Preliminary evaluation of the use of bacteria isolated from the digestive tract of shrimp Litopenaeus vannamei as a source to accelerate the process of formation and development of bioflocs

This study aims at investigating to follow the formation and development of biofloc aggregates in a system with the introduction of an in vitro selected bacterial consortium (Bacillus thuringiensis, Bacillus sp., Staphylococcus cohnii) in order to induce fast formation of biofloc and to compare it to the development of spontaneous formation biofloc. Two experimental groups were evaluated for biofloc formation, SFT and IFT. The first refers to spontaneous (conventional) formation of the flocs and the second to induced formation (IFT), achieved through the consortium of potentially inducing bacteria. Both treatments presented a constant increase of bioflocs, however, in the IFT treatment, the microbial aggregates were larger and more uniform. By the end of the experiment, we verified that the aggregates formed in the IFT showed higher volume and lower sedimentation rate in comparison to the spontaneously formed ones. The results show that domestication in microbial communities is efficient as related to bioflocs, reducing instability during its formation and development.(AU)

Preliminary evaluation of the use of bacteria isolated from the digestive tract of shrimp Litopenaeus vannamei as a source to accelerate the process of formation and development of bioflocs

This study aims at investigating to follow the formation and development of biofloc aggregates in a system with the introduction of an in vitro selected bacterial consortium (Bacillus thuringiensis, Bacillus sp., Staphylococcus cohnii) in order to induce fast formation of biofloc and to compare it to the development of spontaneous formation biofloc. Two experimental groups were evaluated for biofloc formation, SFT and IFT. The first refers to spontaneous (conventional) formation of the flocs and the second to induced formation (IFT), achieved through the consortium of potentially inducing bacteria. Both treatments presented a constant increase of bioflocs, however, in the IFT treatment, the microbial aggregates were larger and more uniform. By the end of the experiment, we verified that the aggregates formed in the IFT showed higher volume and lower sedimentation rate in comparison to the spontaneously formed ones. The results show that domestication in microbial communities is efficient as related to bioflocs, reducing instability during its formation and development.

In vitro antimicrobial activity of carvacrol against shrimp pathogens and its use as feed additive for the pacific white shrimp / Atividade antimocrobiana in vitro do carbacrol contra patógenos de camarões e seu uso como aditivo alimentar na dieta do camarão-branco-do-pacífico

This study aimed to evaluate the in vitro effect of the phenolic compound carvacrol on different microorganisms of importance in shrimp farming, and it's in vivo effect on zootechnical, immunological and microbiological performance, and resistance of Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus. In particular, the antimicrobial activity of carvacrol was evaluated in vitro by analysis of the minimum inhibitory concentration (MIC) and by agar diffusion with Gram-negative and Gram-positive bacteria. The in vivo experiment was conducted using different concentrations of carvacrol (1, 3, 4 and 6 mg mL-¹) added to shrimp feed, together with a control diet without carvacrol. After four weeks, zootechnical, immunological and microbiological parameters and resistance of animals challenged with V. parahaemolyticus were evaluated. The MIC of carvacrol was 0.078 mg mL-¹ for Vibrio alginolyticus and Vibrio harveyi, while for the other bacteria, it was 0.156 mg mL-¹ of carvacrol. The greatest halos of inhibition were observed in V. parahaemolyticus and V. harveyi with significant differences demonstrated for the other microorganisms, except Escherichia coli. The in vivo results showed no significant differences among treatments. In conclusion, the antimicrobial activity of carvacrol was confirmed with Gram-negative and Gram-positive bacteria, and it is suggested that its antimicrobial potential is more effective against Vibrio spp. However, the concentrations of carvacrol used in vivo did not affect the parameters evaluated.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito in vitro do carvacrol contra diferentes microrganismos de importância na carcinicultura e o seu efeito in vivo no desempenho zootécnico, imunológico, microbiológico e na resistência de Litopenaeus vannamei desafiados com Vibrio parahaemolyticus. A atividade antimicrobiana do carvacrol foi realizada in vitro pela análise da concentração inibitória mínima (CIM) e por difusão em ágar, com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Para o experimento in vivo foram adicionadas diferentes concentrações do carvacrol (1, 3, 4 e 6 mg mL-¹) na alimentação dos camarões e uma dieta controle. Após quatro semanas, foram avaliados parâmetros zootécnicos, imunológicos, microbiológicos e a resistência dos animais desafiados com V. parahaemolyticus. A CIM do carvacrol para Vibrio alginolyticuse Vibrio harveyi foi de 0,078 mg mL-¹, enquanto nas demais bactérias foi de 0,156 mg mL-¹ de carvacrol. Os maiores halos de inibição foram observados em V. parahaemolyticus e V. harveyie demonstraram diferenças significativas em relação aos demais microrganismos, exceto Escherichia coli. Os resultados in vivo não demonstraram diferenças significativas entre os tratamentos. Em conclusão, a atividade antimicrobiana do carvacrol foi confirmada com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e sugere-se que seu potencial antimicrobiano seja mais eficaz contra Vibrio spp. No entanto, as concentrações de carvacrol utilizadas in vivo não afetaram os parâmetros avaliados.

Performance of pacific white shrimp fed probiotics Lactobacillus plantarum and Bacillus spp. in a biofloc system / Desempenho do camarão branco pacífico alimentado com probiótico Lactobacillus plantarum e Bacillus spp. em sistema bioflocos

The present study evaluated the use of the indigenous probiotic Lactobacillus plantarum and commercial probiotic containing Bacillus spp. in the culture of Litopenaeus vannamei in a biofloc system. Shrimp were fed four diets: L. plantarum, Bacillus spp., L. plantarum + Bacillus spp. and feed with no additives. Growth performance, water quality variables, microbiological counting of water and digestive tract of shrimp were determined. The control group and L. plantarum treatment showed better growth performance. The highest feed conversion ratio (FCR) and the lowest survival were obtained in the L. plantarum + Bacillus spp. treatment, which had significantly higher nitrite values. Vibrio spp. counts in the water were lower in the L. plantarum and L. plantarum + Bacillus spp. treatments and were lower in the intestinal tract in the L. plantarum treatment. Lactic acid bacteria (LAB) was higher in the L. plantarum treatment in the water and digestive tract. The count of total heterotrophic bacteria (THB) deferred only among Bacillus spp. and L. plantarum + Bacillus spp. treatment, being higher in the latter group. In Bacillus spp. treatment, no presence of LAB was detected in the water or intestinal tract. We conclude that the use of L. plantarum combined with Bacillus spp. negatively affected survival, FCR and water quality, but that the use of L. plantarum alone reduced the presence of Vibrio spp., even though it did not change the growth performance of L. vannamei.

