Genotypic evaluation of antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. isolated from bovine clinical mastitis / [Avaliação genotípica da resistência antimicrobiana em Staphylococcus spp. isolados de mastite clínica bovina]

Bovine clinical mastitis caused by Staphylococcus spp. is a serious and widespread disease in the world of dairy farming. Antimicrobial therapy is of fundamental importance in the prevention and treatment of infectious mastitis, but the indiscriminate use of antimicrobials acts as a determining factor for the spread of the disease. The present study evaluated the resistance profiles of 57 Staphylococcus spp. isolated from bovine clinical mastitis to beta-lactams and gentamicin, relating characteristics of phenotype (in vitro susceptibility tests) and genotype (detection and expression of genes encoding resistance - mecA, mecALGA251, blaZ, femA, femB, and aacA-aphD - using PCR and RT-PCR, respectively). One or more genes coding for resistance to different antimicrobials were detected in 50 Staphylococcus spp. isolates. The femA and femB genes were the most frequent (75.4% for both). The observed expression of the genes was as follows: blaZ (60%), femA (39.5%), aacA-aphD (50%), femB (32.6%), mecA (8.3%), and mecALGA251 (0%). Considering the relevance of the genus Staphylococcus to bovine mastitis, this study aimed to elucidate aspects regarding the genotypic and phenotypic profiles of these microorganisms so as to contribute to the development of effective strategies for mastitis control.(AU)

A mastite clínica bovina causada por Staphylococcus spp. é uma doença grave e generalizada no mundo da pecuária leiteira. A terapia antimicrobiana é de fundamental importância na prevenção e no tratamento da mastite infecciosa, mas o uso indiscriminado de antimicrobianos atua como fator determinante para a disseminação da doença. O presente estudo avaliou os perfis de resistência de 57 Staphylococcus spp. isolados de mastite clínica bovina em relação ao uso de betalactâmicos e gentamicina, relacionando características do fenótipo (testes de suscetibilidade in vitro) e genótipo (detecção e expressão de genes que codificam resistência - mecA, mecALGA251, blaZ, femA, femB, e aacA-aphD - usando PCR e RT-PCR, respectivamente). Um ou mais genes que codificam resistência a diferentes antimicrobianos foram detectados em 50 Staphylococcus spp. isolados. Os genes femA e femB foram os mais frequentes (75,4% para ambos). A expressão observada dos genes foi a seguinte: blaZ (60%), femA (39,5%), aacA-aphD (50%), femB (32,6%), mecA (8,3%) e mecALGA251 (0%). Considerando-se a relevância do gênero Staphylococcus para a mastite bovina, este estudo teve como objetivo elucidar aspectos referentes aos perfis genotípico e fenotípico desses microrganismos, a fim de contribuir para o desenvolvimento de estratégias eficazes para o controle da mastite.(AU)

Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil / Características de virulência, resistência e diversidade genética de estirpes de Salmonella Infantis isoladas de frangos de corte no Brasil

Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the β-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greatSalmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the ß-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greater than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers' production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.er than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers' production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.(AU)

Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos ß-lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters. O cluster B agrupou 33 estirpes, todas positivas para os genes lpfA e agfA, provenientes tanto do aviário quanto do matadouro frigorífico, persistentes durante todo o período do estudo. Este cluster ainda agrupou 18 estirpes clones com similaridade genética superior a 99%, todas isoladas no matadouro frigorífico. A presença dos genes de virulência, associada à persistência das estirpes clones durante um longo período do estudo, alertam para a possibilidade de S. Infantis em formar biofilme, devendo ser constantemente monitorada na cadeia de produção avícola, especialmente no ambiente de abate, de forma a conhecer o perfil das estirpes que podem contaminar o produto final e assim avaliar os perigos que representam para a saúde pública.(AU)

Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil / Características de virulência, resistência e diversidade genética de estirpes de Salmonella Infantis isoladas de frangos de corte no Brasil

Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the β-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greatSalmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat...(AU)

Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos ß-lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters...(AU)

Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil

ABSTRACT: Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broilers production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the -lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greater than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.

RESUMO: Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos -lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters. O cluster B agrupou 33 estirpes, todas positivas para os genes lpfA e agfA, provenientes tanto do aviário quanto do matadouro frigorífico, persistentes durante todo o período do estudo. Este cluster ainda agrupou 18 estirpes clones com similaridade genética superior a 99%, todas isoladas no matadouro frigorífico. A presença dos genes de virulência, associada à persistência das estirpes clones durante um longo período do estudo, alertam para a possibilidade de S. Infantis em formar biofilme, devendo ser constantemente monitorada na cadeia de produção avícola, especialmente no ambiente de abate, de forma a conhecer o perfil das estirpes que podem contaminar o produto final e assim avaliar os perigos que representam para a saúde pública.

Multidrug resistant and ESBL-producing Salmonella spp. isolated from poultry / Salmonella spp. produtora de ESBL e multirresistente a drogas isolada de frangos

Salmonella spp. is one of the main agents responsible for foodborne infection in humans, and products of poultry origin are the most common infection sources. Studies have shown the occurrence of antimicrobials resistant Salmonella spp. in animal products. The Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) are enzymes that confer to bacteria the ability to hydrolyze cephalosporin with an oximino side chain and monobactams. This study aimed to investigate antimicrobial resistance profile, identify phenotypes and genotypes for multiple drug resistance (MDR) and that produce ESBL from isolates of Salmonella spp. in the broiler production chain. We used samples of Salmonella spp. (n=11) isolates from poultry, poultry products and poultry-source environment from the state of Maranhão - Brazil. The isolates of Salmonella spp. assessed showed genotypical and phenotypical characteristics of MDR. The results show that 72.72% (08/11) of the strains presented the phenotypic profile for ESBL production. The isolates showed positivity to at least 13.64% (03/22) of the genes studied and the highest frequencies were observed in genes sul1 (73%), dfrA12 (55%), blaCTX-M (55%), tetA, tetB and tetC, with 45%. In conclusion, the strains of Salmonella spp. isolates present genotypic and phenotypic characteristics for MDR and ESBL production, demonstrating the dissemination risk of these microorganisms through the food chain.

Salmonella spp. é um dos principais agentes responsáveis por infecção de origem alimentar em humanos, sendo os produtos de origem avícola apontados como as fontes de infecção mais frequentes. Estudos demonstraram a ocorrência de Salmonella spp. resistente a antimicrobianos em produtos de origem animal. As β-lactamases de espectro extendido (ESBL) são enzimas que conferem às bactérias a capacidade de hidrolisar cefalosporinas com uma cadeia lateral oximino e monobactâmicos. Este estudo objetivou investigar o perfil de resistência a antimicrobianos, identificar fenótipos e genótipos de multirresistência a drogas (MDR), e produção de ESBL em isolados de Salmonella spp. provenientes da cadeia produtiva de frangos de corte. Foram utilizadas amostras de Salmonella spp. (n=11) isoladas de aves, produtos e ambiente de origem avícola do estado do Maranhão - Brasil. Os isolados de Salmonella spp. avaliados apresentaram resistência múltipla a drogas tanto genotípica quanto fenotipicamente. Os resultados mostram que 72,72% (08/11) das cepas apresentaram perfil fenotípico de produção de ESBL. Os isolados apresentaram positividade a pelo menos 13,64% (03/22) dos genes pesquisados, sendo as maiores frequências observadas nos genes sul1 (73%), dfrA12 (55%), blaCTX-M (55%), tetA, tetB e tetC, com 45%. Conclui-se que as cepas de Salmonella spp. isoladas apresentam características genotípicas e fenotípicas de multirresistência a drogas e produção de ESBL, demonstrando o risco de disseminação destes microrganismos ao longo da cadeia alimentar.

