Pulmonary adenocarcinoma in a captive ocelot (Leopardus pardalis): morphologic and immunophenotypic characterization - case report / Adenocarcinoma pulmonar em uma jaguatirica (Leopardus pardalis) de cativeiro: caracterização morfológica e imunofenotípica - relato de caso

Pulmonary adenocarcinoma is a malignant epithelial neoplasia that usually arises from conducting airways or alveolar parenchyma. It has rarely been described in wild felids, with no previous reports in ocelots. In domestic cats it is a very aggressive neoplasm with a high metastatic rate that usually evolves to death. This report aimed to describe a pulmonary adenocarcinoma in a captive and senile ocelot (Leopardus pardalis), with a thorough morphologic and immunophenotypically characterization, evidencing the epithelial-mesenchymal transition (EMT) phenomenon in a high metastatic carcinoma, an important feature rarely described in veterinary medicine, even in domestic cats.(AU)

O adenocarcinoma pulmonar é uma neoplasia epitelial maligna originada do epitélio respiratório das vias aéreas inferiores e do parênquima alveolar. É uma neoplasia raramente descrita em felinos selvagens, sem nenhum relato em jaguatiricas. Em gatos domésticos, é uma neoplasia muito agressiva, com alta taxa de metástase, e geralmente evolui para o óbito do paciente. O presente relato objetiva descrever um adenocarcinoma pulmonar em uma jaguatirica (Leopardus pardalis) senil de cativeiro, com detalhada caracterização morfológica e imunofenotípica, evidenciando o fenômeno de transição epitelial-mesenquial (TEM) em um carcinoma altamente metastático, uma característica importante, com escassos relatos na medicina veterinária, mesmo em gatos domésticos.(AU)

Histopathological and immunophenotypical characterization of canine multicentric lymphoma in Brazil: a study of 203 cases / Caracterização histopatológica e imunofenotípica do linfoma multicêntrico canino no Brasil: um estudo de 203 casos

The immunophenotype is regarded as an independent prognostic factor in high-grade lymphomas, seeing that lymphomas of T-cell origin are associated with shorter survival time. Although a number of studies have evaluated the immunophenotypical profile of lymphoma in the USA and Europe, Brazilian research on the matter remains scarce. Exact characterization of the histopathological type is crucial to establish proper treatment and prognosis. This study evaluated the database of immunohistochemistry laboratories that perform immunophenotyping of canine lymphoma in Brazil. A total of 203 cases of multicentric lymphoma were classified according to the WHO classification. Immunophenotyping was able to identify 71.4% lymphomas of B-cell line, 27.1% of T-cell line and 1.5% of non-B cells and non-T cell lines. Diffuse large B-cell lymphoma was the most common with 59.1% of the cases. Among T-cell lymphomas, lymphoblastic was the most common (11.33% of the cases). Even though canine lymphomas tend to be high-grade, indolent lymphomas comprised 11.82% of the cases and T-zone lymphoma was the most prevalent (8.86%). The immunophenotype of multicentric lymphoma in Brazil is similar to those in other parts of the world, which suggests similar etiologic factors to the development of this disease.(AU)

O imunofenótipo é considerado um fator prognóstico independente em linfomas de alto grau, visto que os linfomas de origem de células T estão associados a menor tempo de sobrevida. Apesar de vários estudos terem avaliado o perfil imunofenotípico do linfoma nos EUA e na Europa, a pesquisa brasileira sobre o assunto ainda é escassa. A caracterização exata do tipo histopatológico é crucial para estabelecer o tratamento e o prognóstico adequados. Este estudo avaliou a base de dados de laboratórios de imuno-histoquímica que realizam imunofenotipagem do linfoma canino no Brasil. Um total de 203 casos de linfoma multicêntrico foi classificado de acordo com a classificação da OMS. A imunofenotipagem foi capaz de identificar 71,4% dos linfomas da linhagem de células B, 27,1% da linhagem de células T e 1,5% das linhagens de células não B e não T. O linfoma difuso de grandes células B foi o mais comum em 59,1% dos casos. Entre os linfomas de células T, o linfoblástico foi o mais comum (11, 33% dos casos). Embora os linfomas caninos tendam a ser de alto grau, os linfomas indolentes representaram 11,82% dos casos e o linfoma da zona T foi o mais prevalente (8,86%). O imunofenótipo do linfoma multicêntrico no Brasil é semelhante ao de outras partes do mundo, o que sugere fatores etiológicos semelhantes ao desenvolvimento dessa doença.(AU)