O presente estudo avaliou o uso do probiótico endógeno Lactobacillus plantarum e do probiótico comercial contendo Bacillus spp. no cultivo de Litopenaeus vannamei em sistema de bioflocos. Camarões foram alimentados com quatro dietas: L. plantarum, Bacillus spp., L. plantarum + Bacillus spp. e ração sem aditivos. Foram avaliados o crescimento, a qualidade da água e contagem microbiológica na água e intestino dos camarões. O controle e o tratamento com L. plantarum apresentaram melhor desempenho de crescimento. O maior fator de conversão alimentar (FCA) e a menor sobrevivência foram obtidas no tratamento L. plantarum + Bacillus spp., apresentando valores de nitrito significativamente elevados. As contagens de Vibrio spp na água foram menores nos tratamentos L. plantarum e L. plantarum + Bacillus spp. e igualmente foram menores no intestino no tratamento com L. plantarum. As contagens de bactérias ácido lácticas (BAL) foram maiores no tratamento L. plantarum na água e no trato intestinal. A contagem de bactérias heterotróficas totais (BHT) diferiu apenas entre os tratamentos Bacillus spp. e L. plantarum + Bacillus spp., sendo maior no último grupo. No tratamento Bacillus spp. não foi detectada presença de BAL na água nem no trato intestinal. Concluímos que o uso de L. plantarum combinado com Bacillus spp. afetou negativamente a sobrevivência, o FCA e a qualidade da água, contudo o uso de L. plantarum isoladamente reduziu a presença de Vibrio spp., embora não tenha alterado o desempenho de crescimento de L. vannamei.

Performance of pacific white shrimp fed probiotics Lactobacillus plantarum and Bacillus spp. in a biofloc system / Desempenho do camarão branco pacífico alimentado com probiótico Lactobacillus plantarum e Bacillus spp. em sistema bioflocos

The present study evaluated the use of the indigenous probiotic Lactobacillus plantarum and commercial probiotic containing Bacillus spp. in the culture of Litopenaeus vannamei in a biofloc system. Shrimp were fed four diets: L. plantarum, Bacillus spp., L. plantarum + Bacillus spp. and feed with no additives. Growth performance, water quality variables, microbiological counting of water and digestive tract of shrimp were determined. The control group and L. plantarum treatment showed better growth performance. The highest feed conversion ratio (FCR) and the lowest survival were obtained in the L. plantarum + Bacillus spp. treatment, which had significantly higher nitrite values. Vibrio spp. counts in the water were lower in the L. plantarum and L. plantarum + Bacillus spp. treatments and were lower in the intestinal tract in the L. plantarum treatment. Lactic acid bacteria (LAB) was higher in the L. plantarum treatment in the water and digestive tract. The count of total heterotrophic bacteria (THB) deferred only among Bacillus spp. and L. plantarum + Bacillus spp. treatment, being higher in the latter group. In Bacillus spp. treatment, no presence of LAB was detected in the water or intestinal tract. We conclude that the use of L. plantarum combined with Bacillus spp. negatively affected survival, FCR and water quality, but that the use of L. plantarum alone reduced the presence of Vibrio spp., even though it did not change the growth performance of L. vannamei.(AU)

O presente estudo avaliou o uso do probiótico endógeno Lactobacillus plantarum e do probiótico comercial contendo Bacillus spp. no cultivo de Litopenaeus vannamei em sistema de bioflocos. Camarões foram alimentados com quatro dietas: L. plantarum, Bacillus spp., L. plantarum + Bacillus spp. e ração sem aditivos. Foram avaliados o crescimento, a qualidade da água e contagem microbiológica na água e intestino dos camarões. O controle e o tratamento com L. plantarum apresentaram melhor desempenho de crescimento. O maior fator de conversão alimentar (FCA) e a menor sobrevivência foram obtidas no tratamento L. plantarum + Bacillus spp., apresentando valores de nitrito significativamente elevados. As contagens de Vibrio spp na água foram menores nos tratamentos L. plantarum e L. plantarum + Bacillus spp. e igualmente foram menores no intestino no tratamento com L. plantarum. As contagens de bactérias ácido lácticas (BAL) foram maiores no tratamento L. plantarum na água e no trato intestinal. A contagem de bactérias heterotróficas totais (BHT) diferiu apenas entre os tratamentos Bacillus spp. e L. plantarum + Bacillus spp., sendo maior no último grupo. No tratamento Bacillus spp. não foi detectada presença de BAL na água nem no trato intestinal. Concluímos que o uso de L. plantarum combinado com Bacillus spp. afetou negativamente a sobrevivência, o FCA e a qualidade da água, contudo o uso de L. plantarum isoladamente reduziu a presença de Vibrio spp., embora não tenha alterado o desempenho de crescimento de L. vannamei.(AU)

In vitro antimicrobial activity of carvacrol against shrimp pathogens and its use as feed additive for the pacific white shrimp / Atividade antimocrobiana in vitro do carbacrol contra patógenos de camarões e seu uso como aditivo alimentar na dieta do camarão-branco-do-pacífico