Multidrug resistant and ESBL-producing Salmonella spp. isolated from poultry / Salmonella spp. produtora de ESBL e multirresistente a drogas isolada de frangos

Salmonella spp. is one of the main agents responsible for foodborne infection in humans, and products of poultry origin are the most common infection sources. Studies have shown the occurrence of antimicrobials resistant Salmonella spp. in animal products. The Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) are enzymes that confer to bacteria the ability to hydrolyze cephalosporin with an oximino side chain and monobactams. This study aimed to investigate antimicrobial resistance profile, identify phenotypes and genotypes for multiple drug resistance (MDR) and that produce ESBL from isolates of Salmonella spp. in the broiler production chain. We used samples of Salmonella spp. (n=11) isolates from poultry, poultry products and poultry-source environment from the state of Maranhão - Brazil. The isolates of Salmonella spp. assessed showed genotypical and phenotypical characteristics of MDR. The results show that 72.72% (08/11) of the strains presented the phenotypic profile for ESBL production. The isolates showed positivity to at least 13.64% (03/22) of the genes studied and the highest frequencies were observed in genes sul1 (73%), dfrA12 (55%), blaCTX-M (55%), tetA, tetB and tetC, with 45%. In conclusion, the strains of Salmonella spp. isolates present genotypic and phenotypic characteristics for MDR and ESBL production, demonstrating the dissemination risk of these microorganisms through the food chain.(AU)

Salmonella spp. é um dos principais agentes responsáveis por infecção de origem alimentar em humanos, sendo os produtos de origem avícola apontados como as fontes de infecção mais frequentes. Estudos demonstraram a ocorrência de Salmonella spp. resistente a antimicrobianos em produtos de origem animal. As β-lactamases de espectro extendido (ESBL) são enzimas que conferem às bactérias a capacidade de hidrolisar cefalosporinas com uma cadeia lateral oximino e monobactâmicos. Este estudo objetivou investigar o perfil de resistência a antimicrobianos, identificar fenótipos e genótipos de multirresistência a drogas (MDR), e produção de ESBL em isolados de Salmonella spp. provenientes da cadeia produtiva de frangos de corte. Foram utilizadas amostras de Salmonella spp. (n=11) isoladas de aves, produtos e ambiente de origem avícola do estado do Maranhão - Brasil. Os isolados de Salmonella spp. avaliados apresentaram resistência múltipla a drogas tanto genotípica quanto fenotipicamente. Os resultados mostram que 72,72% (08/11) das cepas apresentaram perfil fenotípico de produção de ESBL. Os isolados apresentaram positividade a pelo menos 13,64% (03/22) dos genes pesquisados, sendo as maiores frequências observadas nos genes sul1 (73%), dfrA12 (55%), blaCTX-M (55%), tetA, tetB e tetC, com 45%. Conclui-se que as cepas de Salmonella spp. isoladas apresentam características genotípicas e fenotípicas de multirresistência a drogas e produção de ESBL, demonstrando o risco de disseminação destes microrganismos ao longo da cadeia alimentar.(AU)

Study of pandrug and heavy metal resistance among E. coli from anthropogenically influenced Delhi stretch of river Yamuna

Escalating burden of antibiotic resistance that has reached new heights present a grave concern to mankind. As the problem is no longer confined to clinics, we hereby report identification of a pandrug resistant Escherichia coli isolate from heavily polluted Delhi stretch of river Yamuna, India. E. coli MRC11 was found sensitive only to tobramycin against 21 antibiotics tested, with minimum inhibitory concentration values >256 µg/mL for amoxicillin, carbenicillin, aztreonam, ceftazidime and cefotaxime. Addition of certain heavy metals at higher concentrations were ineffective in increasing susceptibility of E. coli MRC11 to antibiotics. Withstanding sub-optimal concentration of cefotaxime (10 µg/mL) and mercuric chloride (2 µg/mL), and also resistance to their combinatorial use, indicates better adaptability in heavily polluted environment through clustering and expression of resistance genes. Interestingly, E. coli MRC11 harbours two different variants of blaTEM (blaTEM-116 and blaTEM-1 with and without extended-spectrum activity, respectively), in addition to mer operon (merB, merP and merT) genes. Studies employing conjugation, confirmed localization of blaTEM-116, merP and merT genes on the conjugative plasmid. Understanding potentialities of such isolates will help in determining risk factors attributing pandrug resistance and strengthening strategic development of new and effective antimicrobial agents.(AU)

In vitro antimicrobial susceptibility and genetic resistance determinants of Streptococcus agalactiae isolated from mastitic cows in Brazilian dairy herds / Suscetibilidade in vitro a antimicrobianos e determinantes genéticos de resistência em Streptococcus agalactiae isolados de mastite em rebanhos bovinos brasileiros

Streptococcus agalactiae is one of the main causative agents of bovine mastitis and is associated with several economic losses for producers. Few studies have evaluated antimicrobial susceptibility and the prevalence of genetic resistance determinants among isolates of this bacterium from Brazilian dairy cattle. This work aimed to evaluate the frequency of the antimicrobial resistance genes ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, and aad-6, and in vitro susceptibility to the antimicrobials amikacin, erythromycin, clindamycin, tetracycline, gentamicin, penicillin, ceftiofur, and cefalotin, and the associations between resistance genotypes and phenotypes among 118 S. agalactiae isolates obtained from mastitic cows in Brazilian dairy herds. Of the resistance genes examined, ermB was found in 19 isolates (16.1%), tetO in 23 (19.5%), and tetM in 24 (20.3%). The genes ermA, mefA, aphA3, and aad-6 were not identified. There was an association between the presence of genes ermB, tetM, and tetO and phenotypic resistance to erythromycin, clindamycin, and tetracycline. Rates of resistance to the tested antibiotics varied, as follows: erythromycin (19.5%), tetracycline (35.6%), gentamicin (9.3%), clindamycin (20.3%), penicillin (3.4%), and amikacin (38.1%); conversely, all isolates were susceptible to ceftiofur and cefalotin. Antimicrobial resistance testing facilitates the treatment decision process, allowing the most judicious choice of antibiotics. Moreover, it enables regional and temporal monitoring of the resistance dynamics of this pathogen of high importance to human and animal health.

Streptococcus agalactiae é um dos principais agentes causadores de mastite em bovinos e de consequentes perdas econômicas aos produtores. Poucos estudos que avaliaram a susceptibilidade a antimicrobianos e a presença de determinantes genéticos de resistência para este agente em bovinos leiteiros do Brasil. Este trabalho teve por objetivo avaliar a frequência dos genes de resistência a antimicrobianos ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, aad-6, bem como a susceptibilidade in vitro aos antimicrobianos amicacina, eritromicina, clindamicina, tetraciclina, gentamicina, penicilina, ceftiofur e cefalotina, e as associações entre genótipos e fenótipos de resistência em 118 isolados de S. agalactiae provenientes de casos de mastite em rebanhos bovinos brasileiros. Dentre os genes de resistência pesquisados, ermB foi encontrado em 19 isolados (16,1%), tetO em 23 (19,5%) e tetM em 24 (20,3%). Os genes ermA, mefA, apha3 e aad6 não foram detectados. Verificou-se associação entre a presença dos genes ermB, tetM e tetO e os fenótipos de resistência à eritromicina, clindamicina e tetraciclina. Foram encontrados diferentes índices de resistência aos antibióticos testados: Eritromicina (19,5%), tetraciclina (35,6%), gentamicina (9,3%), clindamicina (20,3%), penicilina (3,4%) e amicacina (38,1%). Todos os isolados foram susceptíveis ceftiofur e cefalotina. Os testes de resistência aos antimicrobianos auxiliam na tomadade decisões relacionadas aos tratamentos, permitindo a escolha mais criteriosa dos antimicrobianos e oacompanhamento espaço-temporal da dinâmica de resistência para este patógeno tão relevante na saúdehumana e animal.