Histopathological and immunophenotypical characterization of canine multicentric lymphoma in Brazil: a study of 203 cases / Caracterização histopatológica e imunofenotípica do linfoma multicêntrico canino no Brasil: um estudo de 203 casos

The immunophenotype is regarded as an independent prognostic factor in high-grade lymphomas, seeing that lymphomas of T-cell origin are associated with shorter survival time. Although a number of studies have evaluated the immunophenotypical profile of lymphoma in the USA and Europe, Brazilian research on the matter remains scarce. Exact characterization of the histopathological type is crucial to establish proper treatment and prognosis. This study evaluated the database of immunohistochemistry laboratories that perform immunophenotyping of canine lymphoma in Brazil. A total of 203 cases of multicentric lymphoma were classified according to the WHO classification. Immunophenotyping was able to identify 71.4% lymphomas of B-cell line, 27.1% of T-cell line and 1.5% of non-B cells and non-T cell lines. Diffuse large B-cell lymphoma was the most common with 59.1% of the cases. Among T-cell lymphomas, lymphoblastic was the most common (11.33% of the cases). Even though canine lymphomas tend to be high-grade, indolent lymphomas comprised 11.82% of the cases and T-zone lymphoma was the most prevalent (8.86%). The immunophenotype of multicentric lymphoma in Brazil is similar to those in other parts of the world, which suggests similar etiologic factors to the development of this disease.(AU)

O imunofenótipo é considerado um fator prognóstico independente em linfomas de alto grau, visto que os linfomas de origem de células T estão associados a menor tempo de sobrevida. Apesar de vários estudos terem avaliado o perfil imunofenotípico do linfoma nos EUA e na Europa, a pesquisa brasileira sobre o assunto ainda é escassa. A caracterização exata do tipo histopatológico é crucial para estabelecer o tratamento e o prognóstico adequados. Este estudo avaliou a base de dados de laboratórios de imuno-histoquímica que realizam imunofenotipagem do linfoma canino no Brasil. Um total de 203 casos de linfoma multicêntrico foi classificado de acordo com a classificação da OMS. A imunofenotipagem foi capaz de identificar 71,4% dos linfomas da linhagem de células B, 27,1% da linhagem de células T e 1,5% das linhagens de células não B e não T. O linfoma difuso de grandes células B foi o mais comum em 59,1% dos casos. Entre os linfomas de células T, o linfoblástico foi o mais comum (11, 33% dos casos). Embora os linfomas caninos tendam a ser de alto grau, os linfomas indolentes representaram 11,82% dos casos e o linfoma da zona T foi o mais prevalente (8,86%). O imunofenótipo do linfoma multicêntrico no Brasil é semelhante ao de outras partes do mundo, o que sugere fatores etiológicos semelhantes ao desenvolvimento dessa doença.(AU)

Histopathological and immunophenotypical assessment of canine primary splenic lymphoma according to the World Health Organization / Avaliação histopatológica e imunofenotípica segundo a classificação da Organização Mundial da Saúde do linfoma esplênico primário em cães

Although there are several studies addressing multicentric lymphoma in dogs, data regarding splenic lymphoma remains scarce. The diagnosis of splenic lymphoma using the World Health Organization (WHO) classification system can aid prognostic characterization of splenic lymphoma. The aim of this study was to evaluate the most common histological types of splenic lymphoma in dogs from Brazil according to the WHO classification. We assessed 33 cases of splenic lymphoma diagnosed by histopathologic and immunohistochemical (IHC) analysis submitted to VETPAT- Pathology Laboratory, Campinas-SP, Brazil. IHC was performed using antibodies against CD3 for T-cell and CD79α for B-cell identification . Mean age of patients with splenic lymphoma was 9.8 years. The most affected breeds were mixed breed dogs (33%) followed by Pit bulls and Yorkshires (9.0%). The most prevalent histological type was marginal zone B-cell lymphoma (60.7%) followed by diffuse large B-cell lymphoma (12.1%) and lymphoblastic T-cell lymphoma (12.1%). Histological and immunohistochemical characterization of splenic lymphoma is important due to the high prevalence of indolent lymphomas such as marginal zone, which may be less aggressive and thus have different prognostic and distinct forms of treatment when compared to high-grade lymphomas.(AU)