This study aimed to evaluate the in vitro effect of the phenolic compound carvacrol on different microorganisms of importance in shrimp farming, and it's in vivo effect on zootechnical, immunological and microbiological performance, and resistance of Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus. In particular, the antimicrobial activity of carvacrol was evaluated in vitro by analysis of the minimum inhibitory concentration (MIC) and by agar diffusion with Gram-negative and Gram-positive bacteria. The in vivo experiment was conducted using different concentrations of carvacrol (1, 3, 4 and 6 mg mL-¹) added to shrimp feed, together with a control diet without carvacrol. After four weeks, zootechnical, immunological and microbiological parameters and resistance of animals challenged with V. parahaemolyticus were evaluated. The MIC of carvacrol was 0.078 mg mL-¹ for Vibrio alginolyticus and Vibrio harveyi, while for the other bacteria, it was 0.156 mg mL-¹ of carvacrol. The greatest halos of inhibition were observed in V. parahaemolyticus and V. harveyi with significant differences demonstrated for the other microorganisms, except Escherichia coli. The in vivo results showed no significant differences among treatments. In conclusion, the antimicrobial activity of carvacrol was confirmed with Gram-negative and Gram-positive bacteria, and it is suggested that its antimicrobial potential is more effective against Vibrio spp. However, the concentrations of carvacrol used in vivo did not affect the parameters evaluated.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito in vitro do carvacrol contra diferentes microrganismos de importância na carcinicultura e o seu efeito in vivo no desempenho zootécnico, imunológico, microbiológico e na resistência de Litopenaeus vannamei desafiados com Vibrio parahaemolyticus. A atividade antimicrobiana do carvacrol foi realizada in vitro pela análise da concentração inibitória mínima (CIM) e por difusão em ágar, com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Para o experimento in vivo foram adicionadas diferentes concentrações do carvacrol (1, 3, 4 e 6 mg mL-¹) na alimentação dos camarões e uma dieta controle. Após quatro semanas, foram avaliados parâmetros zootécnicos, imunológicos, microbiológicos e a resistência dos animais desafiados com V. parahaemolyticus. A CIM do carvacrol para Vibrio alginolyticuse Vibrio harveyi foi de 0,078 mg mL-¹, enquanto nas demais bactérias foi de 0,156 mg mL-¹ de carvacrol. Os maiores halos de inibição foram observados em V. parahaemolyticus e V. harveyie demonstraram diferenças significativas em relação aos demais microrganismos, exceto Escherichia coli. Os resultados in vivo não demonstraram diferenças significativas entre os tratamentos. Em conclusão, a atividade antimicrobiana do carvacrol foi confirmada com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e sugere-se que seu potencial antimicrobiano seja mais eficaz contra Vibrio spp. No entanto, as concentrações de carvacrol utilizadas in vivo não afetaram os parâmetros avaliados.(AU)

Dietary supplementation with probiotic and butyrate in the shrimp nursery in biofloc / Suplementação dietética com probiótico e butirato no berçário do camarão em bioflocos

This study aimed to evaluate the combined and isolated effect of sodium butyrate and the probiotic Lactobacillus plantarum on the performance and midgut microbiological parameters of Litopenaeus vannamei post-larvae reared on biofloc technology, as well as the water quality of the system. Feed additives were added at the concentrations of 200 mL of probiotic (1.0x107 CFU mL-1) and 2.0% of organic salt (w/w) in the diet, as follows: 1) Probiotic; 2) Butyrate; 3) Probiotic+Butyrate; 4) Control. Each treatment was composed of three replicates. Biometric measurements were performed once a week, as well as analysis of water quality. At the end of the experiment, statistical difference was observed in the counts of lactic acid bacteria from the intestinal tract of shrimp fed diets containing probiotic. Therefore, while the addition of probiotic and sodium butyrate had no effect on the productive parameters of shrimp or water quality, the inclusion of the probiotic L. plantarum in the diet did increase the counts of lactic acid bacteria in the intestine of L. vannamei without altering the counts of Vibrio spp. or total heterotrophic bacteria in the intestine.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito conjunto e isolado do sal orgânico butirato de sódio e do probiótico Lactobacillus plantarum para pós-larvas do camarão Litopenaeus vannamei cultivado em tecnologia de bioflocos sobre os parâmetros zootécnicos, microbiológicos e histológicos, além da qualidade da água do sistema. Os aditivos alimentares foram adicionados nas concentrações de 200 mL de probiótico (1,0x107 UFC mL-1) e 2,0% do sal orgânico (p/p) na ração, com o seguinte delineamento: 1) Probiótico; 2) Butirato; 3) Probiótico+Butirato; 4) Controle, e cada tratamento foi composto por três réplicas. Biometrias foram realizadas uma vez por semana e, da mesma forma, foram feitas análises dos parâmetros de qualidade de água das unidades experimentais. Ao final do experimento, os resultados mostraram diferença estatística nas contagens de bactérias ácido lácticas do trato intestinal dos camarões alimentados com as dietas contendo probiótico. Conclui-se que a adição de probiótico e o butirato de sódio não influenciaram nos parâmetros produtivos dos camarões nem os parâmetros de qualidade de água, mas a inclusão do probiótico L. plantarum na dieta aumentou as contagens de bactérias ácido lácticas no intestino do camarão L. vannamei, contudo sem alterar as contagens de Vibrio spp. e bactérias heterotróficas totais no intestino.

Antibacterial and cytotoxicity activity in macroalgae extracts: perspectives for the use against pathogenic bacteria from shrimp farms (Litopenaeus vannamei) / Atividade antibacteriana e citotóxica em extratos de macroalgas: perspectivas de uso contra bactérias patogênicas de ambiente de cultivo de camarões (Litopenaeus vannamei)

Some infections caused by pathogenic microorganisms might shows high prevalence in farmed shrimp environments, compromising production and causing economic losses. Therefore, the search for compounds with antibiotic activity has become intensive, following the record of new antimicrobial-resistant bacteria. The study of those bioactive compounds in marine macroalgae has produced satisfactory results, such as the discovery of antibacterial activity against multiresistant strains. Accordingly, this study aims to research antibiotic activity in macroalgae extracts of Chlorophyta, Phaeophyta and Rhodophyta found in the coast of Ceará and also to evaluate the cytotoxicity activity against bacterial strains (Vibrio sp.) from shrimp farms (Litopenaeus vannamei). The extracts cytotoxicity was also evaluated. The results prove that there was antibacterial activity in ethanolic, acetonic, hexanic and methanolic extracts against bacterial strains of Vibrio with multiple resistance profile as well as displaying low cytotoxicity.