In vitro antimicrobial susceptibility and genetic resistance determinants of Streptococcus agalactiae isolated from mastitic cows in Brazilian dairy herds / Suscetibilidade in vitro a antimicrobianos e determinantes genéticos de resistência em Streptococcus agalactiae isolados de mastite em rebanhos bovinos brasileiros

Streptococcus agalactiae is one of the main causative agents of bovine mastitis and is associated with several economic losses for producers. Few studies have evaluated antimicrobial susceptibility and the prevalence of genetic resistance determinants among isolates of this bacterium from Brazilian dairy cattle. This work aimed to evaluate the frequency of the antimicrobial resistance genes ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, and aad-6, and in vitro susceptibility to the antimicrobials amikacin, erythromycin, clindamycin, tetracycline, gentamicin, penicillin, ceftiofur, and cefalotin, and the associations between resistance genotypes and phenotypes among 118 S. agalactiae isolates obtained from mastitic cows in Brazilian dairy herds. Of the resistance genes examined, ermB was found in 19 isolates (16.1%), tetO in 23 (19.5%), and tetM in 24 (20.3%). The genes ermA, mefA, aphA3, and aad-6 were not identified. There was an association between the presence of genes ermB, tetM, and tetO and phenotypic resistance to erythromycin, clindamycin, and tetracycline. Rates of resistance to the tested antibiotics varied, as follows: erythromycin (19.5%), tetracycline (35.6%), gentamicin (9.3%), clindamycin (20.3%), penicillin (3.4%), and amikacin (38.1%); conversely, all isolates were susceptible to ceftiofur and cefalotin. Antimicrobial resistance testing facilitates the treatment decision process, allowing the most judicious choice of antibiotics. Moreover, it enables regional and temporal monitoring of the resistance dynamics of this pathogen of high importance to human and animal health.(AU)

Streptococcus agalactiae é um dos principais agentes causadores de mastite em bovinos e de consequentes perdas econômicas aos produtores. Poucos estudos que avaliaram a susceptibilidade a antimicrobianos e a presença de determinantes genéticos de resistência para este agente em bovinos leiteiros do Brasil. Este trabalho teve por objetivo avaliar a frequência dos genes de resistência a antimicrobianos ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, aad-6, bem como a susceptibilidade in vitro aos antimicrobianos amicacina, eritromicina, clindamicina, tetraciclina, gentamicina, penicilina, ceftiofur e cefalotina, e as associações entre genótipos e fenótipos de resistência em 118 isolados de S. agalactiae provenientes de casos de mastite em rebanhos bovinos brasileiros. Dentre os genes de resistência pesquisados, ermB foi encontrado em 19 isolados (16,1%), tetO em 23 (19,5%) e tetM em 24 (20,3%). Os genes ermA, mefA, apha3 e aad6 não foram detectados. Verificou-se associação entre a presença dos genes ermB, tetM e tetO e os fenótipos de resistência à eritromicina, clindamicina e tetraciclina. Foram encontrados diferentes índices de resistência aos antibióticos testados: Eritromicina (19,5%), tetraciclina (35,6%), gentamicina (9,3%), clindamicina (20,3%), penicilina (3,4%) e amicacina (38,1%). Todos os isolados foram susceptíveis ceftiofur e cefalotina. Os testes de resistência aos antimicrobianos auxiliam na tomadade decisões relacionadas aos tratamentos, permitindo a escolha mais criteriosa dos antimicrobianos e oacompanhamento espaço-temporal da dinâmica de resistência para este patógeno tão relevante na saúdehumana e animal.(AU)

Genotyping and antimicrobial resistance in Escherichia coli from pig carcasses / Genotipagem e resistência antimicrobiana de Escherichia coli em carcaças suínas

The increasing antimicrobial resistance observed worldwide in bacteria isolated from human and animals is a matter of extreme concern and has led to the monitoring of antimicrobial resistance in pathogenic and commensal bacteria. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial resistance profile of Escherichia coli isolated from pig carcasses and to assess the occurrence of relevant resistance genes. A total of 319 E. coli isolates were tested for antimicrobial susceptibility against different antimicrobial agents. Moreover, the presence of extended-spectrum β-lactamase (ESBL) and inducible ampC-β-lactamase producers was investigated. Eighteen multi-resistant strains were chosen for resistance gene detection and PFGE characterization. The study showed that resistance to antimicrobials is widespread in E. coli isolated from pig carcasses, since 86.2% of the strains were resistant to at least one antimicrobial and 71.5% displayed multi-resistance profiles. No ampC-producing isolates were detected and only one ESBL-producing E. coli was identified. Genes strA (n=15), floR (n=14), aac(3)IVa (n=13), tetB (n=13), sul2 (n=12), tetA (n=11), aph(3)Ia (n=8) and sul3 (n=5) were detected by PCR. PFGE analysis of these multi-resistant E. coli strains showed less than 80% similarity among them. We conclude that antimicrobial multi-resistant E. coli strains are common on pig carcasses and present highly diverse genotypes and resistance phenotypes and genotypes.(AU)

O incremento de resistência frente aos antimicrobianos, observado em bactérias isoladas de humanos e animais, tem sido motivo de preocupação mundial e levado ao monitoramento dos perfis de resistência em bactérias patogênicas e comensais. O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de resistência em Escherichia coli isolada de carcaças suínas e descrever a ocorrência de alguns genes de resistência relevantes. Um total de 319 isolados de E. coli foi testado quanto à suscetibilidade frente a diversos antimicrobianos. A presença de isolados produtores de β-lactamases (ESBL) de espectro estendido e β-lactamase induzível do tipo ampC foi também investigada. Dezoito cepas multirresistentes foram escolhidas para investigação de genes de resistência e caracterização por macro-restrição (PFGE). Os resultados demonstraram que a resistência a antimicrobianos está disseminada, pois 86,2% dos isolados de E. coli foram resistentes ao menos a um antimicrobiano e 71,5% apresentaram perfil de multirresistência. Uma cepa de E. coli produtora de ESBL e nenhuma produtora de ampC induzível foram identificadas. Os genes strA (n=15); floR (n=14);aac(3)-IVa (n=13); tetB (n=13); sul2 (n=12); tetA (n=11); aph(3')Ia (n=8); sul3 (n=5) foram detectados por PCR. A análise de PFGE demonstrou que cepas de E. coli multirresistentes apresentaram similaridade inferior a 80% entre si. Concluiu-se que cepas multirresistentes de E. coli são frequentes em carcaças de suínos e apresentam uma alta diversidade genotípica, bem como de fenótipos e genes de resistência.(AU)

Genotyping and antimicrobial resistance in Escherichia coli from pig carcasses / Genotipagem e resistência antimicrobiana de Escherichia coli em carcaças suínas

The increasing antimicrobial resistance observed worldwide in bacteria isolated from human and animals is a matter of extreme concern and has led to the monitoring of antimicrobial resistance in pathogenic and commensal bacteria. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial resistance profile of Escherichia coli isolated from pig carcasses and to assess the occurrence of relevant resistance genes. A total of 319 E. coli isolates were tested for antimicrobial susceptibility against different antimicrobial agents. Moreover, the presence of extended-spectrum β-lactamase (ESBL) and inducible ampC-β-lactamase producers was investigated. Eighteen multi-resistant strains were chosen for resistance gene detection and PFGE characterization. The study showed that resistance to antimicrobials is widespread in E. coli isolated from pig carcasses, since 86.2% of the strains were resistant to at least one antimicrobial and 71.5% displayed multi-resistance profiles. No ampC-producing isolates were detected and only one ESBL-producing E. coli was identified. Genes strA (n=15), floR (n=14), aac(3)IVa (n=13), tetB (n=13), sul2 (n=12), tetA (n=11), aph(3)Ia (n=8) and sul3 (n=5) were detected by PCR. PFGE analysis of these multi-resistant E. coli strains showed less than 80% similarity among them. We conclude that antimicrobial multi-resistant E. coli strains are common on pig carcasses and present highly diverse genotypes and resistance phenotypes and genotypes.(AU)

