Torque teno virus among dialysis and renal-transplant patients

Patients who undergo dialysis treatment or a renal transplant have a high risk of blood-borne viral infections, including the Torque teno virus (TTV). This study identified the presence of TTV and its genome groups in blood samples from 118 patients in dialysis and 50 renal-transplant recipients. The research was conducted in a hospital in the city of Maringá, state of Paraná. The viral DNA, obtained from whole blood, was identified by using two nested Polymerase Chain Reactions (PCR). The frequencies of TTV were 17% and 36% in dialysis patients using the methodology proposed by Nishizawa et al. (1997) and Devalle and Niel (2004), respectively, and 10% and 54% among renal-transplant patients. There was no statistically significant association between the frequency of the pathogen and the variables: gender, time in dialysis, time since transplant, blood transfusions, and the concomitant presence of hepatitis B, for either the dialysis patients or the renal-transplant recipients. Among dialysis patients and renal-transplant recipients, genogroup 5 was predominant (48% and 66% respectively), followed by genogroup 4 (37% and 48%) and genogroup 1 (23% and 25%). Genogroup 2 was present in both groups of patients. Some patients had several genogroups, but 46% of the dialysis patients and 51% of the renal-transplant recipients had only a single genogroup. This study showed a high prevalence of TTV in dialysis patients and renal-transplant recipients.(AU)

AUTOTRANSPLANTE HETEROTÓPICO DE TECIDO OVARIANO EQUINO

O tecido ovariano quando coletado por procedimentos de biópsia permite a realização de diversos estudos com aplicações clínicas no campo da preservação da fertilidade feminina. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da idade da doadora e dos sítios de transplante intramuscular (IM) e subvulvar (SVU) sobre a qualidade, ativação e densidade folicular em fragmentos de tecido ovariano equino autotransplantados após 3 e 7 dias. Fragmentos de tecido ovariano foram obtidos (n = 8) por meio de biópsia e, em seguida, autotransplantados aleatoriamente nos sítios IM e SVU e recuperados após 3 e 7 dias. Os principais achados foram: (i) a viabilidade e ativação folicular foram menores nos fragmentos transplantados no sítio SVU; (ii) a depleção folicular pós-transplante variou entre animais e não foi influenciada pela idade e; (iii) a presença de estruturas ovarianas (folículos antrais e corpo lúteo) no momento da biópsia tem associação com a densidade folicular nos fragmentos obtidos.

Ovarian tissue samples collected by biopsy pick-up method can be used to perform several studies related to fertility preservation. The aim of this study was to evaluate the effects of donor age and intramuscular (IM) and subvulvar (SVU) sites on the follicular viability, activation, and density in ovarian fragments autotransplanted. Biopsy pick-up was performed in mares (n = 7) and ovarian tissue samples were autotransplanted at IM and SVU sites by 3 or 7 days. In summary, our findings indicate that: (i) follicular viability and activation were lower in the ovarian fragments grafted at SVU site; (ii) the follicular depletion post-graft differed among animals and was not influenced by donor age; and (iii) the area of ovarian structures (antral follicles and corpus luteum) presents in the ovary at biopsy procedure had a positive effect on follicular density.

Microbiological profile of donor corneas stored for tectonic transplantation purposes in rabbits / Microbiologia de amostras de bancos de córneas destinadas a transplantes, em coelhos

This study aimed to evaluate the microbiota of donor rabbit corneas stored for tectonic transplantation purposes. Swabs from both corneas of 20 rabbits were carefully collected and submitted to microorganism isolation and identification. After this first swab collection, rabbits were euthanized for reasons other than this project and the eyes were enucleated. The corneas were collected and stored to compose the cornea tissue bank. Corneas were stored in a 0.3% tobramycin solution at -20ºC. After 30 days, the corneas were thawed at room temperature and removed from the antibiotic. New swabs were obtained from the corneas and submitted to microorganism isolation and identification. Gram positive organisms were predominant in the rabbit corneal flora before storage and the Staphylococcus sp. was the most common microorganism isolated from those samples. No growth was observed on the samples collected after storage. The methods used for collection and storage of the corneas were efficient to constitute a sterile donor corneal tissue bank.(AU)

Analisaram-se córneas armazenadas para transplantes tectônicos usando-se suabes coletados de 20 coelhos, visando ao isolamento e à identificação de microrganismos. Após a coleta das amostras, os coelhos foram submetidos à eutanásia, por razões alheias ao estudo, e enucleados. As córneas foram coletadas e armazenadas a fim de se constituir o banco de córneas. O armazenamento deu-se em solução de tobramicina 0,3% a -20ºC, por 30 dias. Após esse período, as córneas foram descongeladas à temperatura ambiente e removidas da solução de antibiótico. Novos suabes foram coletados e submetidos ao isolamento e à identificação dos microrganismos. A flora corneal mostrou-se predominantemente composta por bactérias Gram positivas, sendo o Staphylococcus sp. o mais identificado. Não se verificou crescimento de colônias bacterianas ou fúngicas nas amostras após o armazenamento. Considerando-se a maneira como a pesquisa foi concebida e as injunções do meio em que ela foi realizada, há como admitir, pela ausência de crescimento microbiano nas amostras armazenadas, que a técnica de armazenamento empregada é segura para a estocagem de córneas destinadas a transplantes.(AU)

AUTO E XENOTRANSPLANTE PARA RESTAURAÇÃO DA FUNÇÃO OVARIANA APÓS VITRIFICAÇÃO DE TECIDO OVARIANO CAPRINO

A criopreservação e o transplante de tecido ovariano (TO) têm sido uma alternativa promissora para preservar e restaurar a fertilidade de pacientes, jovens ou adultas, com câncer sob o risco de infertilidade devido aos danos causados pela quimio e/ou radioterapias. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a regeneração da função ovariana após auto e xenotransplante de TO caprino fresco ou vitrificado. O estudo foi realizado em três fases distintas: Fase I: Autotransplante ortotópico de tecido ovariano caprino fresco ou vitrificado; Fase II: Autotransplante heterotópico e cultivo in vitro de tecido ovariano fresco ou vitrificado e Fase III: Xenotransplante de tecido ovariano caprino fresco ou vitrificado. Nas Fases I e II, o TO foi enxertado na curvatura menor do útero e na cavidade peritoneal, por um período de 6 e 3 meses, respectivamente. Já na fase III, o TO foi enxertado na cavidade peritoneal de camundongos BALB/nude. Na Fase I, após recuperação do TO foi observado um aumento significativo da progesterona nas cabras que receberam TO fresco. Embora o percentual de folículos preantrais morfologicamente normais (FPMN) tenha sido similar entre o TO fresco (controle) e o transplante fresco, nesta condição, a densidade folicular foi significativamente inferior ao controle. Na Fase II, após três meses de transplante, três folículos antrais foram observados na superfície do TO de enxertos fresco ou vitrificado. Nessa fase, o percentual de FPMN no TO oriundo do controle, transplante fresco ou vitrificado, foi similar. Os níveis séricos de estradiol não foram alterados durante o período de transplante, por outro lado, após 7 dias de cultivo in vitro do TO vitrificado ou não, os níveis de progesterona e estradiol reduziram significativamente. As proteínas SDF-1 e Cx37 foram detectadas nos oócitos e células da granulosa de folículos presentes no TO fresco, vitrificado ou apenas cultivado, porém, no TO vitrificado e cultivado, a Cx37 foi encontrada apenas nas células da granulosa. A Cx43 foi detectada nas células da granulosa, células da teca e na zona pelúcida de folículos em todos os tratamentos. Na Fase III, o percentual de FPMN no TO vitrificado ou vitrificado e transplantado foi significativamente reduzido, comparado ao TO fresco ou transplantado. Além disso, no TO vitrificado o percentual de folículos em desenvolvimento foi significativamente superior ao observado no TO fresco, bem como no TO transplantado não vitrificado. A apoptose avaliada pela expressão de mRNA para a caspase 3 foi significativamente reduzida no TO transplantado após vitrificação ou não, comparado ao TO apenas vitrificado. Em conclusão, em caprinos a função ovariana, bem como os folículos pré-antrais podem se desenvolver até o estágio de folículos antrais após o transplante de TO fresco ou vitrificado. No entanto, muitos esforços ainda precisam ser realizados visando o sucesso completo da técnica de manipulação (transplante ou cultivo in vitro) de folículos pré-antrais após criopreservação.