Embora existam diversos estudos a respeito do linfoma multicêntrico em cães, os dados sobre linfoma esplênico primário são escassos. O diagnóstico do linfoma esplênico utilizando a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) pode melhorar a caracterização da doença. O objetivo do estudo foi avaliar os principais tipos de linfoma esplênico primário em cães no Brasil de acordo com a classificação da OMS. Foram avaliados 33 casos de linfoma esplênico diagnosticados por histopatologia e imuno-histoquímica submetidos ao Laboratório de Patologia Veterinária (VETPAT, Campinas/SP). A imuno-histoquímica foi realizada utilizando os anticorpos CD3 para linfomas T, CD79α para linfomas B. A média de idade dos pacientes com linfoma esplênico foi de 9,8 anos. Os animais sem raça definida (SRD) foram os mais acometidos (33%) seguidos de PitBulls e Yorkshire (9,0%). O tipo histológico mais comum foi o linfoma de zona marginal representando 60,7% dos casos seguido do linfoma difuso de grandes células B (12,1%) e linfoma linfoblástico T (12,1%). A caracterização histopatológica e imuno-histoquímica do linfoma esplênico é importante devido à alta prevalência de linfomas indolentes como o linfoma de zona marginal, que devido ao seu comportamento indolente apresenta prognóstico e tratamento distintos quando comparado aos linfomas de alto grau.(AU)

Histopathological and immunophenotypical assessment of canine primary splenic lymphoma according to the World Health Organization / Avaliação histopatológica e imunofenotípica segundo a classificação da Organização Mundial da Saúde do linfoma esplênico primário em cães

Although there are several studies addressing multicentric lymphoma in dogs, data regarding splenic lymphoma remains scarce. The diagnosis of splenic lymphoma using the World Health Organization (WHO) classification system can aid prognostic characterization of splenic lymphoma. The aim of this study was to evaluate the most common histological types of splenic lymphoma in dogs from Brazil according to the WHO classification. We assessed 33 cases of splenic lymphoma diagnosed by histopathologic and immunohistochemical (IHC) analysis submitted to VETPAT- Pathology Laboratory, Campinas-SP, Brazil. IHC was performed using antibodies against CD3 for T-cell and CD79α for B-cell identification . Mean age of patients with splenic lymphoma was 9.8 years. The most affected breeds were mixed breed dogs (33%) followed by Pit bulls and Yorkshires (9.0%). The most prevalent histological type was marginal zone B-cell lymphoma (60.7%) followed by diffuse large B-cell lymphoma (12.1%) and lymphoblastic T-cell lymphoma (12.1%). Histological and immunohistochemical characterization of splenic lymphoma is important due to the high prevalence of indolent lymphomas such as marginal zone, which may be less aggressive and thus have different prognostic and distinct forms of treatment when compared to high-grade lymphomas.(AU)

Embora existam diversos estudos a respeito do linfoma multicêntrico em cães, os dados sobre linfoma esplênico primário são escassos. O diagnóstico do linfoma esplênico utilizando a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) pode melhorar a caracterização da doença. O objetivo do estudo foi avaliar os principais tipos de linfoma esplênico primário em cães no Brasil de acordo com a classificação da OMS. Foram avaliados 33 casos de linfoma esplênico diagnosticados por histopatologia e imuno-histoquímica submetidos ao Laboratório de Patologia Veterinária (VETPAT, Campinas/SP). A imuno-histoquímica foi realizada utilizando os anticorpos CD3 para linfomas T, CD79α para linfomas B. A média de idade dos pacientes com linfoma esplênico foi de 9,8 anos. Os animais sem raça definida (SRD) foram os mais acometidos (33%) seguidos de PitBulls e Yorkshire (9,0%). O tipo histológico mais comum foi o linfoma de zona marginal representando 60,7% dos casos seguido do linfoma difuso de grandes células B (12,1%) e linfoma linfoblástico T (12,1%). A caracterização histopatológica e imuno-histoquímica do linfoma esplênico é importante devido à alta prevalência de linfomas indolentes como o linfoma de zona marginal, que devido ao seu comportamento indolente apresenta prognóstico e tratamento distintos quando comparado aos linfomas de alto grau.(AU)

Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses / Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos

Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell banking.(AU)

As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas pós criopreservação por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram viabilidade de 80%. Estes resultados indicam que MA e TCU, obtidos tanto no momento de parto como em abatedouro, de fetos bovinos podem ser utilizados como fonte não invasiva e indolor de CTMs e possibilitam a formação de bancos de armazenamento de células.(AU)

Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses / Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos

Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, [...](AU)

As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. [...](AU)

PADRONIZAÇÃO DA TÉCNICA DE IMUNOFLUORESCÊNCIA EM AMOSTRAS CITOLÓGICAS PARA A CARACTERIZAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA DE LINFOMAS CANINOS

CEDRO, M. A. Padronização da técnica de imunofluorescência em amostras citológicas para a caracterização imunofenotípica de linfomas caninos. Salvador, 2021. 74p. Dissertação (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia. Linfomas são neoplasias do sistema hemolinfático. A diversidade subpopulacional e anatômica de linfócitos implica em uma grande quantidade de apresentações clínicas com diversos prognósticos. Classificações foram criadas ao longo do tempo para reconhecer de forma prática as diferentes entidades neoplásicas linfoides as quais, atualmente, se baseiam em morfologia, arquitetura tecidual, imunofenótipo e análises moleculares. O imunofenótipo é a caracterização das moléculas que são expressas pelas células, detectadas por métodos de imunocoloração, tais como imunohistoquímica e imunofluorescência. Citologia por punção com agulha fina é uma forma diagnóstica rápida, de fácil repetição e de baixo custo. Uma vez que o imunofenótipo pode auxiliar na demarcação do tipo de linfoma, sugestão de clonalidade e diferenciação de neoplasias, o presente estudo objetivou padronizar técnica de imunofluorescência em preparados citológicos (squash) de linfomas caninos. Neste estudo, foram analisadas lâminas de 30 pacientes, dos quais 29 foram confirmados como linfomas. Desses casos, 79,3% foram classificados como linfomas de alto grau e 20,6% como linfomas de baixo grau. Em 21 (72,41%) pacientes foi possível determinar o imunofenótipo, sendo este linfoma B em 62% dos casos e T em 38%. Portanto, na maioria das amostras foi possível a caracterização imunofenotípica nos preparados citológicos, mostrando que é aplicável utilizar o squash para imunofluorescência, desde que as amostras tenham sido bem coletadas e preservadas.

CEDRO, M. A. Standardization of immunofluorescence technique in cytological samples for immunophenotypic characterization of canine lymphomas. Salvador, 2021. 74p. Dissertação (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia. Lymphomas are neoplasms derived from the hemolymphatic system. Anatomical and subpopulational diversity of lymphocytes lead to a wide variety of clinical presentation with multiple prognoses. Classifications of lymphomas were made for recognizing in practical ways specific lymphoid neoplastic entities which are currently based on morphology, tissue architecture, immunophenotype and molecular analysis. Immunophenotype is the molecular characterization of proteins expressed by the cells. These protein markers are detected by immunostaining methods such as immunohistochemistry and immunofluorescencce. Fine-needle punction or aspiration cytology is a rapid diagnostic tool, with low cost and easy repetition. Since immunophenotyping can assist in delimitating lymphoma type, potential clonality and aid in differentiating neoplasms, the current study aim to standardize immunofluorescence techniques in canine lymphoma cytology on squash preparations. In this study cytological slides from 30 patients were analyzed, 29 of these were confirmed as lymphoma. 79.3% of these cases were classified as high-grade lymphomas and 20.6% were classified as low-grade lymphomas. In 21 (72.41%) patients immunophenotype was determined and resulted in 62% of B-cell lymphomas and 38% of T-cell lymphomas. Therefore, in the majority of samples immunophenotypic characterization was was reached by cytological preparations, showing that squash is a reliable method for immunofluorescence, since the samples are well collected and preserved.