O incremento de resistência frente aos antimicrobianos, observado em bactérias isoladas de humanos e animais, tem sido motivo de preocupação mundial e levado ao monitoramento dos perfis de resistência em bactérias patogênicas e comensais. O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de resistência em Escherichia coli isolada de carcaças suínas e descrever a ocorrência de alguns genes de resistência relevantes. Um total de 319 isolados de E. coli foi testado quanto à suscetibilidade frente a diversos antimicrobianos. A presença de isolados produtores de β-lactamases (ESBL) de espectro estendido e β-lactamase induzível do tipo ampC foi também investigada. Dezoito cepas multirresistentes foram escolhidas para investigação de genes de resistência e caracterização por macro-restrição (PFGE). Os resultados demonstraram que a resistência a antimicrobianos está disseminada, pois 86,2% dos isolados de E. coli foram resistentes ao menos a um antimicrobiano e 71,5% apresentaram perfil de multirresistência. Uma cepa de E. coli produtora de ESBL e nenhuma produtora de ampC induzível foram identificadas. Os genes strA (n=15); floR (n=14);aac(3)-IVa (n=13); tetB (n=13); sul2 (n=12); tetA (n=11); aph(3')Ia (n=8); sul3 (n=5) foram detectados por PCR. A análise de PFGE demonstrou que cepas de E. coli multirresistentes apresentaram similaridade inferior a 80% entre si. Concluiu-se que cepas multirresistentes de E. coli são frequentes em carcaças de suínos e apresentam uma alta diversidade genotípica, bem como de fenótipos e genes de resistência.(AU)

GENÔMICA COMPARATIVA DE STAPHYLOCOCCUS SPP. ASSOCIADOS À MASTITE SUBCLÍNICA CAPRINA NA PARAÍBA

Infecções intramamárias acometem frequentemente os animais leiteiros, gerando danos tanto na saúde dos animais e perdas significativas na quantidade e qualidade do leite produzido, como riscos para a saúde dos consumidores tendo em vista que as glândulas mamárias infectadas podem abrigar micro-organismos potencialmente zoonóticos. Os Staphylococcus frequentemente são detectados em exame microbiológico no leite de animais acometidos por infecção mamária. Sendo assim, faz-se necessário estudos mais aprofundados relacionados à resistência antimicrobiana e os fatores de virulência, além de elementos genéticos móveis, afim de minimizar as perdas para a cadeia produtiva e para a saúde pública. O sequenciamento do genoma completo é uma ferramenta desenvolvida para auxiliar com maior facilidade, rapidez e menores custos toda a epidemiologia genômica dos micro-organismos, e, através da anotação funcional, realizar comparações entre micro-organismos e identificar diferenças e similaridades entre elas. O capítulo I, é um referencial teórico, que demonstra aspectos da qualidade do leite de cabras, tanto nos aspectos físico-químicos como microbiológicos, com base na legislação nacional vigente e suas implicações na produção e saúde dos animais e seres humanos. Os capítulos II, III e IV avaliam através do sequenciamento dos genomas, genes de resistência, detecção de plasmídeos, e fatores de virulência de três espécies de Staphylococcus (S.) (S. caprae, S. epidermidis e S. aureus) originários de leite de cabras. As amostras foram submetidas ao teste fenotípico de difusão em discos. Após extração do DNA genômico total e posterior avaliação quali-quantitativa do DNA, foram sequenciadas em tecnologia Illumina Miseq. A montagem de todos os genomas foi executada em Unicycler. A anotação das amostras de S. caprae foi avaliada por meio de análise do pan-genoma. Foi verificada a presença de genes de resistência a tetraciclina, -lactâmicos, fosfomicina, macrolídeos, fenicóis e quinolonas. Já para os fatores de virulência, foram observados aderência, exoenzimas, evasão imune, absorção e metabolism do ferro e toxinas. Os capítulos III e IV, analisam respectivamente as amostras de S. epidermidis e S. aureus a despeito do tipo de sequência multilocus (ST), predição de genes de virulência, plasmídeos rep, tipo de cassete cromossomal e fatores de virulência. Uma amostra de cada uma dessas espécies, detectou o gene mec e tipo de SCCmecIV. S epidermidis exibiu três tipos de sequência multilocus diferentes, resistência genotípica as classes dos macrolídeos, -lactâmicos, tetraciclinas, aminoglicosídeos e fosfomicina e seis diferentes plasmídeos, além de fatores de virulência a aderência, enzimas, evasão imune, toxinas e sistema de secreção. Nas cepas de S. aureus, adicionalmente, foram realizadas análises da proteína A e filogenia. As amostras pertenciam a quatro STs e cinco proteínas A (spa) diferentes. Houve maior prevalência de resistência para os genes de tetraciclina e beta-lactâmicos, entretanto, uma cepa ainda apresentou genes de resistência a trimetropim, macrolídeos, aminogligosídeo e fenicol. Os genes de virulência foram classificados em exoenzimas, toxigênicos e resposta imune. Em resumo, a ocorrência de genes de resistência e plasmídeos portadores de genes de resistência, inclusive, para antimicrobianos de último recurso em infecções humanas mais graves, além de grande frequência de genes de virulência em isolados de Staphylococcus spp. de originários de leite de cabras reforça a preocupação frente à qualidade do leite produzido como alimento seguro.

Intramammary infections often affect dairy animals, causing damage to the health of animals and significant losses in the quantity and quality of milk produced, as well as risks to the health of consumers, given that infected mammary glands can harbor potentially zoonotic microorganisms. Staphylococcus are frequently detected in microbiological examination in the milk of animals affected by mammary infection. Therefore, further studies related to antimicrobial resistance and virulence factors, in addition to mobile genetic elements, are necessary in order to minimize losses to the production chain and public health. The whole genome sequencing is a tool developed to assist with greater ease, speed and lower costs the entire genomic epidemiology of microorganisms, and, through functional annotation, perform comparisons between microorganisms and identify differences and similarities between them. Chapter I is a theoretical framework that demonstrates aspects of goat milk quality, both in physical-chemical and microbiological aspects, based on current national legislation and its implications for the production and health of animals and human beings. Chapters II, III and IV evaluate through genome sequencing, resistance genes, plasmid detection, and virulence factors of three species of Staphylococcus (S.) (S. caprae, S. epidermidis and S. aureus) originating from goats milk. The samples were submitted to the disc diffusion phenotypic test. After extraction of the total genomic DNA and subsequent quali-quantitative evaluation of the DNA, they were sequenced using Illumina Miseq technology. Assembly of all genomes was performed in Unicycler. The annotation of S. caprae samples was evaluated by pan-genome analysis. The presence of resistance genes to tetracycline, -lactams, fosfomycin, macrolides, phenicols and quinolones was verified. As for virulence factors, adherence, exoenzymes, immune evasion, absorption and metabolism of iron and toxins were observed. Chapters III and IV, respectively, analyze S. epidermidis and S. aureus samples regardless of the multilocus sequence type (ST), virulence gene prediction, rep plasmids, chromosomal cassette type and virulence factors. A sample of each of these species detected the mec gene and type of SCCmecIV. S. epidermidis exhibited three different multilocus sequence types, genotypic resistance to macrolides, -lactams, tetracyclines, minoglycosides and fosfomycin and six different plasmids, in addition to adherence virulence factors, enzymes, immune evasion, toxins and secretion system. In the S. aureus strains, additionally, analyzes of protein A and phylogeny were performed. The samples belonged to four different ST's and five different A (spa) proteins. There was a higher prevalence of resistance for the tetracycline and beta-lactam genes, however, one strain still showed resistance genes to trimethoprim, macrolides, aminoglycoside and phenicol. Virulence genes were classified into exoenzymes, toxigenics and immune response. In summary, the occurrence of resistance genes and plasmids carrying resistance genes, including for antimicrobials of last resort in more severe human infections, in addition to the high frequency of virulence genes in Staphylococcus spp. from goats' milk reinforces the concern about the quality of the milk produced as a safe food.