Algumas infecções causadas por micro-organismos patogênicos podem apresentar alta prevalência em ambientes de cultivo de camarões marinhos, comprometendo a produção e causando prejuízos econômicos aos aquicultores. Assim, tem-se tornado intensa a busca por compostos com atividade antibiótica pelo registro cada vez mais frequente de bactérias com perfil de resistência a antimicrobianos. A presença desses compostos com bioatividade em macroalgas marinhas tem revelado resultados satisfatórios, como a descoberta de ação antibacteriana contra cepas multirresistentes. Desta forma, decidiu-se pesquisar as propriedades antibióticas dos extratos de macroalgas das classes Chlorophyta, Phaeophyta e Rhodophyta, coletadas no litoral cearense, bem como avaliar a citotoxicidade destes extratos, frente a cepas bacterianas (Vibrio sp.) isoladas e provenientes de ambientes de cultivo de camarões marinhos (Litopenaeus vannamei). Os resultados comprovaram que houve atividade antibacteriana dos extratos etanólicos, acetônicos, hexânicos e metanólicos contra cepas bacterianas de Vibrio, além de apontar que os extratos de todas as espécies apresentaram baixa citotoxicidade.

Antibacterial and cytotoxicity activity in macroalgae extracts: perspectives for the use against pathogenic bacteria from shrimp farms (Litopenaeus vannamei) / Atividade antibacteriana e citotóxica em extratos de macroalgas: perspectivas de uso contra bactérias patogênicas de ambiente de cultivo de camarões (Litopenaeus vannamei)

Some infections caused by pathogenic microorganisms might shows high prevalence in farmed shrimp environments, compromising production and causing economic losses. Therefore, the search for compounds with antibiotic activity has become intensive, following the record of new antimicrobial-resistant bacteria. The study of those bioactive compounds in marine macroalgae has produced satisfactory results, such as the discovery of antibacterial activity against multiresistant strains. Accordingly, this study aims to research antibiotic activity in macroalgae extracts of Chlorophyta, Phaeophyta and Rhodophyta found in the coast of Ceará and also to evaluate the cytotoxicity activity against bacterial strains (Vibrio sp.) from shrimp farms (Litopenaeus vannamei). The extracts cytotoxicity was also evaluated. The results prove that there was antibacterial activity in ethanolic, acetonic, hexanic and methanolic extracts against bacterial strains of Vibrio with multiple resistance profile as well as displaying low cytotoxicity.(AU)

Algumas infecções causadas por micro-organismos patogênicos podem apresentar alta prevalência em ambientes de cultivo de camarões marinhos, comprometendo a produção e causando prejuízos econômicos aos aquicultores. Assim, tem-se tornado intensa a busca por compostos com atividade antibiótica pelo registro cada vez mais frequente de bactérias com perfil de resistência a antimicrobianos. A presença desses compostos com bioatividade em macroalgas marinhas tem revelado resultados satisfatórios, como a descoberta de ação antibacteriana contra cepas multirresistentes. Desta forma, decidiu-se pesquisar as propriedades antibióticas dos extratos de macroalgas das classes Chlorophyta, Phaeophyta e Rhodophyta, coletadas no litoral cearense, bem como avaliar a citotoxicidade destes extratos, frente a cepas bacterianas (Vibrio sp.) isoladas e provenientes de ambientes de cultivo de camarões marinhos (Litopenaeus vannamei). Os resultados comprovaram que houve atividade antibacteriana dos extratos etanólicos, acetônicos, hexânicos e metanólicos contra cepas bacterianas de Vibrio, além de apontar que os extratos de todas as espécies apresentaram baixa citotoxicidade.(AU)

Biofilm formation by Vibrio parahaemolyticus on different surfaces and its resistance to sodium hypochlorite / Formação de biofilme por Vibrio parahaemolyticus em diferentes superficies e resistência ao hipoclorito de sódio

Vibrio parahaemolyticus is an important pathogen for both fish industry and consumers. It forms biofilm which makes it difficult to eliminate this microorganism using sanitizers. This study aimed to assess biofilm formation on different surfaces and effect of biofilm on resistance to sanitizers. Eight isolates of biofilm-forming V. parahaemolyticus were tested for the ability to form biofilms on a number of surfaces including high density polyethylene, stainless steel, glass, exoskeleton of Farfantepenaeus paulensis (Pink Shrimp), and operculum of Micropogonias furnieri (Whitemouth Croaker). Efficiency of sanitizer sodium hypochlorite against the bacteria was evaluated in the biofilms formed on the surface of the materials used; out the eight strains analyzed four formed biofilm on different surfaces. The present study shows that there are variations between surfaces in terms of biofilm formation, with more than one bacterial strain being able to form biofilm on the surface of the operculum of M. furnieri and on high density polyethylene as well. One isolate formed biofilm on glass, and one isolate formed biofilm on stainless steel. Sanitizers reduced biofilm formation on all surfaces. Based on our findings, we concluded that V. parahaemolyticus isolates have different ability to form biofilm on different surfaces. No isolates formed biofilm on shrimp shells. Results of this study also showed that sodium hypochlorite eat a concentration of 20 parts per million (20ppm) of Cl2, albeit not able to eliminate bacteria reported in biofilms, is still capable of reducing bacterial populations.(AU)

Vibrio parahaemolyticus é uma bactéria patogênica importante tanto para a indústria como para os consumidores de pescados, uma vez que pode formar biofilme, dificultando a sua eliminação por sanitizantes. Este estudo teve como objetivo verificar a formação de biofilme em diferentes superfícies e o efeito do biofilme sobre a resistência a sanitizante. Oito isolados de V. parahaemolyticus formadores de biofilme foram testados quanto à capacidade de formar biofilme em superfícies de polietileno de alta densidade, aço inoxidável, vidro, exoesqueleto de Farfantepenaeus paulensis (Camarão-rosa) e opérculo de Micropogonias furnieri (Corvina). A eficiência do sanitizante hipoclorito de sódio foi avaliada frente às bactérias nos biofilmes formados sobre a superfície dos materiais utilizados. Das oito cepas analisadas, quatro foram consideradas formadoras de biofilme em diferentes superfícies. Os resultados mostraram variação entre as superfícies, sendo que mais de uma cepa formou biofilme na superfície do opérculo de M. furnieri e do polietileno de alta densidade. Um isolado formou biofilme em vidro e um em aço inoxidável. Nenhum isolado formou biofilme na carapaça de camarão. O sanitizante reduziu a formação do biofilme em todas as superfícies. Conclui-se que os isolados de V. parahaemolyticus apresentam distinta capacidade de formar biofilme em diferentes superfícies e que o hipoclorito de sódio na concentração de 20 partes por milhão (20ppm) de Cl2, embora não elimine as bactérias que se encontram em biofilme, reduz a sua população.(AU)