Cryopreservation and transplantation of ovarian tissue (OT) have been a promising alternative to preserve and restore the fertility of young and adult patients with cancer under the risk of infertility due to the damage caused by chemo and/or radiotherapies. Therefore, the objective of this study was to evaluate the regeneration of ovarian function after auto and xenotransplantation of fresh or vitrified goat OT. The study was conducted in three distinct phases: Phase I: Orthotopic autotransplantation of fresh or vitrified goat OT; Phase II: Heterotopic autotransplantation and in vitro culture of fresh or vitrified ovarian tissue and Phase III: Xenotransplantation of fresh or vitrified goat ovarian tissue. In Phases I and II, OT was grafted under the curvature minor of the uterus and peritoneal cavity, for 6 and 3 months respectively. In phase III, OT was grafted into the peritoneal cavity of BALB/nude mice. In Phase I, after recovery of OT, it was observed a significant increase of progesterone in goats who received fresh OT. Although the percentage of morphologically normal preantral follicles (MNPF) was similar between fresh OT (control) and fresh transplanted OT, in this condition follicular density was significantly lower than control. In Phase II, after three months of transplantation, three antral follicles were observed on the surface of the OT of fresh or vitrified grafts. In this phase, the percentage of MNPF in the OT from the control, fresh or vitrified transplant, was similar. Serum estradiol level was not altered during the transplantation period. On the other hand, after 7 days of in vitro culture of fresh or vitrified OT, progesterone and estradiol levels significantly reduced. SDF-1 and Cx37 proteins were detected in oocytes and granulosa cells of follicles present in fresh, vitrified or fresh cultured OT. However, in vitrified cultured OT, Cx37 was found only in granulosa cells. Cx43 was detected in granulosa cells, theca cells and the zona pellucida of follicles in all treatments. In Phase III, the percentage of MNPF in vitrified or vitrified and transplanted OT significantly reduced when compared to fresh or transplanted fresh OT. In addition, in vitrified OT, the percentage of developing follicles was significantly higher when compared to fresh OT or non-vitrified transplanted OT. Apoptosis evaluated by mRNA expression of caspase 3 reduced significantly after transplantation of fresh or vitrified OT when compared to the OT only vitrified. In conclusion, in goats, the ovarian function, as well as the preantral follicles, can develop to the antral stage after transplantation of fresh or vitrified OT. However, its still need many efforts to complete the success of the technique of manipulation (transplantation or in vitro culture) of preantral follicles after cryopreservation.

Rastreabilidade de células germinativas primordiais (CGPs) e micromanipulação em duas espécies de peixes teleósteos

O transplante de células germinativas primordiais (CGPs) é uma abordagem promissora para área da Aquicultura, mas para isso é necessária à compreensão dos estágios de desenvolvimento embrionário e larval como também a padronização de técnicas relacionadas à micromanipulação do embrião e de células germinativas a fim de obter com sucesso quimeras germinativas. Assim, os objetivos desta pesquisa foram avaliar o efeito de três temperaturas (22oC, 26oC e 30oC) sob o desenvolvimento inicial de B. amazonicus (espécie doadora); desenvolver protocolos para micromanipulação de ovos, de células embrionárias e de criopreservação de blastômeros em Astyanax altiparanae (espécie receptora); identificar as CGPs e a rota de migração dessas células em ambas as espécies, além da produção de quimeras germinativas através do transplante de células embrionárias a fim de que a espécie receptora estéril (3n) produza gametas da espécie doadora. Para isso, os reprodutores das espécies envolvidas foram induzidos hormonalmente à reprodução, os gametas foram extrusados e fertilizados pelo método a seco. Para avaliar o desenvolvimento inicial, ovos recém-fertilizados foram distribuídos em aquários com oxigenação e temperatura controlada, coletados em momentos pré- estabelecidos e analisados sob estereomicroscópio. Para o desenvolvimento do protocolo de micromanipulação de ovos de Astyanax altiparanae, inicialmente avaliou-se a eficácia na remoção do córion em alíquotas de ovos recém-fertilizados distribuídas em placas de Petri contendo pronase (0,05%) ou tripsina (0,15%) diluídas em solução salina (Holtfreter; Characin; Ringer; Hanks; D-PBS ou MEM) e foi observada a solução enzimática mais eficiente sem afetar a viabilidade do embrião. Posteriormente, os ovos foram submersos nas mesmas soluções salinas testadas para remoção do córion, livres de enzimas. Para determinar a melhor solução salina de incubação foi observada a morfologia desses ovos. Ovos decorionados de A. altiparanae foram microinjetados com isotiocianato de fluoresceína (FITC-coloração verde) durante as primeiras clivagens e na fase de blástula, os blastômeros foram dissociados e imersos em soluções crioprotetoras com diferentes osmolaridade e concentrações para vitrificação. Após o descongelamento, a viabilidade foi analisada com auxilio de iodeto de propídio (cora em vermelho as células mortas). Para visualização e rastreabilidade das CGPs endógenas, ovos decorionados de A. altiparanae e B. amazonicus foram microinjetados com GFP-nos1 3UTR mRNA no estágio de 1-2 células e mantidos em solução de Holtfreter e Characin, respectivamente e observados em cada estágio do desenvolvimento. Para o transplante, ovos da espécie doadora foram microinjetados com FITC no blastodisco para marcação celular, os ovos da espécie receptora foram submetidos a choque térmico para triploidização (3n). Quando as duas espécies atingiram o estágio de blástula, os blastômeros corados (doador) foram transplantados na blastoderme de embriões receptores não corados. A taxa de peixes quiméricos e a migração dos blastômeros do doador no embrião receptor foram mensuradas. Os resultados mostraram que a duração dos estágios de desenvolvimento foi maior em 22oC e menor em 30oC, e a fase de 512-1000 blastômeros, no estágio de blástula, fase de interesse para o transplante celular, foi de 1 h 30 min a 22oC e limitada a 25 min nas demais temperaturas, afetando também o tempo de eclosão. A solução mais eficiente para remoção do córion em A. altiparanae foi de Characin com pronase (1:44 min) e para incubação dos ovos foi a solução de Holtfreter por apresentar blastômeros com tamanhos semelhantes, formando uma massa uniforme similar aos do controle. Após a criopreservação, 10% de blastômeros viáveis foram obtidos em quatro soluções crioprotetoras (DMSO, EG e sacarose) com osmolaridade de 1,5; 4,5; 6,5 e 7,5. As CGPs GFP-positivas foram visualizadas em ambas as espécies no estágio de somitogênese, localizadas na região medial do embrião, as quais migraram durante o desenvolvimento inicial. Com o transplante de blastômeros obteve-se uma quimera germinativa, a qual apresentou células fluorescentes na região das cristas gonadais, sendo observadas, inicialmente em estágio de final segmentação. Estes resultados proporcionam conhecimentos para a manipulação de embriões sob diferentes temperaturas, o que permite acelerar ou retardar estágios específicos do desenvolvimento embrionário otimizando o tempo de micromanipulação de embriões para aplicações em estudos biotecnológicos; fornece informações sobre as condições necessárias para o preparo e a manutenção de embriões e blastômeros para o transplante de células embrionárias e ainda, proporciona conhecimento sobre a morfologia e a rota de migração de CGPs endógenas de A. altiparanae e B. amazonicus o que possibilitou a produção de quimeras interespecíficas.