LINFOMA ALIMENTAR EM FELINOS DOMÉSTICOS: CARACTERIZAÇÃO CLÍNICO-PATOLÓGICA, HISTOLÓGICA E IMUNOFENOTÍPICA E ASSOCIAÇÃO COM FIV E FELV

O linfoma alimentar (LA) é uma doença emergente na clínica de felinos domésticos, com aumento importante de casos na última década. Os vírus da leucemia felina (FeLV) e da imunodeficiência felina (FIV) são agentes com potencial oncogênico conhecido e podem estar envolvidos no desenvolvimento das enteropatias crônicas. Este estudo teve como objetivos diagnosticar felinos com LA, estimar sua frequência na população de estudo e caracterizar clínico-patológica, histológica e fenotipicamente os casos, assim como buscar uma associação das enteropatias crônicas com as infecções por FIV e FeLV através da investigação dos agentes por ensaios imunoenzimáticos e imuno-histoquímicos. Gatos com enteropatia crônica foram avaliados no período de setembro de 2020 a maio de 2021, totalizando 29 animais; destes 48,2% (7/14) foram selecionados e realizaram o procedimento de biópsia intestinal, sendo 50% (7/14) diagnosticados com LA, e os demais (50%, 7/14), com doença inflamatória intestinal idiopática (DII). Dos animais com LA, 85,7% (6/7) eram fêmeas e 14,2% (1/7) machos, 28,5% (2/7) eram adultos maduros (idade média de 9,5 anos), e 71,4% (5/7) seniores, com idade média de 12,2 anos. O tipo morfológico predominante foi o de pequenas células (85,7%, 6/7), com apenas um caso composto por células intermediárias (14,2%, 1/7). Em todos os casos o fenótipo encontrado foi o de células T, com 42,8% (3/7) classificados em enteropatia associada ao linfoma de células T tipo 1 (EATL-1) e 57,1% (4/7), EATL-2. Dos 14 pacientes com enterite avaliados, apenas um foi positivo para FeLV e um para FIV na sorologia, com diagnóstico final de LA e DII, respectivamente. Na análise imuno-histoquímica das amostras intestinais, FeLV foi detectado em apenas um caso (7,1%, 1/14), este igualmente positivo na sorologia para o retrovírus; FIV foi detectado em 28,5% (4/14) dos pacientes, três deles com LA e um com DII, sendo apenas um igualmente positivo no teste imunoenzimático, indicando uma possível associação deste retrovírus nas enterites de causa inflamatória e neoplásica. Mais estudos envolvendo FIV são necessários, através do uso de técnicas mais sensíveis, como as de PCR, a fim de encontrar um possível papel deste retrovírus no desenvolvimento das enteropatias crônicas felinas.

Alimentary lymphoma (AL) is an emerging disease in domestic feline clinics, with a significant increase in cases in the last decade. Feline leukemia (FeLV) and feline immunodeficiency (FIV) viruses are agents with known oncogenic potential and may be involved in the development of chronic enteropathies. This study aimed to diagnose cats with AL, estimate its frequency and characterize clinicopathologically, histologically and phenotypically, as well as to seek an association of enteritis with FIV and FeLV infections, through the investigation of agents in immunoenzymatic and immunohistochemical assays. Cats with chronic enteropathy were evaluated from september 2020 to may 2021, totaling 29 animals; of these, 48.2% (7/14) underwent the intestinal biopsy procedure, 50% (7/14) diagnosed with LA, and the others (50%, 7/14), idiopathic inflammatory enteritis. Of the animals with LA, 85.7% (6/7) were female and 14.2% (1/7) male, 28.5% (2/7) were mature adults (mean age 9.5 years), and 71.4% seniors (5/7), with an average age of 12.2 years. The predominant morphological type was small cells (85.7%, 6/7), with only one case composed of intermediate cells (14.2%, 1/7). In all cases, the phenotype found was that of T-cells, with 42.8% (3/7) classified as type 1 T-cell lymphoma-associated enteropathy (EATL-1) and 57.1% (4/7), EATL-2. Of the 14 patients with enteritis, only one was positive for FeLV and one for FIV in serology, with a diagnosis of LA and IBD, respectively. In the immunohistochemistry of intestinal samples, FeLV was detected in only one case (7.1%, 1/14), this one equally positive in serology; FIV was detected in 28.5% (4/14) of patients, three of them with LA and one with IBD, with only one positive in the immunoenzymatic test, indicating a possible association of this retrovirus in inflammatory and neoplastic enteritis. More studies involving FIV are needed, using more sensitive techniques, such as PCR, to find a possible role for this retrovirus in the development of feline chronic enteropathies.