AVALIAÇÃO DA QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DA CARNE DE GALINHA CAIPIRA COMERCIALIZADA EM RESTAURANTES DO MUNICÍPIO DE PETROLINA-PE

O consumo de comida em restaurantes é um hábito comum em todo o mundo, restaurantes e manipuladores de alimentos têm sido descritos como alguns dos principais responsáveis por surtos alimentares através de bactérias patogênicas. Salmonella spp. e Escherichia coli estão entre os patógenos mais comumente encontrados em infecções de origem alimentar em seres humanos. Carnes de aves são um dos principais veículos de transmissão desses microrganismos, representando um desafio para saúde pública. Deste modo, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade bacteriológica da carne de galinha caipira que chega aos restaurantes, além de avaliar o conhecimento e práticas dos manipuladores de alimentos de restaurantes inspecionados e não inspecionados. Amostras de galinha caipira in natura (n = 40) foram analisadas para presença de Salmonella spp. e Escherichia coli, determinação do perfil de resistência aos antimicrobianos e a análise do perfil genético dos isolados. Os manipuladores de alimentos foram analisados usando questionários com foco nas práticas de manipulação de alimentos. Resultados demonstraram que 5% das carnes de galinha caipira oriundas de restaurantes inspecionados estavam com os limites de preseça de Escherichia coli acima dos aceitáveis e 75% nos não inspecionados. Para a prensença de Salmonella spp., 77,5% das carnes apresentavam preseça de Salmonella spp., sendo que ausência deste microrganismo é uma exigência de regulamentos nacionais e internacionais. Com relação ao perfil de sensibilidade antimicrobiana, 90,3% das cepas de Salmonella spp. foram considerados multirresistentes, sendo os antimicrobianos ampicilina e ciprofloxacina os que apresentaram os maiores perfis de resistência, ambos com 100%. Nas cepas de Escherichia coli, encontrou-se multirresistência em 78,3% dos isolados, em que os antimicrobianos ciprofloxacina e ampicilina apresentaram os maiores perfis de resistência, 100% e 93%, respectivamente. Em relação à detecção de genes relacionados à resistência aos antibióticos nas cepas resistentes foi detectada a presença do gene blaTEM e do gene blaCTX-M1 nos isolados de E. coli. Nos isolados de Salmonella spp. o gene invA foi encontrado. O nível de conhecimento e as práticas dos manipuladores de alimentos nos restaurantes de Petrolina podem ser considerados satisfatórios de acordo com as normas brasileiras de boas práticas para serviços de alimentação. Conclui-se que a carne fresca de galinha caipira comercializada tanto em restaurantes inspecionados como nos não inspecionados do municipio de Petrolina- PE apresenta contaminação por Salmonella spp., tornando o produto impróprio para consumo. A presença de E. coli estavam dentro dos limites aceitáveis na maioria dos estabelecimento. A maior parte das cepas de Salmonella spp. e E. coli foram multirresistentes a antibióticos, sendo detectado em algumas das cepas resistentes a presença de genes relacionados à resistência aos antibióticos. Falhas na manipulação das carnes por parte dos manipuladores dos restaurantes foram detectadas, sendo recomendada a realização de mais treinamento sobre as boas práticas de fabricação e uma maior fiscalização dos órgãos de inspeção.

Restaurant food consumption is a common habit all over the world, restaurants and food handlers have been described as some of the main culprits of foodborne outbreaks through pathogenic bacteria. Salmonella spp. and Escherichia coli are among the pathogens most commonly found in foodborne infections in humans. Poultry meat is one of the main vehicles of transmission of these microorganisms, representing a challenge for public health. Thus, the present study aimed to evaluate the bacteriological quality of free-range chicken meat that arrives at restaurants, as well as to assess the knowledge and practices of food handlers from inspected and non-inspected restaurants. Fresh free-range chicken samples (n = 40) were analyzed for the presence of Salmonella spp. and Escherichia coli, the determination of the antimicrobial resistance profile, and the analysis of the genetic profile of the isolates. Food handlers were analyzed using questionnaires focusing on food handling practices. Results showed that 5% of the free-range chicken meat from inspected restaurants had Escherichia coli presence limits above acceptable and 75% from non-inspected restaurants. For the presence of Salmonella spp., 77.5% of the meat presented Salmonella spp. above the maximum limit allowed by Brazilian regulations. Regarding the antimicrobial sensitivity profile, 90.3% of the Salmonella spp. strains were considered multidrug-resistant, and the antimicrobials ampicillin and ciprofloxacin presented the highest resistance profiles, both with 100%. In the Escherichia coli strains, multiresistant was found in 78.3% of the isolates, in which the antimicrobials ciprofloxacin and ampicillin presented the highest resistance profiles, 100% and 93%, respectively. Regarding the detection of genes related to antibiotic resistance in the resistant strains, the presence of the blaTEM gene and the blaCTX-M1 gene was detected in the E. coli isolates. In the Salmonella spp. samples the invA gene was found in the isolates. The level of knowledge and practices of the food handlers in the restaurants in Petrolina can be considered satisfactory according to the Brazilian standards of good practices for food services. It is concluded that the fresh free-range chicken meat commercialized in both inspected and non-inspected restaurants in the municipality of Petrolina-PE presents contamination by Salmonella spp. above that allowed by the Brazilian legislation, although the contamination by Escherichia coli above the tolerated levels was lower in the inspected restaurants. Most strains of Salmonella spp. and Escherichia coli were multidrug-resistant to antibiotics, being detected in some of the resistant strains in the presence of genes related to antibiotic resistance. Failures in the handling of meat by the handlers of the restaurants were detected, and it is recommended that more training on good manufacturing practices and greater inspection by the inspection agencies.

CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS E GENOTÍPICAS DA RESISTÊNCIA ANTIMICROBIANA DE Enterococcus spp. ISOLADOS DE FEZES E LEITE DE BOVINOS NO ESTADO DO ACRE