Primordial germ cell (PGCs) transplantation is a promising approach for aquaculture area, but it is necessary the understanding of the embryonic and larval development stages as well as the standardization of techniques related to embryo micromanipulation and germ cells in order to get germ chimeras successfully. Thus, the aims of this research were to evaluate the effect of three temperatures (22°C, 26°C and 30°C) on the early development of Brycon amazonicus (donor species); develop protocols for micromanipulation of egg, embryonic cells and blastomeres cryopreservation in Astyanax altiparanae (host species); identify the PGCs and their migration route in both species, also producing germ chimeras through transplantation of embryonic cells to host sterile species (3n) in order to produce gametes from the donor species. For this, broodstock of the involved species were hormonally induced to reproduction, and the gametes were stripped and fertilized by dry method. To evaluate the early development, newly fertilized eggs were distributed into aquarium with controlled oxygenation and temperature, collected at pre-established times and analyzed under a stereomicroscope. For the development of micromanipulation protocol of eggs from Astyanax altiparanae, it was initially evaluated the effectiveness of removing the chorion, in aliquots of newly fertilized eggs distributed on Petri dishes containing pronase (0.05%) or trypsin (0.15%) diluted in saline solutions (Holtfreter; Characin; Ringer; Hanks, D-PBS or MEM) and it was observed the most efficient enzymatic solution without affecting the viability of the embryo. After dechorionation, the eggs were submerged the same saline solutions tested for removing the chorion, free of enzymes. To determine the best incubation saline solution, morphology and quantification of the eggs were performed. Dechorionated eggs of A. altiparanae were microinjected with fluorescein isothiocyanate (FITC, green color) during the first cleavages and in blastula stage the blastomeres were dissociated and immersed in cryoprotectant solutions with different concentrations and osmolarity for vitrification. After thawing, the viability was analyzed using propidium iodide (staining in red dead cells). For viewing and tracing of endogenous PGCs, dechorionated eggs of A. altiparanae and B. amazonicus were microinjected with GFP-nos1 3UTR mRNA in stage of 1-2 cells and kept in Holtfreters and Characin solutions, respectively, and observed at each development stage. For transplant, donor specie eggs were microinjetados with FITC in blastodisc for cell labeling, the eggs of the host species were heat shocked for triploidization (3n). When the two species reached the blastula stage, the stained blastomeres (donor) were transplanted in blastoderm of unstained host embryos. The rate of chimeric fish and the migration of the donor blastomeres the recipient embryo were measured. The results showed that the duration of the stages of development was higher at 22oC and lower at 30°C, and the phase of 512-1000 blastomeres, the blastula stage, phase of interest to the cell transplant was 1 h 30 min at 22oC and 25 min in the other temperatures, affecting also the time of hatching. The most efficient solution for removing the chorion in A. altiparanae was Characin solution with pronase (1:44 min) and for eggs incubation was Holtfreter's solution because of the presentation of blastomeres with similar sizes forming a uniform mass as the control. After cryopreservation, 10% of viable blastomeres were obtained in four cryoprotectant solutions (DMSO, EG and sucrose) with osmolarity of 1.5; 4.5; 6.5 and 7.5. The GFP- positive PGCs were observed in both species in the somitogenesis stage, located in the medial region of the embryo, which were migrated during the early development. With the blastomeres transplantation, it was obtained a germline chimera, showing fluorescent cells in region of gonadal ridges, being observed initially in end-stage segmentation. These results provide knowledge to manipulate embryos under different temperatures allowing to accelerate or retard specific stages of embryonic development, optimizing the time of embryo micromanipulation for applications in biotechnological studies; provide information about the conditions required for preparing and maintaining embryos and blastomeres for transplantation of embryonic cells and provide knowledge about the morphology and migration route of the endogenous PGCs of A. altiparanae and B. amazonicus, which allowed the production of interspecific chimeras.

Limbal autograft transplantation in a dog with alkali-induced ulceration

A case of a 3-month-old female mongrel dog with a history of apathy and previous contact with an alkaline (sodium hydroxide) is reported. The dog was reluctant to open the right eye. Ophthalmic examination revealed blepharospasm, photophobia, epiphora, discrete chemosis, conjunctival hyperemia, and diffuse corneal edema involving the limbus. The fluorescein test was positive and the result of the Schirmer tear test was 32mm min-1. On the basis of these findings the diagnosis was alkali-induced ulceration and limbal autograft transplantation was performed. Corneal vascularization was observed by the third postoperative day, with intensification in vessel number and caliber on subsequent days and small areas of corneal transparency. The present results show that limbal autograft transplantation is a feasible procedure for the therapeutic management of alkali-induced corneal ulcers.

Descreve-se um caso de um animal da espécie canina, fêmea, sem raça definida, de três meses de idade, com histórico de apatia, contato prévio com produto alcalino (hidróxido de sódio) e relutância em abrir o olho direito. Ao exame oftálmico, foram observados blefarospasmo, fotofobia, epífora, quemose discreta, hiperemia conjuntival, e edema corneal difuso com comprometimento do limbo. Foram realizados o teste da fluoresceína positivo e o Teste Lacrimal de Schirmer 32mm min-1. Com base nos achados, firmou-se o diagnóstico de úlcera por álcali e realizou-se transplante autógeno do limbo. No pós-operatório, observou-se vascularização corneal a partir do terceiro dia e sua intensificação, em número e calibre, nos dias subseqüentes. Também foram observadas mínimas áreas de transparência corneal. Os resultados obtidos permitem admitir que o transplante autógeno de limbo é procedimento factível para o manejo da terapia de úlceras de córnea por álcali.

Limbal autograft transplantation in a dog with alkali-induced ulceration

A case of a 3-month-old female mongrel dog with a history of apathy and previous contact with an alkaline (sodium hydroxide) is reported. The dog was reluctant to open the right eye. Ophthalmic examination revealed blepharospasm, photophobia, epiphora, discrete chemosis, conjunctival hyperemia, and diffuse corneal edema involving the limbus. The fluorescein test was positive and the result of the Schirmer tear test was 32mm min-1. On the basis of these findings the diagnosis was alkali-induced ulceration and limbal autograft transplantation was performed. Corneal vascularization was observed by the third postoperative day, with intensification in vessel number and caliber on subsequent days and small areas of corneal transparency. The present results show that limbal autograft transplantation is a feasible procedure for the therapeutic management of alkali-induced corneal ulcers.

Descreve-se um caso de um animal da espécie canina, fêmea, sem raça definida, de três meses de idade, com histórico de apatia, contato prévio com produto alcalino (hidróxido de sódio) e relutância em abrir o olho direito. Ao exame oftálmico, foram observados blefarospasmo, fotofobia, epífora, quemose discreta, hiperemia conjuntival, e edema corneal difuso com comprometimento do limbo. Foram realizados o teste da fluoresceína positivo e o Teste Lacrimal de Schirmer 32mm min-1. Com base nos achados, firmou-se o diagnóstico de úlcera por álcali e realizou-se transplante autógeno do limbo. No pós-operatório, observou-se vascularização corneal a partir do terceiro dia e sua intensificação, em número e calibre, nos dias subseqüentes. Também foram observadas mínimas áreas de transparência corneal. Os resultados obtidos permitem admitir que o transplante autógeno de limbo é procedimento factível para o manejo da terapia de úlceras de córnea por álcali.

Limbal autograft transplantation in a dog with alkali-induced ulceration

A case of a 3-month-old female mongrel dog with a history of apathy and previous contact with an alkaline (sodium hydroxide) is reported. The dog was reluctant to open the right eye. Ophthalmic examination revealed blepharospasm, photophobia, epiphora, discrete chemosis, conjunctival hyperemia, and diffuse corneal edema involving the limbus. The fluorescein test was positive and the result of the Schirmer tear test was 32mm min-1. On the basis of these findings the diagnosis was alkali-induced ulceration and limbal autograft transplantation was performed. Corneal vascularization was observed by the third postoperative day, with intensification in vessel number and caliber on subsequent days and small areas of corneal transparency. The present results show that limbal autograft transplantation is a feasible procedure for the therapeutic management of alkali-induced corneal ulcers.

Descreve-se um caso de um animal da espécie canina, fêmea, sem raça definida, de três meses de idade, com histórico de apatia, contato prévio com produto alcalino (hidróxido de sódio) e relutância em abrir o olho direito. Ao exame oftálmico, foram observados blefarospasmo, fotofobia, epífora, quemose discreta, hiperemia conjuntival, e edema corneal difuso com comprometimento do limbo. Foram realizados o teste da fluoresceína positivo e o Teste Lacrimal de Schirmer 32mm min-1. Com base nos achados, firmou-se o diagnóstico de úlcera por álcali e realizou-se transplante autógeno do limbo. No pós-operatório, observou-se vascularização corneal a partir do terceiro dia e sua intensificação, em número e calibre, nos dias subseqüentes. Também foram observadas mínimas áreas de transparência corneal. Os resultados obtidos permitem admitir que o transplante autógeno de limbo é procedimento factível para o manejo da terapia de úlceras de córnea por álcali.