Dietary supplementation with probiotic and butyrate in the shrimp nursery in biofloc / Suplementação dietética com probiótico e butirato no berçário do camarão em bioflocos

This study aimed to evaluate the combined and isolated effect of sodium butyrate and the probiotic Lactobacillus plantarum on the performance and midgut microbiological parameters of Litopenaeus vannamei post-larvae reared on biofloc technology, as well as the water quality of the system. Feed additives were added at the concentrations of 200 mL of probiotic (1.0x107 CFU mL-1) and 2.0% of organic salt (w/w) in the diet, as follows: 1) Probiotic; 2) Butyrate; 3) Probiotic+Butyrate; 4) Control. Each treatment was composed of three replicates. Biometric measurements were performed once a week, as well as analysis of water quality. At the end of the experiment, statistical difference was observed in the counts of lactic acid bacteria from the intestinal tract of shrimp fed diets containing probiotic. Therefore, while the addition of probiotic and sodium butyrate had no effect on the productive parameters of shrimp or water quality, the inclusion of the probiotic L. plantarum in the diet did increase the counts of lactic acid bacteria in the intestine of L. vannamei without altering the counts of Vibrio spp. or total heterotrophic bacteria in the intestine.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito conjunto e isolado do sal orgânico butirato de sódio e do probiótico Lactobacillus plantarum para pós-larvas do camarão Litopenaeus vannamei cultivado em tecnologia de bioflocos sobre os parâmetros zootécnicos, microbiológicos e histológicos, além da qualidade da água do sistema. Os aditivos alimentares foram adicionados nas concentrações de 200 mL de probiótico (1,0x107 UFC mL-1) e 2,0% do sal orgânico (p/p) na ração, com o seguinte delineamento: 1) Probiótico; 2) Butirato; 3) Probiótico+Butirato; 4) Controle, e cada tratamento foi composto por três réplicas. Biometrias foram realizadas uma vez por semana e, da mesma forma, foram feitas análises dos parâmetros de qualidade de água das unidades experimentais. Ao final do experimento, os resultados mostraram diferença estatística nas contagens de bactérias ácido lácticas do trato intestinal dos camarões alimentados com as dietas contendo probiótico. Conclui-se que a adição de probiótico e o butirato de sódio não influenciaram nos parâmetros produtivos dos camarões nem os parâmetros de qualidade de água, mas a inclusão do probiótico L. plantarum na dieta aumentou as contagens de bactérias ácido lácticas no intestino do camarão L. vannamei, contudo sem alterar as contagens de Vibrio spp. e bactérias heterotróficas totais no intestino.(AU)

Formação de biofilme após estresse subletal por Vibrio parahaemolyticus isolados de camarão-rosa (Farfantepenaeus paulensis) / Formation of biofilm after subletal stress by Vibrio parahaemolyticus isolates from pink shrimp (Farfantepenaeus paulensis)

O consumo de frutos do mar, como o camarão-rosa, contaminados com V. parahaemolyticus pode causar gastrenterite aguda. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de camarões provenientes do estuário da Lagoa dos Patos formarem biofilme após exposição a diferentes tipos de estresse subletal. Para obtenção das amostras, foram realizadas 12 coletas de Farfantepenaeus paulensis, durante o período de safra de 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação, tanto antes como após serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal. V. parahaemolyticus foi isolado de 16,66% (2/12) das amostras. Uma das duas cepas isoladas foi capaz de formar biofilme, sendo classificada como fraca formadora de biofilme, a outra foi classificada como não formadora de biofilme. Nenhuma das cepas alterou sua capacidade de formar biofilme quando submetida aos estresses de 4ºC e 20ºC; contudo, com relação aos estresses de 42ºC e pH ácido, cada cepa respondeu de uma maneira diferente.

Consumption of seafood, such as pink shrimp, contaminated by V. parahaemolyticus can cause acute gastroenteritis. The objective this study was to verify the ability of V. parahaemolyticus isolated from shrimp from Lagoa dos Patos estuary to form biofilm after exposure to different types of sublethal stress. To obtain the samples, 12 collections of Farfantepenaeus paulensis were carried out during the 2016 harvest period. The samples were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. The strains were evaluated for biofilm production capacity on microtiter plates, both before and after being submitted to different types of sublethal stress. V. parahaemolyticus was isolated from 16.66% (2/12) of the samples. One of the two isolated strains was able to form biofilm, being classified as weak biofilm-forming; the other one was classified as non-biofilm-forming. None of the strains altered their ability to form biofilm when subjected to the stresses of 4°C and 20°C; however, regarding the stresses of 42°C and pH acid, each strain responded differently.

Formação de biofilme após estresse subletal por Vibrio parahaemolyticus isolados de camarão-rosa (Farfantepenaeus paulensis) / Formation of biofilm after subletal stress by Vibrio parahaemolyticus isolates from pink shrimp (Farfantepenaeus paulensis)

O consumo de frutos do mar, como o camarão-rosa, contaminados com V. parahaemolyticus pode causar gastrenterite aguda. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de camarões provenientes do estuário da Lagoa dos Patos formarem biofilme após exposição a diferentes tipos de estresse subletal. Para obtenção das amostras, foram realizadas 12 coletas de Farfantepenaeus paulensis, durante o período de safra de 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação, tanto antes como após serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal. V. parahaemolyticus foi isolado de 16,66% (2/12) das amostras. Uma das duas cepas isoladas foi capaz de formar biofilme, sendo classificada como fraca formadora de biofilme, a outra foi classificada como não formadora de biofilme. Nenhuma das cepas alterou sua capacidade de formar biofilme quando submetida aos estresses de 4ºC e 20ºC; contudo, com relação aos estresses de 42ºC e pH ácido, cada cepa respondeu de uma maneira diferente.(AU)