Transcriptoma e caracterização do perfil proteômico de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo de mini-horses (Equus ferus caballus).

As células-tronco mesenquimais extraídas da medula óssea ou tecido adiposo são utilizadas em abordagens terapêuticas, em vista das suas propriedades anti-inflamatórias, imunomoduladoras e regenerativas. Estas células são consideradas uma nova alternativa para o tratamento de enfermidades em diversas espécies, incluindo as dos equinos. Dessa forma, com o intuito de investigar a possível utilização das células estromais de mini-horses em tratamentos de cavalos, nesse estudo foi realizada a colheita, isolamento, expansão, caracterização imunofenotípica e diferenciação em duas linhagens mesenquimais: osteogênica e adipogênica de células estromais de mini-horses (Equus ferus caballus), objetivando a formação de um banco celular. Foi ainda realizada a análise transcricional comparativa dessas células, com as células estromais oriundas de cavalos (Equus caballus), produzidas e caracterizadas nas mesmas condições. Os parâmetros analisados foram o perfil de genes relacionados à angiogênese, regulação negativa da proliferação de células T, regulação negativa da ativação de células T, proliferação negativa de linfócitos reguladores, regulação negativa da proliferação de células mononucleares, regulação negativa da adesão célula-célula de leucócitos, regulação negativa da proliferação de leucócitos, regulação negativa da adesão célula-leucócito, regulação negativa da ativação de linfócitos. Também foram pesquisados os principais genes up e down regulados comparando mini-horses aos cavalos. Para formação do banco celular foram realizadas avaliações que comprovaram as características de células estromais nas células obtidas dos mini-horses, a avaliação imunofenotípica por citometria de fluxo demonstrou expressão alta dos marcadores CD90 (99,83 ± 0,28) e esperada do CD105 (38,66 ± 18,47) e expressão baixa dos marcadores CD34 (3,55 ± 1,14) e MHC II (4,21 ± 2,03). O potencial de diferenciação em linhagens adipogênicas in vitro foi observado após o 14º dia através da visualização da deposição de gotículas lipídicas no citoplasma, e a linhagem osteogênica foi identificada após o 21° dia pela coloração positiva da matriz de cálcio extracelular. Ao final da avaliação transcricional, observamos um perfil de expressão gênica diferente entre os grupos, sugerindo que as diferenças entre os animais estudados se expande a mutação do gene Aggrecan que determina o nanismo. Apesar disso, os resultados indicam que as células estromais de mini-horse podem ser utilizadas como uma alternativa para o tratamento de lesões equinas com a vantagem de apresentarem uma maior expressão de genes relacionados à imunomodulação.

Mesenchymal stem cells extracted from bone marrow or adipose tissue are used in therapeutic approaches in view of their anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative properties. These cells are considered a new alternative for the treatment of diseases in several species. In order to investigate the possible use of mini-horses stromal cells in horse treatments, in this study was performed the collection, isolation, expansion, immunophenotypic characterization and differentiation in two mesenchymal lines were performed: osteogenic and adipogenic stromal cell mini-horses (Equus ferus caballus), aiming the formation of a cellular bank. We also performed the comparative transcriptional analysis of these cells, with stromal cells from horses (Equus caballus), produced and characterized under the same conditions. The parameters analyzed were the profile of genes related to angiogenesis, negative regulation of T cell proliferation, negative regulation of T cell activation, negative proliferation of regulatory lymphocytes, negative regulation of mononuclear cell proliferation, negative regulation of cell-cell adhesion leukocytes, negative regulation of leukocyte proliferation, negative regulation of cell-leukocyte adhesion, negative regulation of lymphocyte activation. We also searched the top 10 genes up and down regulated comparing mini-horses to horses. For cell bank formation tests were performed that demonstrated the characteristics of stromal cells in the cells obtained from the mini-horses, the immunophenotypic evaluation by flow cytometry showed high CD90 (99.83 ± 0.28) and expected CD105 ( 38.66 ± 18.47) and low expression of the CD34 (3.55 ± 1.14) and MHC II (4.21 ± 2.03) markers. The potential for differentiation in in vitro adipogenic lines was observed after day 14 by visualization of the deposition of lipid droplets in the cytoplasm, and the osteogenic lineage was identified after 21 ° day by the positive staining of the extracellular calcium matrix. At the end of the transcriptional evaluation, we observed a different gene expression profile between the groups, suggesting that the differences between the studied animals expands the Aggrecan gene mutation that determines the dwarfism. However, the results strongly indicate that ASCs from mini-horses can be used as an alternative to treat horses diseases, with the vantages of presenting a higher expression of immunomodulatory genes.

