores no T4 do que no T3 (P<0,05). Na avaliação de 2 hs o T2 foi superior aos demais tratamentos no deslocamento e velocidade espermática (P<0,05). Após acondicionamento por 24 h a 5ºC a cinética espermática foi superior no T3 em relação ao T4 não diferindo dos demais tratamentos. Este achado permite que a avaliação seminal possa ser realizada até 24 h sem perdas nas características seminais quando for adicionado com até 3µg de lectina a 5 ºC. Além de evidenciar que seu sítio de ligação é na peça intermediária de espermatozoides ovinos.

The lectins are employeds as surface markers in the plasma membrane of spermatozoa due to its binding to saccharides thereof. The aim is to seek the connection location and the collaboration of the lectin quiado (Abelmoschus esculentus) in sperm sheep. The lectin A. esculentus was purified as described in Smith et al. (2012). 8 ejaculates of ovines were used. The samples were diluted in Tris-egg yolk pattern plus diluent different concentrations of lectins according to treatment: T1 -0g lectin; T2 1g lectin; T3 -3g lectin; T4 -5g lectin. The samples were stored at 5°C. For reviews on sperm periods 0h, 2h and 24 hours they were heated to 37°C. For the analysis of membrane integrity, mitochondria, fluidity and ROS, we used flow cytometry. To evaluate the kinetics of sperm cells, we used the Computer-Assisted Sperm Analysis system (CASA). The marking of the lectin in the sperm cell was made with FITC and observed by Confocal Microscope Inverted Scanning Laser and observed that the fluorescence was detected in the intermediate part of the spermatozoon. In no conditioning period difference was observed in relation to membrane integrity, mitochondria and sperm flow. At 0 hour period in sperm kinetic displacement and the speed they were lower T4 than in T3 (P <0.05). In the assessment of 2 hours T2 was higher than others in the displacement and sperm velocity (P <0.05). After conditioning for 24 h at 5°C sperm kinetics was higher in T3 compared to T4 not differing from the other treatments. This finding allows that seminal assessment can be made up to 24 hours without loss in the seminal characteristics when added up to 3g lectin to 5°C. In addition to evidence that its binding site is in the middle piece of sperm ovines.

Doença do armazenamento lisossomal induzida pelo consumo de Sida carpinifolia em bovinos do Rio Grande do Sul / Lysosomal storage disease caused by Sida carpinifolia in cattle in Rio Grande do Sul

This paper reports the natural poisoning by Sida carpinifolia (guanxuma, chá-da-índia) in cattle in Rio Grande do Sul, Brazil. Five cattle were affected in the period 2001-2008. Clinical signs included weight loss, incoordination, walking difficulty, generalized tremors, frequent falls, and death. Microscopically, the main changes were vacuolation of Purkinje neurons in the cerebellum, pancreatic acinar cells, and thyroid follicular cells. Transmission electron microscopy revealed vacuoles bordered by membrane containing finely granular material. Lectin histochemistry showed positive staining in neurons with the lectins Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA), and Succinyl Triticum vulgaris (sWGA).(AU)

Relata-se a intoxicação natural por Sida carpinifolia (guanxuma, chá-da-índia) em bovinos no Rio Grande do Sul. Foram afetados cinco bovinos no período 2001-2008. O quadro clínico foi caracterizado por emagrecimento, incoordenação, dificuldade de locomoção, tremores generalizados, quedas frequentes e morte. Microscopicamente, as principais alterações foram vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, das células acinares do pâncreas e das células foliculares da tireoide. A microscopia eletrônica evidenciou vacúolos com conteúdo finamente granulado e delimitado por membrana. Na lectina-histoquímica, observou-se marcação em neurônios com as lectinas Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl Triticum vulgaris (sWGA).(AU)