Enterococcus spp., principalmente E. faecalis e E. faecium, são importantes patógenos de 62 infecções associadas à assistência à saúde (IRAS) devido a sua capacidade de resistir à 63 terapia antimicrobiana. São amplamente distribuídos no ambiente e abundantes na 64 microbiota intestinal de humanos e de outros mamíferos. O leite bovino contaminado por 65 enterococos pode ter implicações na qualidade dos produtos lácteos e na saúde humana. 66 Deste modo, os objetivos deste estudo foram investigar os perfis fenotípicos e genotípicos 67 de resistência aos antimicrobianos e analisar a população clonal de Enterococcus spp. 68 isolados de fezes e leite de bovinos armazenado em latões ou tanques de refrigeração em 69 propriedades leiteiras. Foram coletados 126 swabs retais de vacas leiteiras e 16 amostras 70 de leite de 16 rebanhos do estado do Acre. Até três colônias foram selecionadas por 71 espécime para identificação bacteriana por técnica de espectrometria de massa (MALDI- 72 TOF). O teste de difusão em disco foi realizado para determinar os perfis fenotípicos de 73 resistência aos antimicrobianos. Genes de resistência à vancomicina, macrolídeos, 74 tetraciclina e alto nível de aminoglicosídeos foram investigados entre as amostras 75 resistentes. A população clonal de amostras de E. faecalis e E. faecium foi analisada por 76 eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Cento e sessenta e sete amostras (33,4%) 77 foram identificadas como espécies de Enterococcus, incluindo E. casseliflavus (27,0%), 78 E. gallinarum (17,5%), E. faecalis (13,5%), E. faecium (6,3%), E mundtii (1,4%) e E. 79 durans (1,4%). E. casseliflavus e E. faecalis foram as espécies mais frequentemente 80 isoladas de swab retal e leite, respectivamente. A maior frequência de resistência para E. 81 faecalis foi para ciprofloxacina (47,4%) enquanto para E. faecium foi para penicilina 82 (36,8%). Amostras resistentes à vancomicina não foram detectadas e resistentes à 83 ampicilina e a alto nível de aminoglicosídeos foram raramente. Cepas MDR 84 (multirresistentes) foram recuperadas de swab retal e leite de cinco rebanhos, sendo E. 85 faecium (32%), E. faecalis (2,6%) e E. casseliflavus (1,8%). Apenas os genes de 86 resistência à tetraciclina [tet(L) e tet(K)] foram detectados. Foi observada baixa 87 diversidade clonal tanto para E. faecalis quanto para E. faecium dentro de cada rebanho. 88 No entanto, a população bacteriana era diversa quando considerados os diferentes 89 rebanhos. Não foi observada associação entre perfil de resistência e genótipos de PFGE. 90 Os mesmos genótipos de E. faecalis foram detectadas nos swabs retais e no leite dos 91 animais em vários rebanhos, apontando a necessidade de usar boas práticas de higiene em 92 pequenas propriedades. Embora tenha sido observada baixa frequência de resistência a 93 importantes antimicrobianos prescritos para infecções enterocócicas entre as amostras de 94 origem bovina, programas para controlar a qualidade do leite são essenciais para 95 monitorar o surgimento de resistência aos antimicrobianos entre patógenos de origem 96 alimentar no Brasil.

Enterococcus spp., mainly E. faecalis and E. faecium, are important pathogens of 107 healthcare-associated infections (HAI) due their ability to resist antimicrobial therapy. 108 They are broadly distributed in environment and abundant in the intestinal microbiota of 109 humans and animals, including cows. Bovine milk contaminated by enterococci may have 110 implications for both dairy product quality and human health. Then, the objectives of this 111 study were survey the phenotypic and genotypic antimicrobial resistance profiles and 112 clonal populations of Enterococcus spp. recovered from bovine feces and milk stored in 113 cans or refrigeration tanks in dairy farms. A total of 126 rectal swabs and 16 milk samples 114 were collected from16 dairy herds in the Acre state. Until three colonies were selected 115 per sample to bacterial identification by MALDI-TOF. Disk diffusion test was performed 116 to determinate the phenotypic antimicrobial resistance profiles. Vancomycin, macrolide, 117 tetracycline, and high-level aminoglycoside resistance genes were investigated among 118 resistant isolates. The clonal population of E. faecalis and E. faecium isolates was 119 analyzed by PFGE. One hundred sixty-seven (33.4%) isolates were identified as 120 Enterococcus species, including E. casseliflavus (27.0%), E. gallinarum (17.5%), E. 121 faecalis (13.5%), E. faecium (6.3%), E. mundtii (1.4%), and E. durans (1.4%). E. 122 casseliflavus and E. faecalis were the species most frequently isolated from rectal swabs 123 and milk samples, respectively. E. faecalis and E. faecium isolates showed the highest 124 resistance frequency to ciprofloxacin (47.4%) and penicillin (36.8%), respectively. 125 Vancomycin-resistant isolates were not detected and ampicillin-, and high-level 126 aminoglycoside-resistant isolates were rarely detected. MDR (multidrug resistant) 127 isolates were recovered from rectal swabs and milk from five dairy farms: E. faecium 128 (32.0%), E. faecalis (2.6%), and E. casseliflavus (1.8%). Only tetracycline resistance 129 genes [tet(L) and tet(K)] were detected among the isolates investigated. Low clonal 130 diversity was observed among the E. faecalis and E. faecium isolates obtained within the 131 investigated herds. However, the bacterial population was diverse between different 132 herds. It was not observed an association between antimicrobial resistance profiles and 133 PFGE genotypes. The same E. faecalis genotypes were detected in rectal swabs and milk 134 in several herds, pointing out the need to use good hygiene practices in small farms. 135 Although low frequency of resistance to important antimicrobial prescribed to 136 enterococcal infections has been observed among isolates from bovine origin, programs 137 to control milk quality are essential to monitor the emergence of antimicrobial resistance 138 among foodborne pathogens in Brazil. 139

Resistance to B-lactam and tetracycline in Campylobacter spp isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil / Resistência a B-lactâmicos e tetraciclina em Campylobacter spp isolados de matadouros-frigoríficos de aves no sul do Brasil

The study was carried out to screen and analyze the genetic characteristics of antimicrobial resistance in Campylobacter spp. from poultry sources. A total of 141 strains of Campylobacter isolated from samples of broilers of slaughterhouses in southern Brazil was identified by phenotypic and genotypic methods. Campylobacter isolates were evaluated for its antimicrobial susceptibility and the presence of resistance genes. The strains were investigated for antimicrobial susceptibility against two agents (ampicillin and tetracycline) by disk diffusion method. PCR assay was used to confirm the specie and the presence of ampicillin (blaOXA-61), tetracycline tet(O), and the energy-dependent multi-drug efflux pump (cmeB) genes. Campylobacter jejuni was the most ubiquitous; its presence was determined in 140 samples out of 141 (99.3%), whereas Campylobacter coli was found only in one of the contaminated samples (0.70%). The results obtained showed 65% and 35.5% of Campylobacter isolates resistant to β-lactams and tetracyclines, respectively. The cmeB gene responsible for multidrug resistance was detected in 26 isolates out 141 strains (18.5%). Moreover, 36 out of 141 Campylobacter strains (25.6%) were found to be resistant to at least two different antimicrobia resistance markers (β-lactams and tetracyclines).(AU)

O presente estudo foi realizado para examinar e analisar as características genéticas de resistência antimicrobiana de Campylobacter spp. a partir de fontes avícolas. Um total de 141 amostras de Campylobacter isolados em matadouros-frigoríficos de aves do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foi identificado por métodos fenotípicos e genotípicos. Foi analisada a susceptibilidade antimicrobiana e a presença de genes de resistência. As cepas foram testadas para detectar sensibilidade frente a dois antimicrobianos (ampicilina e tetraciclina) pelo método de difusão em disco. A seguir, usando a reação em cadeia da polimerase foi confirmada a espécie e a presença dos genes de resistência à ampicilina (blaOXA-61) e tetraciclina tet(O), assim como a detecção da bomba de efluxo (cmeB). Campylobacter jejuni foi a espécie mais isolada, sua presença foi determinada em 140 amostras (99,3%), e Campylobacter coli foi encontrada em uma única amostra (0,70%). Os resultados obtidos mostraram 65% e 35,5% de Campylobacter isolados resistentes a β-lactâmicos e tetraciclinas, respectivamente. O gene cmeB responsável pela resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectado em 26 amostras (18,5%). Neste contexto, 36 das 141 amostras (25,6%) foram consideradas resistentes a dois grupos diferentes de antimicrobianos (β-lactâmicos e tetraciclinas).(AU)

RESISTÊNCIA ANTIMICROBIANA DE Listeria monocytogenes EM PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL

Estudos relacionam Listeria monocytogenes a contaminação de produtos de origem animal especialmente associados a alimentos prontos para consumo. Essa bactéria continua sendo uma preocupação ao causar surtos de listeriose com cepas com resistência antimicrobiana. Nesse contexto, esse estudo realizou uma revisão sistemática de literatura e metanálise para identificar e comparar a resistência antimicrobiana de L. monocytogenes a agentes antimicrobianos convencionais (penicilinas, aminoglicosídeos e inibidores da via de folato) e não convencionais (todos os demais) utilizados no tratamento de listeriose. Um segundo foi realizar a padronização de uma PCR em tempo real (q-PCR), para detecção dos genes mecC e erma, responsáveis por conferir resistência a ampicilina e eritromicina, e posterior investigação desses genes em 25 cepas de L. monocytogenes de carne de frango produzida em Mato Grosso. Os resultados evidenciam, que a metanálise indicou não haver, no mundo, evidências significativas na ocorrência de L. monocytogenes resistente a antibióticos convencionais e não convencionais (p= 0,29). A heterogeneidade entre os estudos foi alta (96%), indicando discrepâncias entre os estudos. Assim, nas análises de subgrupos, verificamos que o local do estudo se mostrou significativo para América do Norte (p<0,00001), não havendo heterogeneidade entre os estudos. O efeito da cadeia animal na América do Sul também foi significativo para carne bovina (p<0,00001), não apresentando heterogeneidade, e evidenciando para esse continente um risco de resistência antimicrobiana maior para os antibióticos convencionais. Em carne de aves, o efeito geral também foi significativo (p<0,00001), apresentando maior evidencia de risco de resistência para antibióticos não convencionais. As análises de subgrupos demonstraram que a localidade e a cadeia animal foram um bom parâmetro para a metanálise e redução de discrepâncias metodológicas. Quanto a q-PCR, foi possível padronizar a detecção dos genes ermA e mecC em bactérias, contudo foi verificada a ausência desses genes em cepas de L. monocytogenes provenientes de carne de frango produzidas em Mato Grosso, confirmando que essas cepas são sensíveis a ampicilina e eritromicina.

Studies relate Listeria monocytogenes to contamination of animal products in Brazil and several countries, especially associated with ready-to-eat foods. This bacterium remains a concern in causing outbreaks of listeriosis with strains with antimicrobial resistance. In this context, this study carried out a systematic review of the literature and meta-analysis to identify and compare the anti-microbial resistance of L. monocytogenes to conventional antimicrobial agents (penicillins, aminoglycosides and inhibitors of the folate pathway) and unconventional (all others) used in the treatment of listeriosis. A second step was to standardize a real-time PCR (q-PCR) to detect mecC and erma genes, responsible for providing resistance to ampicillin and erythromycin investigation of these genes in 25 strains of L. monocytogenes from chicken produced in Mato Grosso. The results show that the meta-analysis indicated no significant evidence in the world of L. monocytogenes resistance to conventional and unconventional antibiotics (p = 0.29). The heterogeneity between the studies was high (96%), indicating discrepancies between the studies. Thus, in the subgroup analysis, we found that the study site was significant for North America (p <0.00001), with no heterogeneity between the studies. The effect of the animal chain in South America was also significant for beef (p <0.00001), showing no heterogeneity and evidencing for this continent a risk of more excellent antimicrobial resistance for conventional antibiotics. In poultry meat, the general effect was also significant (p <0.00001), showing greater evidence of resistance risk for unconventional antibiotics. The subgroup analyzes showed that the locality and the animal chain were useful parameters for the meta-analysis and reduced methodological discrepancies. As for q-PCR, it was possible to standardize the detection of ermA and mecC genes in bacteria; however, the absence of these genes was verified in strains of L. monocytogenes from chicken meat produced in Mato Grosso, confirming that these strains are sensitive to ampicillin and erythromycin.

Resistance to -lactam and tetracycline in Campylobacter spp.isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil

Abstract The study was carried out to screen and analyze the genetic characteristics of antimicrobial resistance in Campylobacter spp. from poultry sources. A total of 141 strains of Campylobacter isolated from samples of broilers of slaughterhouses in southern Brazil was identified by phenotypic and genotypic methods. Campylobacter isolates were evaluated for its antimicrobial susceptibility and the presence of resistance genes. The strains were investigated for antimicrobial susceptibility against two agents (ampicillin and tetracycline) by disk diffusion method. PCR assay was used to confirm the specie and the presence of ampicillin (blaOXA-61), tetracycline tet(O), and the energy-dependent multi-drug efflux pump (cmeB) genes. Campylobacter jejuni was the most ubiquitous; its presence was determined in 140 samples out of 141 (99.3%), whereas Campylobacter coli was found only in one of the contaminated samples (0.70%). The results obtained showed 65% and 35.5% of Campylobacter isolates resistant to -lactams and tetracyclines, respectively. The cmeB gene responsible for multidrug resistance was detected in 26 isolates out 141 strains (18.5%). Moreover, 36 out of 141 Campylobacter strains (25.6%) were found to be resistant to at least two different antimicrobia resistance markers (-lactams and tetracyclines).

Resumo O presente estudo foi realizado para examinar e analisar as características genéticas de resistência antimicrobiana de Campylobacter spp. a partir de fontes avícolas. Um total de 141 amostras de Campylobacter isolados em matadouros-frigoríficos de aves do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foi identificado por métodos fenotípicos e genotípicos. Foi analisada a susceptibilidade antimicrobiana e a presença de genes de resistência. As cepas foram testadas para detectar sensibilidade frente a dois antimicrobianos (ampicilina e tetraciclina) pelo método de difusão em disco. A seguir, usando a reação em cadeia da polimerase foi confirmada a espécie e a presença dos genes de resistência à ampicilina (blaOXA-61) e tetraciclina tet(O), assim como a detecção da bomba de efluxo (cmeB). Campylobacter jejuni foi a espécie mais isolada, sua presença foi determinada em 140 amostras (99,3%), e Campylobacter coli foi encontrada em uma única amostra (0,70%). Os resultados obtidos mostraram 65% e 35,5% de Campylobacter isolados resistentes a -lactâmicos e tetraciclinas, respectivamente. O gene cmeB responsável pela resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectado em 26 amostras (18,5%). Neste contexto, 36 das 141 amostras (25,6%) foram consideradas resistentes a dois grupos diferentes de antimicrobianos (-lactâmicos e tetraciclinas).

Antibiotic resistance in lactic acid bacteria isolated from some pharmaceutical and dairy products

A total of 244 lactic acid bacteria (LAB) strains were isolated from 180 dairy and pharmaceutical products that were collected from different areas in Minia governorate, Egypt. LAB were identified phenotypically on basis of morphological, physiological and biochemical characteristics. Lactobacillus isolates were further confirmed using PCR-based assay. By combination of phenotypic with molecular identification Lactobacillus spp. were found to be the dominant genus (138, 76.7%) followed by Streptococcus spp. (65, 36.1%) and Lactococcus spp. (27, 15%). Some contaminant organisms such as (Staphylococcus spp., Escherichia coli, Salmonella spp., mould and yeast) were isolated from the collected dairy samples but pharmaceutical products were free of such contaminants. Susceptibility of LAB isolates to antibiotics representing all major classes was tested by agar dilution method. Generally, LAB were highly susceptible to Beta-lactams except penicillin. Lactobacilli were resistant to vancomycin, however lactococci and streptococci proved to be very susceptible. Most strains were susceptible to tetracycline and showed a wide range of streptomycin MICs. The MICs of erythromycin and clindamycin for most of the LAB were within the normal range of susceptibility. Sixteen Lactobacillus,8 Lactococcus and 8 Streptococcus isolates including all tetracycline and/or erythromycin resistant strains were tested for the presence of tetracycline and/or erythromycin resistant genes [tet(M) and/or erm(B)]. PCR assays shows that some resistant strains harbor tet(M) and/or erm(B) resistance genes.(AU)