CARACTERIZAÇÃO, SEGURANÇA E POTENCIAL IMUNOMODULADOR DE CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS DERIVADAS DE MEDULA ÓSSEA DE EQUINOS

O uso da terapia celular em cavalos vem aumentando nos últimos anos, o que leva à uma preocupação com a padronização de técnicas e com o entendimento do mecanismo de ação das células estromais mesenquimais (MSC). O primeiro estudo investigou: a coleta de grandes volumes de medula óssea (MO) do esterno de cavalos em idade avançada (E1, n = 8); a diferença entre o número de células recuperadas na primeira e na última aspiração de cada ponto de coleta de MO (E2, n = 8); e a influência de diferentes concentrações de heparina (5, 10 e 20%) na formação de agregados celulares e a viabilidade de criopreservação das células mononucleares derivadas da medula óssea (BMMC) por 150 dias (E3, n = 6). A coleta de 200 mL de MO foi segura e o número de células recuperadas diminuiu quando comparadas a primeira e a última aspiração de um ponto (41.73 ± 18.99 vs. 5.88 ± 1.66 milhões de células por mL, p < 0,0001). O aumento na concentração de heparina influenciou na prevenção de agregados celulares, sendo que o uso de 10% de heparina resultou na maior recuperação de BMMC. A viabilidade celular sofreu queda após 90 e 120 dias de criopreservação (p = 0,031), mas permaneceu acima de 80% durante os 150 dias de estudo, sendo viável comercialmente. O segundo estudo investigou: a caracterização imunofenotípica das células estromais mesenquimais derivadas de medula óssea (BMMSC) equina por citometria de fluxo com os marcadores CD90, CD19, CD14, CD105, CD45 e HLA-DR (n = 4); a qualificação das BMMSC através de análise citogenética com bandeamento GTG (n = 3) e controle microbiológico após cultivo (n = 4); e o potencial imunomodulador das BMMSC (n = 4) e do seu meio condicionado (CM, n = 3) através do ensaio de inibição de linfócitos in vitro, utilizando células mononucleares de sangue periférico (PBMC) estimuladas com fitohemaglutinina (PHA). Todos os animais apresentaram os marcadores positivos acima de 95% (CD90 e CD105), e os marcadores negativos abaixo de 10% (CD19, CD4, CD45 e HLA-DR). Das 60 metáfases analisadas, 5% apresentaram aneuploidia e não houve contaminação nas amostras analisadas. A inibição de linfócitos foi maior que 50% para os dois tratamentos e significativa quando comparados ao controle de PBMC estimuladas com PHA (p < 0,0001). O conjunto de técnicas utilizadas no presente estudo foi efetivo em atestar a qualidade e caracterizar as BMMSC. Além disso, os resultados positivos para o CM justificam seu estudo mais aprofundado como terapêutica para doenças inflamatórias. O terceiro estudo utilizou um novo modelo de estudo ex vivo do pulmão, os fragmentos de pulmão, para investigar se o estímulo dos fragmentos de pulmão de camundongo com lipopolissacarídeo (LPS, 10 µg/mL) ou zymosan (100 µg/mL) levaria à uma contração bronquial dependente do tempo em quatro horas (E1, n = 5) ou à uma reação de hiperresponsividade à metacolina (MCh) após incubação de 15 horas (E2, n = 5); além de avaliar a secreção de TNF- pelos fragmentos estimulados com LPS ou zymosan, e simultaneamente tratados com dexametasona (100nM) ou MSC equinas derivadas de tecido adiposo ou medula óssea (1x105 células/mL) após incubação de 15 horas (E3, n = 5). O estímulo com LPS ou com zymosan não causou contração bronquial dependente do tempo, nem reação de hiperresponsividade à MCh. No E3, a incubação dos fragmentos de pulmão com LPS e com zymosan aumentou a secreção de TNF- (p = 0,016). O tratamento com MSC de medula óssea dos fragmentos estimulados com zymosan aumentou ainda mais a secreção de TNF- (p = 0,032), enquanto que o tratamento com dexametasona dos fragmentos estimulados com LPS reduziu a secreção de TNF- (p = 0,008). Com os resultados do E3, conclui-se que o modelo de fragmentos de pulmão pode ser usado como ferramenta para avaliar respostas de imunomodulação das células residentes do pulmão.