Lectin-binding properties of Aeromonas caviae strains

The cell surface carbohydrates of four strains of Aeromonas caviae were analyzed by agglutination and lectin-binding assays employing twenty highly purified lectins encompassing all sugar specificities. With the exception of L-fucose and sialic acid, the sugar residues were detected in A. caviae strains. A marked difference, however, in the pattern of cell surface carbohydrates in different A. caviae isolates was observed. Specific receptors for Tritricum vulgaris (WGA), Lycopersicon esculentum (LEL) and Solanum tuberosum (STA) (D-GlcNAc-binding lectins) were found only in ATCC 15468 strain, whereas Euonymus europaeus (EEL, D-Gal-binding lectin) sites were present exclusively in AeQ32 strain, those for Helix pomatia (HPA, D-GalNAc-binding lectin) in AeC398 and AeV11 strains, and for Canavalia ensiformes (Con A, D-Man-binding lectin) in ATCC 15468, AeC398, AeQ32 and AeV11 strains, after bacterial growing at 37ºC. On the other hand, specific receptors for WGA and EEL were completely abrogated growing the bacteria at 22ºC. Binding studies with 125I- labeled lectins from WGA, EEL and Con A were performed. These assays essentially confirmed the selectivity, demonstrated in the agglutination assays of these lectins for the A. caviae strains.

Os carboidratos de superfície celular de quatro amostras de Aeromonas caviae foram analisados por aglutinação e ensaios de ligação de lectinas empregando vinte lectinas altamente purificadas com especificidade para açúcares. Com exceção da L-fucose e do ácido siálico, os resíduos de açúcar foram detectados em amostras de A. caviae. Entretanto, foi observada uma diferença marcante no padrão de carboidratos de superfície celular em diferentes amostras de A. caviae. Receptores específicos para Tritricum vulgaris (WGA), Lycopersicon esculentum (LEL) e Solanum tuberosum (STA), lectinas de ligação a D-GlcNAc, foram encontrados apenas na amostra ATCC 15468, enquanto sítios de Euonymus europaes (EEL), lectina de ligação a D-Gal, estavam presentes exclusivamente na amostra AeQ32, sítios de Helix pomatia (HPA), lectina de ligação a D-GalNac, nas amostras AeC398 e AeV11 e de Canavalia ensiformis (Com A), lectina de ligação a D-Man, nas amostras ATCC 15468, AeC398, AeQ32 e AeV11, após crescimento bacteriano a 37ºC. Por outro lado, receptores específicos para WGA e EEL foram completamente abolidos após o crescimento das bactérias a 22ºC. Estudos de ligação com lectinas WGA, EEL e Con A marcadas com 125I também foram realizados. Esses ensaios confirmaram a seletividade, demonstrada em ensaios de aglutinação dessas lectinas para as amostras de A. caviae.

Análise da dinâmica da origem e destino das células trofoblásticas na interface materno-fetal do útero gestante do cobaio na elucidação da organização da placenta vitelina invertida / Analysis of the dynamic of origin and fate of trophoblast cells in the maternal-fetal interface of pregnant guinea pig uterus to elucidate inverted yolk sac organization

A implantação embrionária e a placentação em cobaios são caracterizadas pela presença trofoblastos que se destacam da placenta principal, semelhantes ao trofoblasto extra-viloso de humanos. Nestes animais ultrapassam os limites, e podem ser encontrados infiltrados no profundamente no endométrio e no em ambiente externo ultrapassando aos limites da parede uterina. A cobaia desenvolve uma importante estrutura fisiológica de troca materno-embrionária, denominada de placenta vitelina invertida, definidas como membrana fetal destituída parcial ou totalmente do revestimento trofoblástico que permite a exposição do endoderma extra-embrionário em contato direto com o tecido materno. Tais características denotam um mecanismo de controle da resposta imune materna distinta dos paradigmas estabelecidos na reprodução humana e de roedores, assim como ratos e camundongos. Sendo a mais intrigante, a destituição do trofoblasto como célula da interface-materno-fetal que controla a tolerância imune-materna.No presente trabalho, procurou-se estabelecer a organização da placenta vitelina de cobaios a partir da identificação das células que compõe esta membrana extra-embrionária e identificar em que momento ocorre à remoção das células trofoblásticas, e a subseqüente forma de interação das células da placenta vitelina na interface com o tecido materno. Para tanto foram utilizados cobaias fêmeas com idade gestacional conhecida, sacrificadas para coleta de segmentos uterinos nos períodos iniciais da gestação e destinados ao processamento histotógico de embebição em parafina. Na ausência de marcadores celulares específicos conhecidos para cobaios, foram realizados testes prospectivos com reações: citoquímicas de PAS e azul de toluidina (AT; um painel de lectinas biotinadas com afinidade específica para diferentes açúcares; e imunocitoquímica para citoqueratina. As reações realizadas com PAS e AT não identificaram populações celulares com marcação seletiva. Contudo dentre as lectinas tetadas, a Erytrina cristagali lectin (ECL) apresentou reação altamente seletiva para a população de trofoblasto mural (TM) que se origina do trofectoderma, mantendo esta reatividade ao longo da gestação. Esta marcação permitiu avaliar temporal e espacialmente o destino destas células que ao longo da gestação eram mantidas como monocamada de TM revestindo externamente a placenta vitelina e, portanto, não expondo as células do endoderma parietal ou visceral ao ecido materno. Pelo acompanhamento do desenvolvimento embrionário nos cortes seriados, foi constatada no interior do blastocisto a organização de duas massas celulares internas em pólos opostos desde a fase de pré-eclosão. Uma das massas celulares constituída de embrioblastos que dará origem aos os folhetos embrionários nas fases subseqüentes, enquanto a outra formada as células tronco trofoblásticas precursora do cone ectoplacentário (CE). A cavidade da blastocele que separa estas duas massas celulares tem a sua parede revestida pelo endoderma parietal em fase tardia, após a formação da cavidade amniótica. Estes achados demonstram a pecularidade da embriogênese no cobaio, diferente daquelas descritas para humanos e outros roedores, não permitem analogias diretas, o que pode ter contribuído para o equívoco na descrição clássica da organização e constituição da placenta vitelina invertida de constituição córion-amniótica. Isto é, o trofoblasto participa da organização da placenta vitelina inicial e permanece na membrana âmnion-córion-vitelina perfazendo todo o limite do embrião ao longo da gestação. Portanto a hipótese da placenta vitelina parcial ou totalmente invertida baseada na descrição clássica em cobaios é decorrente da interpretação equivocada da embriogênese destes animais