Caracterização epidemiológica e molecular de Slaphylococcus coagulase negativa resistentes aos beta lactâmicos isolados de leite de vacas com mastite subclínica

O grupo de Staphylococcus coagulase negativo tornou-se um dos principais agentes patogênicos causadores de mastite subclínica em bovinos leiteiros. Objetivou-se identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativo isolados de leite contaminado por mastite subclínica pela técnica MALDI-TOF MS, avaliar a resistência a antimicrobianos beta lactâmicos e rastrear a presença dos genes blaOXA-23 e blaKPC pela reação de polimerase em cadeia (PCR). Cento e onze isolados identificados como cocos Gram positivos provenientes da bacterioteca da UFMG foram analisadas neste estudo. Os isolados foram submetidos a análise para identificação através MALDI-TOF MS. As cepas identificadas foram avaliadas quanto a suscepitibilidade aos antibióticos cefoxitina (30g), oxacilina (1g), vancomicina (30g), meropenem (10g), imepenem (10g) e subactam-ampicilina (10g) pela técnica de difusão de disco e calculou-se o índice de multirresistência das espécies. Cepas resistentes fenotipicamente ao antimicrobiano meropenem, foram analisados genotipicamente quanto a presença dos genes de resistência blaOXA-23 e blaKPC. Através de teste Qui quadrado avaliou- se a frequência de espécies do grupo Staphylococcus coagulase negativo, de resistência aos beta-lactâmicos, bem como o índice de multirresistência. Através da técnica MALDI-TOF MS o gênero mais encontrado com 56,8% e o grupo Staphylococcus coagulase negativo apresentou frequência de 27%. As espécies Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus chromogenes obtiveram maior prevalência nos rebanhos com 35,8% respectivamente. Em Janaúba a propriedade Nova Prima, o valor médio do índice de multirresistência encontrado foi de 0,6, as demais propriedades e munícipios foram de 0,5. Nos rebanhos de bovinos leiteiros a resistência antimicrobiana foi para as bases cefoxitina (100%), oxacilina (100%), meropenem (100%) e vancominicina (100%). Os genes de resistência blaOXA-23 e blaKPC não foram rastreados nas espécies Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus auriculares e Staphylococcus haemolyticus. Outros mecanismos de resistência estão presentes nas cepas causando ineficiência no tratamento

The coagulase-negative Staphylococcus group has become one of the main pathogens causing subclinical mastitis in dairy cattle. The objective of this study was to identify species of coagulase negative Staphylococcus isolated from milk contaminated by subclinical mastitis using the MALDI-TOF MS technique, to evaluate the resistance to beta lactam antimicrobials and to trace the presence of blaOXA-23 and blaKPC genes by polymerase chain reaction (PCR). One hundred and eleven isolates identified as Gram-positive cocci from the UFMG library were analyzed in this study. The isolates were submitted to analysis for identification through MALDI-TOF MS. The strains identified were evaluated for susceptibility to antibiotics cefoxitin (30 g), oxacillin (1 g), vancomycin (30 g), meropenem (10 g), imepenem (10 g) and subactam-ampicillin (10 g) the species multiresistance index was used. Strains phenotypically resistant to the antimicrobial meropenem were analyzed genotypically for the presence of the resistance genes blaOXA-23 and blaKPC. The frequency of species of the coagulase-negative Staphylococcus coagulase group, resistance to beta-lactams, as well as the multidrug resistance index were evaluated by Chi-square test. Using the MALDI-TOF MS technique, the most common genotype was 56.8% and the coagulase-negative Staphylococcus group had a frequency of 27%. The species Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus chromogenes had a higher prevalence in the herds with 35.8%, respectively. In Janaúba Nova Prima property, the mean value of the multiresistance index found was 0.6, the other properties and municipalities were 0.5. Cefoxitin (100%), oxacillin (100%), meropenem (100%) and vancomycin (100%) were the antimicrobial resistance in the herds of dairy cattle. The blaOXA-23 and blaKPC resistance genes were not screened in the species Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus auriculares and Staphylococcus haemolyticus. Other mechanisms of resistance are present in the strains causing inefficiency in the antimicrobial treatment in the herds, compromising the well-being of the animals and public health.

Caracterização fenotípica, produção de biofilme e resistência aos antimicrobianos em isolados de Staphylococcus spp. obtidos de casos de mastite em bovinos e bubalinos / Phemotypic characterization, biofilm production and antimicrobial resistance of Staphylococcus spp. isolates from cattle and buffaloes mastitis

No presente estudo, objetivou-se avaliar a sussuscetibilidade aos principais antimicrobianos e realizar uma caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Staphylococcus spp. obtidos de casos de mastite em vacas (n=30) e búfalas (n=30). A suscetibilidade foi avaliada pela técnica de disco-difusão e a presença de bomba de efluxo foi avaliada utilizando-se Ágar Mueller Hinton (MH) adicionado de brometo de etídeo e pesquisa do gene msrA. Pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) ainda foram identificados os genes mecA, blaZ e ermA, B e C, que posteriormente foram associados com os métodos fenotípicos para a identificação de resistência a antimicrobianos. A caracterização da formação de biofilme foi realizada utilizandose os métodos Ágar Vermelho Congo (CRA), Aderência em Placa e a identificação do gene icaD. Pelo método de discodifusão, os Staphylococcus spp. apresentaram alta sensibilidade aos antimicrobianos. O índice de resistência múltipla aos antimicrobianos (IRMA) apresentou variação de 0 a 0,5. Na pesquisa de bomba de efluxo, 26,7% das amostras foram positivas ao método fenotípico e 6,7% ao método genotípico (gene msrA). Os genes erm, mecA e blaZ foram detectados, respectivamente, em 1,7%, 6,7% e 11,7% das amostras de Staphylococcus spp. Na produção de biofilme, 23,3% dos isolados foram considerados positivos no CRA, 50,0% na Aderência em Placas e 8,3% na PCR pela detecção do gene icaD. Observou-se que os isolados obtidos de amostras bovinas apresentaram uma menor sensibilidade aos antimicrobianos no teste de disco-difusão quando comparados com as amostras bubalinas. A caracterização destes isolados é importante para orientar uma antibioticoterapia bem planejada. A presença de biofilme nos isolados pode estar associada a outros fatores que não a resistência às drogas antimicrobianas.(AU)

The aim of the present study was to evaluate the antimicrobial susceptibility pattern and to perform the phenotypic and genotypic characterization of the Staphylococcus spp. isolates from mastitis cases in cattle (n=30) and buffaloes (n=30). The susceptibility to antimicrobial drugs was performed by disk diffusion test and the presence of efflux pump was evaluated in Mueller Hinton (MH) Agar supplemented with ethidium bromide as well as by detection of msrA gene. Similarly, the PCR technique was done to detect mecA, blaZ and ermA, B e C genes, that were related after with the presence of antimicrobial resistance in disk diffusion test. The formation of biofilm was characterized using Congo Red Agar (CRA), microplate adherence and detection of icaD gene. Staphylococcus spp. isolates shown high antimicrobial susceptibility in disk diffusion test. The multidrug resistance (MDR) rate ranged from 0 and 0,5. In the efflux pump test, 26.7% of Staphylococcus spp. strains were positive in phenotypic method and 6.7% in PCR for msrA gene. The erm, mecA and blaZ genes were detected in 1.7%, 6.7% and 11.7% of Staphylococcus spp. strains respectively. In biofilm production tests, 23.3% of the samples were positive in CRA, 50% in microplate adherence test and 8.3% in icaD gene PCR. The cattle isolates were less sensitive to antimicrobial drugs when compared to the buffaloes ones. The characterization of these isolates is very important to guide a successful antimicrobial therapy. The biofilm presence in the isolates may be associated with other factors besides antimicrobial resistance.(AU)