Consumption of seafood, such as pink shrimp, contaminated by V. parahaemolyticus can cause acute gastroenteritis. The objective this study was to verify the ability of V. parahaemolyticus isolated from shrimp from Lagoa dos Patos estuary to form biofilm after exposure to different types of sublethal stress. To obtain the samples, 12 collections of Farfantepenaeus paulensis were carried out during the 2016 harvest period. The samples were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. The strains were evaluated for biofilm production capacity on microtiter plates, both before and after being submitted to different types of sublethal stress. V. parahaemolyticus was isolated from 16.66% (2/12) of the samples. One of the two isolated strains was able to form biofilm, being classified as weak biofilm-forming; the other one was classified as non-biofilm-forming. None of the strains altered their ability to form biofilm when subjected to the stresses of 4°C and 20°C; however, regarding the stresses of 42°C and pH acid, each strain responded differently.(AU)

Utilização comparativa de enrofloxacino, probiótico (Lactobacilus plantarum) e propionato de sódio na larvicultura de camarão branco do pacífico / Comparative use of enrofloxacin, probiotic (Lactobacillus plantarum) and sodium propionate in pacific white shrimp larvae / Utilización comparativa de enrofloxacino, probiótico (Lactobacillus plantarum) y propionato de sodio en larvicultura de camarón blanco del pacífico

O objetivo do presente trabalho foi avaliar métodos de controle e tratamento de bacterioses na larvicultura de Litopenaeus vannamei, avaliando o uso contínuo de probiótico e o uso pontual de enrofloxacino 15mg.L-1 e propionato de sódio 0,5 mM.L-1 nos momentos de metamorfose sobre os, parâmetros zootécnicos e microbiológicos (larvas e da água). Foram utilizadas 16 unidades de 60L, povoadas na densidade de 325 náuplios.5L-1, divididos em três tratamentos: enrofloxacino, probiótico, propionato de sódio e controle. O enrofloxacino e o propionato foram ministrados em protozoea 3, misis 3 e pós-larva 4 e o probiótico foi ministrado na ração ao longo de todo o experimento. O probiótico aumentou as contagens de bactérias ácido-láticas em relação aos demais tratamentos na água de cultivo (p=0,00001) e em relação ao enrofloxacino e o proprionato nas larvas (p=0,0048). A água do tratamento com probiótico apresentou menor contagem de Vibrio spp. que o enrofloxacino (p=0,0011) e as larvas tratadas com probiótico apresentaram menor contagem de Vibrio spp. que o propionato (p=0,0158). Contudo, não foi observada diferença nos índices zootécnicos avaliados. Assim, os aditivos na dose utilizada não alteram parâmetros zootécnicos da larvicultura do camarão L. vannamei.

The purpose of this study was to assess control and treatment methods for bacterial diseases in Litopenaeus vannamei, evaluating the continuous use of probiotics and occasional use of 15mg-L-1 enrofloxacin and 0.5-mM.L-1 sodium propionate at the morphological change moments on the performance and microbiological parameters of larvae and water. A total of 16 60-L units were used, stocked with 325 nauplii/5L-1, divided into three treatments and one control. Enrofloxacin and propionate were administered into protozoea 3, misis 3 and 4, and post-larvae 4, while the probiotic was administered in the feed throughout the experiment. The probiotic increased the counts of lactic acid bacteria in relation to the other treatments in the culture water (p = 0.00001) and in relation to enrofloxacin and propionate in larvae (p = 0.0048). The treatment water with probiotic had lower counts of Vibrio ssp. than enrofloxacin (p = 0.0011) and larvae treated with probiotic showed lower counts of Vibrio ssp. that propionate (p = 0.0158). However, no difference was observed in the performance indexes assessed. Thus, it can be concluded that additives in the assessed doses did not influence the performance parameters of L. vannamei.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar métodos de control y tratamiento de enfermedades bacterianas en larvicultura de Litopenaeus vannamei, evaluando el uso continuo de probiótico y el uso puntual de 15 mg.L-1 de enrofloxacino y 0,5 mM.L-1 de propionato de sodio en momentos de metamorfosis sobre los parámetros zootécnicos y microbiológicos (larvas y del agua). Se han utilizado 16 unidades de 60L, pobladas en la densidad de 325 nauplios.5L-1, divididos en tres tratamientos: enrofloxacino, probiótico, propionato de sodio y control. El enrofloxacino y el propionato fueron suministrados en protozoea 3, misis 3 y postlarva 4 y el probiótico suministrado en alimento durante el transcurso del experimento. El probiótico aumentó el contaje de bacterias ácido-lácticas en correlación a los demás tratamientos en agua de cultivo (p=0,0001) y las larvas en relación al enrofloxacino y el propionato en las larvas (p=0,0048). El agua del tratamiento con probiótico presentó menor contaje de Vibrio spp. que el enrofloxacino (p=0,0011) y las larvas tratadas con probiótico presentaron menor contaje de Vibrio spp. que el propionato (p=0,0158). Sin embargo, no se ha observado diferencia en los índices zootécnicos de larvicultura de camarón L. vannamei.

Qualidade microbiológica de camarões comercializados nas praias da cidade de Natal: RN

O camarão é um crustáceo muito apreciado pelos turistas e consumidores de Natal - RN, sendo facilmente encontrado e de diversas maneiras. Uma das formas que comumente encontram-se é pronto para o consumo, comercializado por ambulantes, nas praias. Essa prática, no entanto, desperta cuidados tendo em vista o crescente número de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA) e o fato dessas doenças estarem associadas à manipulação e conservação inadequada dos alimentos. Por ser um produto de alta perecibilidade, o camarão, toma-se mais susceptível às contaminações; o pronto para o consumo, além de passar por todas as etapas de processamento, onde pode ser contaminado, permanece a maior parte do tempo exposto a um dos principais veículos de contaminação, o manipulador e as variações do binômio tempo e temperatura durante a venda. Diante do exposto, na presente pesquisa realizaram-se análises microbiológicas a fim de avaliar a inocuidade desse alimento e a quantificação de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e o isolamento de Salmortella. Foram coletadas e analisadas 25 amostras de 200g cada, em 5 praias da cidade de Natal - RN. Verificou-se a presença de coliformes a 35°C em todas as amostras analisadas; para a contagem de coliformes a 45°C, 60% das amostras da praia I, 100% das amostras das praias II e IV e 80% das praias III e V apresentaram valores superiores aos estabelecidos na RDC n° 12 de 02 de janeiro de 2001; 80% das praias tinham suas amostras contaminadas por Staphylococcus aureus estando, portanto, impróprias para o consumo. Não foi identificada a presença de Salmonella nas amostras analisadas. Esses resultados mostram a necessidade de treinamentos referentes a manipulação segura e práticas higienicossanitárias adequadas com os manipuladores desse tipo de comércio. Destaca-se ainda, a necessidade de uma rigorosa fiscalização por parte dos órgãos competentes.(AU)