ESTUDO DA CAPACIDADE IMUNOMODULADORA in vivo DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS OBTIDAS DA MATRIZ DO CORDÃO UMBILICAL EQUINO

Células tronco mesenquimais (CTMs) possuem potencial terapêutico regulando a inflamação, prevenindo a formação de feridas e regenerando tecidos. Por sua propriedade imunomoduladora, tem sido estudadas no transplante alogênico. As CTMs derivadas de anexos fetais são destaque por serem de fácil obtenção, de tecidos geralmente descartados e com grande possibilidade de formação de bancos. O presente trabalho objetiva avaliara resposta inflamatória in vivo do músculo glúteo médio à inoculação alogênica de CTMs derivadas de cordão umbilical equino. As CTMs foram cultivadas e caracterizadas por meio de imunofenotipagem e diferenciação em linhagens mesodermais e então, criopreservadas. Após descongelação e expansão as CTMs foram transplantadas no dia 0 no músculo glúteo médio direito e esquerdo, em duas regiões diferentes, em seis éguas hígidas. Como controle foram realizadas injeções de Solução Balanceada de Hank´s caudalmente às regiões onde foram transplantadas as CTMs. As biópsias musculares forma realizadas 30 dias antes do transplante de CTMs, bem como dois dias depois do transplante e 7 dias após o transplante. Todos os transplantes e biópsias foram precedidos pelo exame ultrassonográfico além de colheita de sangue para os parâmetros hematológicos. As CTMs foram bem caracterizadas, apresentaram alta clonicidade e não provocaram alteração nos parâmetros hematológicos. O exame ultrassonográfico revelou aspecto sugestivo de reação inflamatória 48 horas após os transplantes em ambos os grupos, controle e tratadoNa avaliação histológica não foram encontradas diferenças entre os grupos tratado e controle em nenhum dos momentos estudados. Uma discreta diferença no parâmetro de infiltrado neutrofílico foi encontrada entre D30 e D2 apenas no grupo tratado (P<0,05), entretanto não houveram diferenças em D7. Desta forma, podemos concluir a terapia celular não incitou resposta inflamatória sistêmica e local aos receptores, demonstrando pela primeira vez, que o uso alogênico de CTMs do cordão umbilical equino pode ser realizado com segurança em lesões no músculo glúteo médio de equinos.

Mesenchymal stem cells (MSCs) have therapeutic potential regulating inflammation, preventing the formation of wounds and regenerating tissues. MSCs derived from fetal membranes are highlighted because they are easy to obtain, from tissues usually discarded and with great possibility of bank formation. This study evaluated the in vivo inflammatory response of the gluteus medius muscle to the inoculation of allogeneic MSCs derived from equine umbilical cord. MSCs were cultured and characterized by immunophenotyping and differentiation into mesodermal lineages, and next cryopreserved. After thawing and expansion of MSCs transplantation was performed on day 0 in the right and left middle gluteal muscle at two different regions in six healthy mares. Likewise, for the control group, an injection of Hank s-Balanced Solution was performed caudally to the regions where MSCs were transplanted. Muscle biopsies were performed 30 days before the transplantation of MSCs, 2 days and 7 days after transplantation. All biopsies and transplants were preceded by ultrasonographic examination, and blood samples retrieval for hematological parameters. The biopsies were be analyzed by histological techniques. The MSCs were well characterized, and possessed high clonogenicity causing no changes in the hematological parameters evaluated. Ultrasound examination was suggestive of inflammation 48 hours after transplantation in both groups, control (C) and treated (T). Histological evaluation found no differences between C and T groups in any of the time points studied. A discrete temporal inflammation were found between D30 and D2 (P <0.05) only in the T group, however no differences were found in D7. Thus, we conclude that the cellular therapy did not incited systemic inflammatory response to recipients, demonstrating, for the first time, that the allogeneic use of MSCs from equine umbilical cord are safety for use in horse gluteus medium injury.

Autologous bone marrow transplantation in a dog with lymphoma: a clinical study

The objective of this study is to provide the first report of bone marrow transplantation (BMT) in dogs in Brazil. A Rottweiler with cutaneous lymphoma was submitted to a twelve-week Madison-Wisconsin chemotherapy protocol followed by autologous bone marrow transplantation. For this, 10mL kg-1 of bone marrow was collected simultaneously from both iliac crests and cryopreserved in a freezer at -80°C. The conditioning step was performed by administering cyclophosphamide by intravenous route at 400mg m-2. Bone marrow was reinfused after defrosting in a water bath at 37°C. Bone marrow nucleated cell counts before and after freezing, showed a small relative loss of nucleated cells (35.10 and 31.80x10³µL-1 , respectively). Cyclophosphamide induced neutropenia which was reverted by a granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) capable of stimulating hematopoetic reconstitution. On the day 360 after transplant the patient was found to be in complete remission. This study indicates that autologous BMT in a dog with lymphoma submitted to myelosuppressive chemotherapy was potentially safe and effective.

Este estudo teve como objetivo descrever o primeiro relato de transplante de medula óssea (TMO) em cães no Brasil. Para tanto, um rottweiller com linfoma cutâneo foi submetido ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin pelo período de 12 semanas, seguido pelo transplante autólogo de medula óssea. Para tanto, 10mL kg-1 de medula óssea foram coletados de ambas as cristas ilíacas do paciente, simultaneamente; sendo o volume final criopreservado em freezer a -80°C. A etapa de condicionamento foi realizada com a administração da ciclofosfamida, por via intravenosa, na dose de 400mg m-2. A reinfusão da medula óssea foi realizada após o descongelamento da bolsa em banho-maria a 37°C. As contagens de células nucleadas de alíquotas obtidas da bolsa de medula óssea antes do congelamento e após o descongelamento demonstram pequena perda relativa de células nucleadas (35,10 e 31,80 x10³µL-1, respectivamente). A neutropenia decorrente da ciclofosfamida foi revertida com a administração de um fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), que foi capaz de acelerar a reconstituição hematopoética. O paciente encontra-se no dia + 360 pós-transplante em remissão completa da doença. Este trabalho indicou que o TMO autólogo em um cão com linfoma, submetido à quimioterapia mielossupressora, foi potencialmente seguro e efetivo.

Autologous bone marrow transplantation in a dog with lymphoma: a clinical study

The objective of this study is to provide the first report of bone marrow transplantation (BMT) in dogs in Brazil. A Rottweiler with cutaneous lymphoma was submitted to a twelve-week Madison-Wisconsin chemotherapy protocol followed by autologous bone marrow transplantation. For this, 10mL kg-1 of bone marrow was collected simultaneously from both iliac crests and cryopreserved in a freezer at -80°C. The conditioning step was performed by administering cyclophosphamide by intravenous route at 400mg m-2. Bone marrow was reinfused after defrosting in a water bath at 37°C. Bone marrow nucleated cell counts before and after freezing, showed a small relative loss of nucleated cells (35.10 and 31.80x10³µL-1 , respectively). Cyclophosphamide induced neutropenia which was reverted by a granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) capable of stimulating hematopoetic reconstitution. On the day 360 after transplant the patient was found to be in complete remission. This study indicates that autologous BMT in a dog with lymphoma submitted to myelosuppressive chemotherapy was potentially safe and effective.

Este estudo teve como objetivo descrever o primeiro relato de transplante de medula óssea (TMO) em cães no Brasil. Para tanto, um rottweiller com linfoma cutâneo foi submetido ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin pelo período de 12 semanas, seguido pelo transplante autólogo de medula óssea. Para tanto, 10mL kg-1 de medula óssea foram coletados de ambas as cristas ilíacas do paciente, simultaneamente; sendo o volume final criopreservado em freezer a -80°C. A etapa de condicionamento foi realizada com a administração da ciclofosfamida, por via intravenosa, na dose de 400mg m-2. A reinfusão da medula óssea foi realizada após o descongelamento da bolsa em banho-maria a 37°C. As contagens de células nucleadas de alíquotas obtidas da bolsa de medula óssea antes do congelamento e após o descongelamento demonstram pequena perda relativa de células nucleadas (35,10 e 31,80 x10³µL-1, respectivamente). A neutropenia decorrente da ciclofosfamida foi revertida com a administração de um fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), que foi capaz de acelerar a reconstituição hematopoética. O paciente encontra-se no dia + 360 pós-transplante em remissão completa da doença. Este trabalho indicou que o TMO autólogo em um cão com linfoma, submetido à quimioterapia mielossupressora, foi potencialmente seguro e efetivo.