The guinea pig embryo implantation and placentation is characterized by trophoblast cells detaching from the main placenta in a similar way of human extra-villous trophobasts that deeply intrude inside the endometrium and sometimes also found outside the uterine wall. Furthermore, this animal also develops inverted yolk sac placenta defined as fetal membrane partially or fully devoided of trophoblast sheet that allows extra-embryonic endoderma direct exposition to the maternal environment. These characteristics denote a distinct control mechanism of maternal immune response from the established paradigm for human and rodents (rat and mouse) reproduction, being most intriguing the depriving of trophoblast as cells of maternal-fetal interface regulating the maternal immune tolerance. The present work aimed to establish the organization of guinea pig yolk sac based on identification of cell populations composing this membrane and identification if, or, when the trophoblast cells are removed from and subsequent interaction way of yolk sac cell in interface with maternal tissue. It was used pregnant guinea pig sacrificed on established gestational day to collect uterine fragments on early pregnancy stage and processed by conventional paraffin embedding. Due to absence of known specific cell markers for guinea pig, was performed the prospective evaluation using PAS and toluidine blue (TB) cytochemistry and a screening using a panel of biotinylated lectin specific for different sugars and, anti-cytokeratin. The PAS and TB staining did not identify any specific cell population, however, among the lectins used, Erytrina cristagali lectin (ECL) showed high selective labeling to the trophoblast cells originated from the trophectoderm that was kept through the gestational period. This reaction pattern was useful to evaluate chronologically and topologically the fate of this cell and confirmed the constancy of these cells layering the yolk sac placenta in contact with maternal tissue and therefore, endodermal cells were not exposed to maternal environment. Evaluation of embryo development step by step in the serial sections showed the presence of two inner cell mass in opposite sites inside the pre-hatched blastocyst. One of this, was formed with embryoblast that latter will originate the embryonic sheets and the other formed with trophoblast stem cells (ST) will originate the ectoplacental-cone. The wall of blastocele cavity separate these two inner cell mass was initially covered by a single ECL positive mural trophoblast and only later after the amniotic cavity is formed the extraembyonic endodermal cells migrate from the embryonic sheets to cover internally the blastocele cavity to organize the yolk sac placenta. These findings show the peculiarity of guinea pig embryogenesis, quite different from those described for human and rodents and therefore, does not allow direct analogy and seems to contribute in the misunderstanding of classic description of inverted yolk sac placenta and its cellular organization. It means, the trophoblast cell participates in the early organization of yolk sac placenta and remains in chorioamniotic yolk sac fetal membrane constantly limiting the embryo surface in contact with maternal environment. Therefore, the hypothesis of complete or partially inverted yolk sac placenta seems to be a miss understanding of guinea pig embryogenesis