Shrimp is a crustacean highly appreciated by tourists and local consumers, being easily found in various preparations. It is common to find ready for consumption, sold by hawkers on beaches. This practice, however, requires care for the growing number of Foodborne Diseases and the fact that these diseases are associated with improper storage and handling of food. Being a highly perishable product, the shrimp ready for consumption becomes more susceptible to contamination; besides, passing through all the processing steps which may be contaminated, remains most of the time exposed to the handler, that is the major vehicle of contamination, variations of the binomial time and temperature during the sale. Given the above, in the present study were carried out microbiological analyzes to assess the safety of that food and quantification of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and isolation of Salmonella. They were collected and analyzed 25 samples of 200 g each, in 5 of the city of the Natal - RN. We verified the presence of coliforms at 35ºC for all samples; for the 45ºC coliform count, 60% of the samples the beach I, 100 % of the samples from the beaches II and IV and 80% of beaches III and V showed higher values than those laid down in RDC N°. 12 of January 2, 2001; 80% of beaches had their samples contaminated by Staphylococcus Aureus therefore unfit for consumption. The presence of salmonella was not identified in samples. These results show the need for training regarding safe handling and sanitary hygienic practices appropriate to the handlers of such trade. It also highlights the need for close monitoring by the authorities.(AU)

Propriedades físico-químicas, sensoriais e bacteriológicas de camarões (Litopenaeus brasiliensis) irradiados e armazenados sob refrigeração / Physical, chemical, sensorial and bacterial properties of irradiated shrimp (Litopenaeus brasiliensis) stored under refrigeration

A irradiação de alimentos é uma opção tecnológica para minimizar problemas de perdas de alimentos, pois reduz asalterações provenientes da atividade bacteriana, estendendo a validade do produto. Neste estudo foram irradiados camarões(Litopenaeus brasiliensis) com doses de 1,5 e 2,5 kGy, após 30 dias de armazenamento sob refrigeração (2°C ± 2°C), como objetivo de avaliar os efeitos da irradiação sobre a validade comercial de camarões através de parâmetros físico-químicos,microbiológicos e sensoriais. Foram avaliados pH, bases voláteis totais (BVT), contagem de bactérias heterotróficas aeróbiasmesófilas (BHAM) e heterotróficas aeróbias psicrófilas (BHAP) e teste de aceitação sensorial. Os valores de pH não variaramentre as amostras controle e as amostras irradiadas apresentando média de 7,08 ± 0,21 durante os 30 dias de armazenamento.A produção de BVT nas amostras controle extrapolou o limite aceitável para o consumo no 15o dia de armazenamentoenquanto nas amostras irradiadas com 2,5 kGy, este limite não foi alcançado em 28 dias de armazenamento, demonstrandoo efeito positivo da utilização da irradiação. Na análise sensorial, não ocorreu diferença significativa (p> 0,01) na aceitação,quanto aos atributos de sabor, aparência, aroma e impressão global entre as amostras.

Food irradiation is currently regarded as a technological option to mitigate food losses due to its potential in reducing microbiological load and its associated spoilage effects, consequently extending the shelf life of many products. Samples of shrimp (Litopenaeus brasiliensis) have been exposed to gamma doses of 0, 1.5 and 2.5 kGy and monitored changes in sensorial characteristics (30 judges), pH and total volatile bases (TVB) levels. All samples were kept at 2°C ± 2°C through the experiments. No significant change in pH has been observed during the experiments regardless of the gamma dose applied. There was statistical difference between the non-irradiated samples and those irradiated with 2.5 kGy (p 0.01), though no significant difference has been found between the non-irradiated samples and those irradiated with 1.5 kGy nor between the samples irradiated with 1.5 kGy and those irradiated with 2.5 kGy. Based on the upper commercial limit for NB, non-irradiated samples achieved the limit in 15 days while the samples irradiated with 2.5 kGy didnt achieve the limit in 28 days. In sensorial analyses, there was no significant difference (p> 0.01) in the acceptance, according to the attributes flavor, appearance, aroma and global impression among the samples.

Análise microbiológica e determinação de pH de amostras de espécie Litopenaeus vannamei (camarão cinza) comercializado na região de Santos Amaro, São Paulo, SP / Microbiological analysis and pH determination of samples of Litopenaeus vannamei (gray shrimp) marketed in the region of Santos Amaro, São Paulo, SP

Atualmente os consumidores estão cada vez mais exigentes quanto à qualidade dos alimentos e os produtos oriundos da atividade pesqueira não estão isentos destas exigências. Portanto, para permanecer no mercado os mesmos necessitam apresentar características de qualidade que satisfaçam os consumidores. Existem diversos agentes que podem contaminar os produtos da atividade pesqueira, portanto são necessárias condutas de processamento que garantam a qualidade do alimento até o consumidor final, assegurando um alimento livre de contaminações. Dentre os agentes que podem vir a contaminar os alimentos, estão a Salmonella spp. Staphvlococcus aureus e os coliformes totais e termotolerantes. (AU)

Currently consumers are increasingly critical about quality of food, and products from fishing activity are not exempt [rom these requirements. Therefore, to remain in market these products need to show quality characteristics that satisfy consumers. There are several agents that can contaminate the products of fishing activity, so it is necessary to employ conducts of processing to guarantee food quality to lhe consumer ensuring a free contamination food. Among the agents that may contaminate food, are Salmonella spp, Staphylococcus aureus, total coliforms and thermotolerant coliforms. (AU)

Avaliação microbiológica do camarão cozido, comercializado a granel por ambulantes da praia do futuro, em Fortaleza, CE / Microbiological evaluation of cooked shrimp, commercialized in bulk by ambulant the beach of the future, in Fortaleza, CE