Autologous bone marrow transplantation in a dog with lymphoma: a clinical study

The objective of this study is to provide the first report of bone marrow transplantation (BMT) in dogs in Brazil. A Rottweiler with cutaneous lymphoma was submitted to a twelve-week Madison-Wisconsin chemotherapy protocol followed by autologous bone marrow transplantation. For this, 10mL kg-1 of bone marrow was collected simultaneously from both iliac crests and cryopreserved in a freezer at -80°C. The conditioning step was performed by administering cyclophosphamide by intravenous route at 400mg m-2. Bone marrow was reinfused after defrosting in a water bath at 37°C. Bone marrow nucleated cell counts before and after freezing, showed a small relative loss of nucleated cells (35.10 and 31.80x10³µL-1 , respectively). Cyclophosphamide induced neutropenia which was reverted by a granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) capable of stimulating hematopoetic reconstitution. On the day 360 after transplant the patient was found to be in complete remission. This study indicates that autologous BMT in a dog with lymphoma submitted to myelosuppressive chemotherapy was potentially safe and effective.

Este estudo teve como objetivo descrever o primeiro relato de transplante de medula óssea (TMO) em cães no Brasil. Para tanto, um rottweiller com linfoma cutâneo foi submetido ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin pelo período de 12 semanas, seguido pelo transplante autólogo de medula óssea. Para tanto, 10mL kg-1 de medula óssea foram coletados de ambas as cristas ilíacas do paciente, simultaneamente; sendo o volume final criopreservado em freezer a -80°C. A etapa de condicionamento foi realizada com a administração da ciclofosfamida, por via intravenosa, na dose de 400mg m-2. A reinfusão da medula óssea foi realizada após o descongelamento da bolsa em banho-maria a 37°C. As contagens de células nucleadas de alíquotas obtidas da bolsa de medula óssea antes do congelamento e após o descongelamento demonstram pequena perda relativa de células nucleadas (35,10 e 31,80 x10³µL-1, respectivamente). A neutropenia decorrente da ciclofosfamida foi revertida com a administração de um fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF), que foi capaz de acelerar a reconstituição hematopoética. O paciente encontra-se no dia + 360 pós-transplante em remissão completa da doença. Este trabalho indicou que o TMO autólogo em um cão com linfoma, submetido à quimioterapia mielossupressora, foi potencialmente seguro e efetivo.

Estudo da regeneração esplênica autóloga e heterotópica em ratos / Antologus and heterotopic splenic regeneration in rats

OBJETIVO: estudar a regeneração esplênica dos fragmentos de baço autólogos e heterotópicos implantados na cavidade peritoneal e na tela subcutânea em ratos e comparar os seus aspectos histológicos e citológicos com baço normal. MÉTODOS: 44 ratos Wistar foram submetidos a esplenectomia e receberam fragmentos de auto-implante: GA = na tela subcutânea (n=22) e GB na cavidade peritoneal (n=22). GAI (n=11) e GAII (n=11) receberam implante de fragmento único. GBIII (n=11) e GBIV (n=11) receberam implantes de quatro fragmentos. O baço remanescente foi usado como controle. Após 5 semanas de foram submetidos à eutanásia e foram investigados os aspectos macroscópicos e microscópicos (histológicos e citológicos) dos fragmentos nos seus locais de implante. Os resultados foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos(p>0,05). RESULTADOS: Não houve diferença estatística significante entre o grupo que recebeu implante na tela subcutânea (n=22) e o grupo da cavidade peritoneal (n=22). Quanto à presença ou ausência de tecidos esplênicos regenerados (p=0,182), também não apresentou diferença com significância estatística. Os estudos histológicos e citológicos do tecido regenerado não evidenciaram diferenças em relação ao grupo controle. CONCLUSAO: A regeneração do tecido esplênico autólogo e heterotópico em ratos ocorre nas mesmas proporções tanto na tela subcutânea como na cavidade peritoneal. Os aspectos histológicos e citológicos são semelhantes aos do baço normal. (AU)

PURPOSE: verify the cytological and histological aspects of the regeneration of fragments of autologous and heterotopic spleen implanted in peritoneal cavity and subcutaneous screen in Wistar albino rats.METHODS: forty four Wistar rats were assigned to one of two groups A(n=22) and B(n=22), which received their implants in subcutaneous screen and peritoneal cavity, respectively, under anesthesia. Those groups were redistributed in two other subgroups A1 (n=11) and B1(n=11), which received one and four splenic fragments in the areas of study. The remaining spleen was guided for cytological and histological processing, and was used as a control group. After five weeks, they were submitted to euthanasia, and peritoneal cavity opening took place as well as subcutaneous screen was taken off in order to search for regenerated splenic tissue. Cytological and histological assessment in the regenerated splenic tissue was performed, and the results were compared to the control group. Statistical analysis no parametric tests (p=>0,05) were used for.RESULTS: there were no statistically significant differences in relation to regenerated splenic tissue in subcutaneous screen (n=22) and the peritoneal cavity (n=22). In relation between presence and absence of regeneration, they're no statistically significant differences (p=0,182). Cytological and histological assessment did not show any statistically significant difference in relation to the control group.CONCLUSION: regeneration of autologous and heterotopic splenic tissue in mice is viable, and occurs frequently. Cytological and histological aspects are similar to normal spleen.

Ceratoplastia com enxerto autógeno lamelar livre de córnea e pediculado de conjuntiva fixados com adesivo de cianoacrilato em cães

The cornea is frequently exposed to traumas, lacerations, perfurations and ulcers, needing in most cases surgical correction. The conjunctival pedicle grafts are indicated in these cases, giving protection and support for ulcers, but obstructing the visual capacity of the affected eye. The lamelar grafts are other indications for treatment, mainly when preventing the visual loss. The cianoacrylate adhesive was discovered at the end of the forthies, but started to be used in ophtalmology in the begigning of the sixties. Due to its properties, as good tissue adhesion, quick dried and polimerization, it has been indicated in the treatment of deep or refractive corneal ulcers, descemetoceles and in punctiform corneal perforations. With the objective to test the cianoacrylate adhesive in the fixation and maintenance of corneolamelar grafts and conjunctival pedicle grafts in corneal ulcer, 10 male and female mongrel dogs from the Central Bioterio of Santa Maria Federal University were used. After anesthesia protocol and routine eyeball fixation, a trephination was performed, involving 2/3 of the corneal stroma, being 5.5mm in diameter in the left eye and 5mm in the right eyes. The lamelar corneal grafts from the left eyes were fixed in the recipient cornea of the right eyes, using the adhesive in the margin of the graft. In the left eyes, a conjunctival pedicle flaps were fixed in the corneal deffects, using the same adhesive in the margins. Daily ophtalmologic control was made during 30 days. The corneal lamelar grafts were incorporated to the recipient cornea. The fixation technique was rapid and easily performed, with low cost. The eyes had 20% opacities with the use of the lamelar corneal graft, and 80% with no vascularization and opacities present in 30 days. When conjunctival flaps technique was used, it has 100% dehiscence of the cases.

A córnea, devido a sua localização externa e exposta, está freqüentemente sujeita a traumas ou processos lesivos como lacerações, perfurações e ulcerações, havendo, em muitos casos a necessidade de correção cirúrgica. Os enxertos pediculados de conjuntiva têm seu uso indicado nestes casos e se prestam bem como medidas de proteção e suporte para as ulcerações, porém impedem a capacidade visual plena do olho afetado. Os transplantes lamelares são outra indicação de tratamento, principalmente quando se deseja prevenir a ocorrência da perda visual. Os adesivos de cianoacrilato foram descobertos no final da década de 40, mas somente foram utilizados em oftalmologia no início da década de 60. Devido a propriedades como boa aderência aos tecidos biológicos, rápida secagem e polimerização, têm sido indicados no tratamento de úlceras profundas ou refratárias, descemetoceles e ainda em pequenas perfurações corneanas. Com o objetivo de testar o adesivo de cianoacrilato na fixação e manutenção de botões córneo-lamelares autógenos e de enxertos pediculados de conjuntiva em úlceras corneanas experimentais, foram utilizados 10 cães, machos ou fêmeas, provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Após anestesia, blefarostase e fixação do globo ocular como de rotina, foram realizadas trepanações compreendendo 2/3 da espessura da córnea sendo de 5,5 mm de diâmetro no olho esquerdo (OE) e de 5 mm no olho direito (OD). O botão lamelar resultante do OE foi fixado no leito receptor do OD com o uso de adesivo ao longo das bordas do enxerto e da córnea receptora. No olho esquerdo, após sua confecção, o enxerto de conjuntiva pediculado foi fixado à área receptora também por meio da colocação de adesivo sobre suas bordas. Foi realizada avaliação oftalmológica diária durante 30 dias. Os botões lamelares permaneceram fixados e foram incorporados à córnea receptora. A técnica de fixação foi de fácil realização, sendo rápida e de baixo custo com opacidade leve em 20% dos casos e ausente em 80% e ausência de vascularização aos 30 dias. Porém, houve 100% de deiscência total nos enxertos pediculados. A técnica de ceratoplastia lamelar autógena com o uso de adesivo de n-butil cianoacrilato pode ser indicada como opção terapêutica nas úlceras profundas em cães.

Ceratoplastia com enxerto autógeno lamelar livre de córnea e pediculado de conjuntiva fixados com adesivo de cianoacrilato em cães

The cornea is frequently exposed to traumas, lacerations, perfurations and ulcers, needing in most cases surgical correction. The conjunctival pedicle grafts are indicated in these cases, giving protection and support for ulcers, but obstructing the visual capacity of the affected eye. The lamelar grafts are other indications for treatment, mainly when preventing the visual loss. The cianoacrylate adhesive was discovered at the end of the forthies, but started to be used in ophtalmology in the begigning of the sixties. Due to its properties, as good tissue adhesion, quick dried and polimerization, it has been indicated in the treatment of deep or refractive corneal ulcers, descemetoceles and in punctiform corneal perforations. With the objective to test the cianoacrylate adhesive in the fixation and maintenance of corneolamelar grafts and conjunctival pedicle grafts in corneal ulcer, 10 male and female mongrel dogs from the Central Bioterio of Santa Maria Federal University were used. After anesthesia protocol and routine eyeball fixation, a trephination was performed, involving 2/3 of the corneal stroma, being 5.5mm in diameter in the left eye and 5mm in the right eyes. The lamelar corneal grafts from the left eyes were fixed in the recipient cornea of the right eyes, using the adhesive in the margin of the graft. In the left eyes, a conjunctival pedicle flaps were fixed in the corneal deffects, using the same adhesive in the margins. Daily ophtalmologic control was made during 30 days. The corneal lamelar grafts were incorporated to the recipient cornea. The fixation technique was rapid and easily performed, with low cost. The eyes had 20% opacities with the use of the lamelar corneal graft, and 80% with no vascularization and opacities present in 30 days. When conjunctival flaps technique was used, it has 100% dehiscence of the cases.

A córnea, devido a sua localização externa e exposta, está freqüentemente sujeita a traumas ou processos lesivos como lacerações, perfurações e ulcerações, havendo, em muitos casos a necessidade de correção cirúrgica. Os enxertos pediculados de conjuntiva têm seu uso indicado nestes casos e se prestam bem como medidas de proteção e suporte para as ulcerações, porém impedem a capacidade visual plena do olho afetado. Os transplantes lamelares são outra indicação de tratamento, principalmente quando se deseja prevenir a ocorrência da perda visual. Os adesivos de cianoacrilato foram descobertos no final da década de 40, mas somente foram utilizados em oftalmologia no início da década de 60. Devido a propriedades como boa aderência aos tecidos biológicos, rápida secagem e polimerização, têm sido indicados no tratamento de úlceras profundas ou refratárias, descemetoceles e ainda em pequenas perfurações corneanas. Com o objetivo de testar o adesivo de cianoacrilato na fixação e manutenção de botões córneo-lamelares autógenos e de enxertos pediculados de conjuntiva em úlceras corneanas experimentais, foram utilizados 10 cães, machos ou fêmeas, provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Após anestesia, blefarostase e fixação do globo ocular como de rotina, foram realizadas trepanações compreendendo 2/3 da espessura da córnea sendo de 5,5 mm de diâmetro no olho esquerdo (OE) e de 5 mm no olho direito (OD). O botão lamelar resultante do OE foi fixado no leito receptor do OD com o uso de adesivo ao longo das bordas do enxerto e da córnea receptora. No olho esquerdo, após sua confecção, o enxerto de conjuntiva pediculado foi fixado à área receptora também por meio da colocação de adesivo sobre suas bordas. Foi realizada avaliação oftalmológica diária durante 30 dias. Os botões lamelares permaneceram fixados e foram incorporados à córnea receptora. A técnica de fixação foi de fácil realização, sendo rápida e de baixo custo com opacidade leve em 20% dos casos e ausente em 80% e ausência de vascularização aos 30 dias. Porém, houve 100% de deiscência total nos enxertos pediculados. A técnica de ceratoplastia lamelar autógena com o uso de adesivo de n-butil cianoacrilato pode ser indicada como opção terapêutica nas úlceras profundas em cães.

Transplante de bexiga: estudo piloto

PURPOSE: Our aim was to study the feasible of bladder transplants. METHODS: Alive mongrel dogs are being used as trigone bladder segment donators and receptors RESULTS: The transplanted patients had 15 days of immunosuppression and so far an 18-months satisfactory post-operative outcome. Since a month after surgery, the dogs have been presenting full functional control of micturition and the evaluations have been showing normal bladder storage and contraction capacities. CONCLUSION: bladder transplants in dogs its a possible, physiological and simple model.

OBJETIVO: Desenvolver um modelo biológico que seja viável para o estudo sistemático do transplante de bexiga. MÉTODOS: Cães mestiços vivos são usados como doadores e receptores do segmento supra-trigonal da bexiga. RESULTADOS: Os pacientes tansplantados só fizeram uso de imunossupressão por 15 dias, estão vivos e sadios com 18 meses de transplante. Desde o primeiro mês de transplante os cães apresentam controle funcional da micção, inclusive sem urina residual importante. CONCLUSÃO: Transplante de bexiga em cães é um modelo viável, fisiológico e simples.

Ação do soro de cabra anti-soro de coelho imunizado ou não com células linfóides do doador sobre o alotransplante cardíaco em ratos: immunosupression of goat antiserum against rabbit serum immunized or not with donor lymphoid cells

OBJECTIVE: To study the immunosupression efficacy an specific anti-antilymphocytic serum prepared in goats in a model of cardiac allografts in rats. METHODS: Three rabbits were immunized with lymphoid cells obtained from mesenteric lymphatic nodes of Wistar rats. Each one received subcutaneously 3x10(9) cells mixed with Freund's adjuvant. After 2 weeks, they were injected with the same amount of cells at weekly intervals for 4 additional times. In the 5th week they were bled and their serum were mixed. This serum, which had a cytotoxic titer of 1:1024, was used to immunize 2 goats that gave rise to the anti-antilymphocytic serum (AAS-1 and AAS-2). As control we immunized 1 additional goat with normal rabbit serum (ANS). The gel diffusion technique (AAS x rabbit serum) showed precipitation bands against till the following dilution: AAS-1 - 1/64, AAS-2 - 1/128 and ANS 1/124. Both AAS were able to block the in vitro lymphocytotoxity of goat antilymphocytic serum till dilution of 1:2 while ANS did not. The hearts from Wistar rats (donors) were transplanted in Holtzman rats. The transplanted rats were divide in groups: C1 - 11 animals (control that received no serum); C2 - 5 animals (control that received 1ml of goat normal serum); A- 19 animals - A1 with 5 rats injected intravenously in the day of surgery with 0.5ml of AAS-1, A2 with 7 rats injected with 1ml of AAS-1 only in the of surgery, and A3 with 7 rats that received 1ml of AAS-1 in days 0, 1 and 2 postoperatively; and group B with 19 rats (B1, B2 and B3) treated as group A except with the AAS-2 serum. RESULTS: Mean heart survival in groups C1 and C2 was respectively 11.9 and 14.6 days Survival range in the subgroups A1 and A2 were respectively 9 to 230 days and 23 to 230 days. In subgroup A3 heart survival was prolonged till 29 to 190 days in 5 animals. In group B only 3 animals had prolonged (120, 130 and 129 days) heart survival in comparison with the control groups. CONCLUSION: Anti-antilymphocytic serum against donor antigen is able to suppress rejection of cardiac allograft in rats.