O brasileiro tem como uma de suas diversões frequentar as praias, praticandoesportes, consumindo bebidas e alimentos, estes quase sempre inadequadamentepreparados, podendo sofrer como consequência agravos gastrintestinais,de maior ou menor gravidade, na dependência do estado de saúde do ingestor.Os alimentos comercializados nas ruas, especificamente o camarão cozido,são potenciais veículos e fontes de doenças e substâncias tóxicas. Objetivou-senesta pesquisa avaliar a qualidade microbiológica desse produto, comercializadoa granel por ambulantes, na Praia do Futuro, em Fortaleza/CE. Foramcoletadas 17 amostras, durante os meses de julho e agosto de 2007. O camarãofoi amostrado, utilizando-se os próprios utensílios do ambulante, sendo acondicionado em sacos plásticos deprimeiro uso e mantido em isoporcontendo gelo comercial e assimencaminhado ao laboratório. Paralelamente,foram realizadas entrevistascom os ambulantes, investigando-sea origem da matéria prima, forma deprocessamento e de comercialização.As análises microbiológicas seguiramas técnicas preconizadas peloManual de Métodos Microbiológicosde Produtos de Origem Animal doMinistério da Agricultura, Pecuária eAbastecimento-MAPA. Os resultadosmostraram ausência de Salmonella sp.e Staphylococcus aureus em todas asamostras, salientando, contudo, quetodas as placas revelaram presençade Staphylococcus sp em elevadascontagens. Concluiu-se que o produtoapresenta risco potencial paraos consumidores, podendo ser causadorde distúrbios gastrintestinais,marcadamente para aqueles maisvulneráveis, como, crianças, idosose imunodeprimidos, em função doelevado grau de contaminação representadapor microorganismos reveladoresda precariedade das condiçõeshigiênicossanitárias empregadas naobtenção, elaboração e comercializaçãodo produto. (AU)

The Brazilian people have asone of their favorite enjoyment togo to the beaches, practicing sportsand taking drinks and foods at seashoreareas, these last ones almostalways inadequately cooked and asconsequence being able to sufferfrom gastrointestinal dysfunctions ofgreater or minor gravity, dependingon consumer's health status. Foodscommercialized on the streets, specificallythe boiled shrimp, are potentialvectors for illnesses and sources fortoxic substances. The objective of this research was to evaluate the microbiologicalquality of this product,commercialized in bulk by itinerantstreet sellers (ambulant) at "Futuro"Beach, in Fortaleza CE. Around 17samples have been collected, duringthe months of July and August in2007. The shrimp was sampled usingseller 's proper tools, being packedinto first use plastic bags and thenkept inside isopor boxes containingcommercial ice and thus delivered tothe laboratory. Besides it, interviewswith the itinerant sellers have beencarried out, investigating the productorigin as well as commercializationand processing methods. The microbiologicalanalyses followed thetechniques prescribed by Ministryof Agriculture (MAPA) MicrobiologicalMethods Manual for AnimalOriginated Products. The results haveshown the absence of Salmonella sp.and Staphylococcus aureus in all thesamples. Pointing out, however, thatall Petri dishes have disclosed to thepresence of Staphylococcus sp in highcountings. So it was concluded thatthe product presents potential risk forthe consumers' health, being able tobe causing gastrointestinal dysfunctions,markedly for those ones morevulnerable as children, elderly peopleand immunodepressed patients,due to the high contamination raterepresented by the microorganismsdisclosed from the precariousness ofthe hygienic-sanitary conditions usedfor product attainment, processingand commercialization. (AU)

Propriedades físico-químicas, sensoriais e bacteriológicas de camarões (Litopenaeus brasiliensis) irradiados e armazenados sob refrigeração / Physical, chemical, sensorial and bacterial properties of irradiated shrimp (Litopenaeus brasiliensis) stored under refrigeration

A irradiação de alimentos é uma opção tecnológica para minimizar problemas de perdas de alimentos, pois reduz asalterações provenientes da atividade bacteriana, estendendo a validade do produto. Neste estudo foram irradiados camarões(Litopenaeus brasiliensis) com doses de 1,5 e 2,5 kGy, após 30 dias de armazenamento sob refrigeração (2°C ± 2°C), como objetivo de avaliar os efeitos da irradiação sobre a validade comercial de camarões através de parâmetros físico-químicos,microbiológicos e sensoriais. Foram avaliados pH, bases voláteis totais (BVT), contagem de bactérias heterotróficas aeróbiasmesófilas (BHAM) e heterotróficas aeróbias psicrófilas (BHAP) e teste de aceitação sensorial. Os valores de pH não variaramentre as amostras controle e as amostras irradiadas apresentando média de 7,08 ± 0,21 durante os 30 dias de armazenamento.A produção de BVT nas amostras controle extrapolou o limite aceitável para o consumo no 15o dia de armazenamentoenquanto nas amostras irradiadas com 2,5 kGy, este limite não foi alcançado em 28 dias de armazenamento, demonstrandoo efeito positivo da utilização da irradiação. Na análise sensorial, não ocorreu diferença significativa (p> 0,01) na aceitação,quanto aos atributos de sabor, aparência, aroma e impressão global entre as amostras.(AU)

Food irradiation is currently regarded as a technological option to mitigate food losses due to its potential in reducing microbiological load and its associated spoilage effects, consequently extending the shelf life of many products. Samples of shrimp (Litopenaeus brasiliensis) have been exposed to gamma doses of 0, 1.5 and 2.5 kGy and monitored changes in sensorial characteristics (30 judges), pH and total volatile bases (TVB) levels. All samples were kept at 2°C ± 2°C through the experiments. No significant change in pH has been observed during the experiments regardless of the gamma dose applied. There was statistical difference between the non-irradiated samples and those irradiated with 2.5 kGy (p 0.01), though no significant difference has been found between the non-irradiated samples and those irradiated with 1.5 kGy nor between the samples irradiated with 1.5 kGy and those irradiated with 2.5 kGy. Based on the upper commercial limit for NB, non-irradiated samples achieved the limit in 15 days while the samples irradiated with 2.5 kGy didnt achieve the limit in 28 days. In sensorial analyses, there was no significant difference (p> 0.01) in the acceptance, according to the attributes flavor, appearance, aroma and global impression among the samples.(AU)