INTRODUÇÃO: A rejeição imunológica é uma das principais causas da perda de órgãos transplantados. A tentativa do controle da reação imunológica é clinicamente feita através da imunossupressão inespecífica e experimentalmente também por bloqueio específico. O alotransplante cardíaco em ratos pela técnica de ONO,K é um bom método para avaliação clínica da rejeição e de estudos voltados para o controle da rejeição. Objetivo : estudar o efeito de um anti-antisoro linfocitário, anti-linfócitos do doador sobre a rejeição do alotransplante cardíaco de ratos Wistar para ratos Holtzman. MÉTODOS: o soro anti-linfocitário (SAL) foi obtido através da imunização de coelhos com linfócitos obtidos de gânglios linfáticos da cadeia mesentérica de ratos Wistar, em solução de Tyrode, contendo 3x10(9) células/ ml. A inoculação de 3 coelhos foi feita com 1 ml da suspensão celular e 1 ml de adjuvante completo de Freund. Duas semanas após a primeira inoculação fez-se 4 doses semanais de reforço. Os coelhos foram sangrados na 5ª semana, quando então foram separados os soros. A titulação dos soros foi realizada pelo teste de citotoxicidade, sendo verificado que ambos apresentaram título de 1:1024. A dosagem de proteínas mostrou albumina com 3,1 e 2,7 g% e globulinas com 3,5 e 2,9 g%, sendo o normal 3,7 e 2,2 g% respectivamente. Os dois SAL foram misturados. Duas cabras foram inoculados, com 3 ml da mistura desses SAL, associados a 2 ml de adjuvante de Freund. As doses de reforço com 5 ml do SAL foram iniciadas 2 semanas após. A cabra A recebeu 8 doses (1,4 g de globulinas). A cabra B recebeu 4 doses de reforço (0,7 g de globulinas). Uma semana após a última inoculação retirou-se 125 ml de sangue de cada cabra, fazendo a separação dos anti-soro anti-SAL (ASAL). Uma terceira cabra C foi imunizada com soro normal de coelho. A determinação de precipitinas foi feita pelo método de OUCHTERLONY. O ASAL A teve título de 1:64 e B e C título de 1:128. Os ASAL A e B foram capazes de bloquear "in vitro" a atividade citotóxica do SAL até a diluição de 1:2 do SAL. O soro de cabra anti-soro normal de coelho (SCANC) não foi capaz de bloquear a citotoxicidade do SAL. Os animais submetidos a transplante cardíaco foram divididos em 2 grupos controles um normal com 10 ratos (C1) e outro (C2) com 5 ratos que recebeu 1,0 ml endovenoso de SCANC. O grupo de ratos testes A foi composto por 19 ratos distribuídos em 3 subgrupos. Subgrupo A1 com 5 ratos recebeu 0,5 ml do ASAL A, via endovenosa, logo após a cirurgia,o subgrupo A2 com 7 ratos recebeu 1.0 ml do ASAL A nas mesmas condições e o subgrupo A3 também com 7 ratos recebeu 1,0 ml no dia da cirurgia e 1,0 ml nos outros 2 dias consecutivos. O grupo de ratos testes B que recebeu o ASAL B foi igual ao grupo A. A avaliação dos corações transplantados foi diária através da palpação abdominal. O tempo máximo de seguimento foi de 243 dias. Os corações considerados rejeitados foram retirados e feito estudos histológicos. RESULTADOS: o período de rejeição dos grupos foi : controles C1 e C2 foram 11,9 e 14,6 dias, respectivamente; no subgrupo A1 apenas um rato teve sobrevida cardíaca significante (153 dias), nos demais ela variou de 9 a 15 dias; no subgrupo A2 a sobrevida do coração foi significante e variou de 23 a 230 dias; no subgrupo A3 apenas 5 corações tiveram sobrevida significante que variou de 29 a 190 dias. A sobrevida dos corações transplantados do grupo B foi significante para um animal de cada subgrupo (120,132 e 129 dias). Os corações com sobrevida longa foram retirados batendo. Os demais corações foram rejeitados dentro do período de variação dos grupos controles. CONCLUSÕES: O soro de cabra anti-soro anti-linfócitos do doador, com maior período de imunização, foi capaz de bloquear a resposta imune de rejeição dos corações transplantados nas doses de 1,0 e 3,0 ml. Os ratos que não promoveram a rejeição aguda dos corações transplantados não apresentaram anticorpos citotóxicos circulantes. O fator causador do bloqueio parace não estar vinculado aos bloqueios de citotoxicidade "in vitro" e do teor de precepitinas do SAL.

Ação do soro de cabra anti-soro de coelho imunizado ou não com células linfóides do doador sobre o alotransplante cardíaco em ratos: immunosupression of goat antiserum against rabbit serum immunized or not with donor lymphoid cells

OBJECTIVE: To study the immunosupression efficacy an specific anti-antilymphocytic serum prepared in goats in a model of cardiac allografts in rats. METHODS: Three rabbits were immunized with lymphoid cells obtained from mesenteric lymphatic nodes of Wistar rats. Each one received subcutaneously 3x10(9) cells mixed with Freund's adjuvant. After 2 weeks, they were injected with the same amount of cells at weekly intervals for 4 additional times. In the 5th week they were bled and their serum were mixed. This serum, which had a cytotoxic titer of 1:1024, was used to immunize 2 goats that gave rise to the anti-antilymphocytic serum (AAS-1 and AAS-2). As control we immunized 1 additional goat with normal rabbit serum (ANS). The gel diffusion technique (AAS x rabbit serum) showed precipitation bands against till the following dilution: AAS-1 - 1/64, AAS-2 - 1/128 and ANS 1/124. Both AAS were able to block the in vitro lymphocytotoxity of goat antilymphocytic serum till dilution of 1:2 while ANS did not. The hearts from Wistar rats (donors) were transplanted in Holtzman rats. The transplanted rats were divide in groups: C1 - 11 animals (control that received no serum); C2 - 5 animals (control that received 1ml of goat normal serum); A- 19 animals - A1 with 5 rats injected intravenously in the day of surgery with 0.5ml of AAS-1, A2 with 7 rats injected with 1ml of AAS-1 only in the of surgery, and A3 with 7 rats that received 1ml of AAS-1 in days 0, 1 and 2 postoperatively; and group B with 19 rats (B1, B2 and B3) treated as group A except with the AAS-2 serum. RESULTS: Mean heart survival in groups C1 and C2 was respectively 11.9 and 14.6 days Survival range in the subgroups A1 and A2 were respectively 9 to 230 days and 23 to 230 days. In subgroup A3 heart survival was prolonged till 29 to 190 days in 5 animals. In group B only 3 animals had prolonged (120, 130 and 129 days) heart survival in comparison with the control groups. CONCLUSION: Anti-antilymphocytic serum against donor antigen is able to suppress rejection of cardiac allograft in rats.

INTRODUÇÃO: A rejeição imunológica é uma das principais causas da perda de órgãos transplantados. A tentativa do controle da reação imunológica é clinicamente feita através da imunossupressão inespecífica e experimentalmente também por bloqueio específico. O alotransplante cardíaco em ratos pela técnica de ONO,K é um bom método para avaliação clínica da rejeição e de estudos voltados para o controle da rejeição. Objetivo : estudar o efeito de um anti-antisoro linfocitário, anti-linfócitos do doador sobre a rejeição do alotransplante cardíaco de ratos Wistar para ratos Holtzman. MÉTODOS: o soro anti-linfocitário (SAL) foi obtido através da imunização de coelhos com linfócitos obtidos de gânglios linfáticos da cadeia mesentérica de ratos Wistar, em solução de Tyrode, contendo 3x10(9) células/ ml. A inoculação de 3 coelhos foi feita com 1 ml da suspensão celular e 1 ml de adjuvante completo de Freund. Duas semanas após a primeira inoculação fez-se 4 doses semanais de reforço. Os coelhos foram sangrados na 5ª semana, quando então foram separados os soros. A titulação dos soros foi realizada pelo teste de citotoxicidade, sendo verificado que ambos apresentaram título de 1:1024. A dosagem de proteínas mostrou albumina com 3,1 e 2,7 g% e globulinas com 3,5 e 2,9 g%, sendo o normal 3,7 e 2,2 g% respectivamente. Os dois SAL foram misturados. Duas cabras foram inoculados, com 3 ml da mistura desses SAL, associados a 2 ml de adjuvante de Freund. As doses de reforço com 5 ml do SAL foram iniciadas 2 semanas após. A cabra A recebeu 8 doses (1,4 g de globulinas). A cabra B recebeu 4 doses de reforço (0,7 g de globulinas). Uma semana após a última inoculação retirou-se 125 ml de sangue de cada cabra, fazendo a separação dos anti-soro anti-SAL (ASAL). Uma terceira cabra C foi imunizada com soro normal de coelho. A determinação de precipitinas foi feita pelo método de OUCHTERLONY. O ASAL A teve título de 1:64 e B e C título de 1:128. Os ASAL A e B foram capazes de bloquear "in vitro" a atividade citotóxica do SAL até a diluição de 1:2 do SAL. O soro de cabra anti-soro normal de coelho (SCANC) não foi capaz de bloquear a citotoxicidade do SAL. Os animais submetidos a transplante cardíaco foram divididos em 2 grupos controles um normal com 10 ratos (C1) e outro (C2) com 5 ratos que recebeu 1,0 ml endovenoso de SCANC. O grupo de ratos testes A foi composto por 19 ratos distribuídos em 3 subgrupos. Subgrupo A1 com 5 ratos recebeu 0,5 ml do ASAL A, via endovenosa, logo após a cirurgia,o subgrupo A2 com 7 ratos recebeu 1.0 ml do ASAL A nas mesmas condições e o subgrupo A3 também com 7 ratos recebeu 1,0 ml no dia da cirurgia e 1,0 ml nos outros 2 dias consecutivos. O grupo de ratos testes B que recebeu o ASAL B foi igual ao grupo A. A avaliação dos corações transplantados foi diária através da palpação abdominal. O tempo máximo de seguimento foi de 243 dias. Os corações considerados rejeitados foram retirados e feito estudos histológicos. RESULTADOS: o período de rejeição dos grupos foi : controles C1 e C2 foram 11,9 e 14,6 dias, respectivamente; no subgrupo A1 apenas um rato teve sobrevida cardíaca significante (153 dias), nos demais ela variou de 9 a 15 dias; no subgrupo A2 a sobrevida do coração foi significante e variou de 23 a 230 dias; no subgrupo A3 apenas 5 corações tiveram sobrevida significante que variou de 29 a 190 dias. A sobrevida dos corações transplantados do grupo B foi significante para um animal de cada subgrupo (120,132 e 129 dias). Os corações com sobrevida longa foram retirados batendo. Os demais corações foram rejeitados dentro do período de variação dos grupos controles. CONCLUSÕES: O soro de cabra anti-soro anti-linfócitos do doador, com maior período de imunização, foi capaz de bloquear a resposta imune de rejeição dos corações transplantados nas doses de 1,0 e 3,0 ml. Os ratos que não promoveram a rejeição aguda dos corações transplantados não apresentaram anticorpos citotóxicos circulantes. O fator causador do bloqueio parace não estar vinculado aos bloqueios de citotoxicidade "in vitro" e do teor de precepitinas do SAL.

A enxertia na produção de mudas de hortaliças

The grafting of vegetable crops aims to introduce resistance for Solanaceous and Cucurbits plants. It is a way of overcoming soil-born diseases or introducing abilities related to a certain soil-climatic condition (cold or drought resistance, wet endurance and improvement of nutrients absorption ability). In this paper, the state of art of vegetable crops grafting is presented foccusing on aspects concerning to plants compatibility and percentage of grafting taking. Special attention is paid to the description of grafting methods and its suitability to the different species of vegetable crops.

A enxertia, na olericultura, é uma técnica empregada para plantas das Famílias Solanaceae e Cucurbitaceae e objetiva conferir resistência às mudas. Desta forma, possibilita o cultivo em áreas contaminadas por patógenos de solo ou confere habilidades em relação a determinadas condições edafo-climáticas (resistência à baixa temperatura, à seca, ao excesso de umidade e aumento da capacidade de absorção de nutrientes). O presente trabalho apresenta o estado atual do conhecimento sobre a enxertia de hortaliças, enfocando aspectos relacionados à compatibilidade entre plantas e à cicatrização do enxerto. Dá-se especial atenção à descrição dos métodos de enxertia e a sua adequação às diferentes espécies de hortaliças.

Graft versus host disease in a rat small bowel transplant model after T-cell depleted donor specific bone marrow infusion

Low cytoreductive regimen of irradiation associated to unmodified bone marrow infusion (UBM) does not prevent the occurrence of graft versus host disease (GVHD) after transplant. PURPOSE: In this study we evaluated the potential advantages of a long-term immunossupression and T-cell depleted bone marrow infusion (TCDBMI) in preventing the occurrence of GVHD after small bowel transplantation (SBTx). METHODS: Heterotopic SBTX was performed with Lewis rats as recipients and DA as donors and distributed into 5 groups according to the irradiation, duration of immunossupression and the use of UBM or TCDBMI: G1 (n=6), without irradiation and G2 (n=9), G3 (n=4), G4 (n=5) and G5 (n=6) was given 250 rd of irradiation. Groups 1,2,4 and G3 and 5 were infused with 100 x 10(6) UBM and TCDBM respectively. Animals in G1, 2, 3 were immunossupressed with 1mg/ FK506/Kg/IM for 5 days and G4 and G5 for 15 days. Anti CD3 monoclonal antibodies and immunomagnetic beads were used for T-cell depletion.Animals were examined for rejection, GVHD, chimerism characterization and ileal and skin biopsies. RESULTS: Minimal to mild rejection was observed in all groups; however, GVHD were present only in irradiated groups. Long-term immunossupression changed the severity of GVHD in G4 and G5. Rejection was the cause of death in G1 while GVHD in G2, 3, 4 and 5, not avoided by the use of TCDBMI. Total chimerism and T-cell chimerism was statistically higher in irradiated groups when compared to G1. CONCLUSION: Extended immunossupression associated to low dose of irradiation decrease the severity of GVHD, not avoided by the use of TCDBMI.

Baixas doses de irradiação associadas à infusão de células da medula óssea não previnem a ocorrência da reação do enxerto versus hospedeiro após o transplante intestinal. OBJETIVO: Neste estudo foi avaliado a potencial vantagem em estender o regime imunossupressor associado a infusão de células de medula óssea do doador depletadas de células T na prevenção da reação do enxerto versus hospedeiro após o transplante intestinal. MÉTODOS: Transplante heterotópico de intestino delgado foi realizado em ratos Lewis como receptores e DA como doadores, distribuídos em cinco grupos de acordo com a duração da imunossupressão, irradiação e do uso de medula óssea normal ou depletada: G1 (n=6), sem irradiação e G2 (n=9), G3 (n=4), G4 (n=5) e G5 (n=6) foram irradiados com 250 rd. Grupos1, 2, 4 e G3 e 5 foram infundidos com 100 x 10(6) células da medula normal e depletada respectivamente. Animais no G1,2,3 foram imunossuprimidos com 1mg/kg/FK506/ IM por cinco dias e G4 e cinco por 15 dias. Anticorpos monoclonais contra células CD3 e colunas magnéticas foram utilizadas para a depleção da medula óssea. Os animais foram examinados para a presença de rejeição, reação do enxerto versus hospedeiro, chimerismo e biópsias intestinais e da pele. RESULTADOS: Rejeição mínima foi observada em todos os grupos; entretanto, a reação do enxerto versus hospedeiro somente nos animais irradiados. Extensão da imunossupressão alterou a gravidade da reação nos animais dos G4 e 5. Rejeição foi a causa mortis no G1 e a reação do enxerto versus hospedeiro nos Grupos 2,3,4 e 5, não controlada com a infusão de medula óssea depletada. O chimerismo total e de células T do doador foi estatisticamente maior nos grupos irradiados em comparação ao G1. CONCLUSÃO: A extensão do regime de imunossupressão associado a baixas doses de irradiação diminui a gravidade da reação do enxerto versus hospedeiro, não abolida pelo uso de medula óssea depletada.