The use of cell therapy in horses has been increasing in recent years, which leads to a concern with the standardization of techniques and the understanding of the mechanism of action of mesenchymal stromal cells (MSC). The first study investigated: the collection of large volumes of bone marrow (BM) from horses of advanced age (E1, n = 8); the difference between the number of cells obtained from the first and last aspiration of each BM collection point (E2, n = 8); and the influence of different heparin concentrations (5, 10 and 20%) on the formation of cell aggregates, together with the feasibility of cryopreservation of bone marrow derived mononuclear cells (BMMC) for 150 days (E3, n = 6). Collection of 200 mL of BM was safe and the number of cells recovered decreased when comparing the first with the last aspiration of one collection point (41.73 ± 18.99 vs. 5.88 ± 1.66 million cells per mL, p < 0.0001). The increase in heparin concentration influenced the prevention of cell aggregates, and the use of 10% of heparin resulted in a greater recovery of BMMC. Cell viability fell after 90 and 120 days of cryopreservation (p = 0.031), but remained above 80% during the 150 days of study, being commercially viable. The second study investigated: the immunophenotypic characterization of equine bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BMMSC) by flow cytometry with the markers CD90, CD19, CD14, CD105, CD45 and HLA-DR (n = 4); BMMSC qualification through cytogenetic analysis with GTG banding (n = 3) and microbiological control after culture (n = 4); and the immunomodulatory potential of BMMSC (n = 4) and its conditioned medium (CM, n = 3), determined by the in vitro lymphocyte inhibition assay using peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with phytohemagglutinin (PHA). All animals had positive markers above 90% (CD90 and CD105), and negative markers below 10% (CD19, CD4, CD45 and HLA-DR). Of the 60 metaphases analyzed, 5% presented aneuploidy and there was no contamination in the samples analyzed. Inhibition of lymphocytes was greater than 50% for both treatments and significant when compared to control of PHA-stimulated PBMC (p < 0.0001). The set of techniques used in the present study was effective in attesting the quality and characterization of BMMSC. In addition, the positive results for CM justify further studies as therapeutics for inflammatory diseases. The third study used a new ex vivo model to study the lungs, the lung slices technique, to investigate whether stimulation of mouse lung slices with lipopolysaccharide (LPS, 10 g/mL) or zymosan (100 g/mL) would lead to a time-dependent bronchial contraction in four hours (E1, n = 5) or a hyperresponsiveness reaction to methacholine (MCh) after a 15 hours incubation (E2, n = 5); it also evaluated TNF- secretion by the slices stimulated with LPS or zymosan, and simultaneously treated with dexamethasone (100 nM) or equine MSC derived from adipose tissue or bone marrow (1x105 cells / mL) after a 15 hours incubation (E3, n = 5). LPS or zymosan stimulation did not cause time-dependent bronchial contraction nor hyperresponsiveness reaction to MCh. In E3, incubation of lung slices with LPS and zymosan increased TNF- secretion (p = 0.016). Treatment of the zymosan-stimulated slices with bone marrow-derived MSC further increased TNF- secretion (p = 0.032), whereas dexamethasone treatment of the LPS-stimulated slices reduced TNF- secretion (p = 0.008). With the results of E3, it can be concluded that the lung slices model can be used as a tool to evaluate immunomodulation responses of resident lung cells.

Characterization of mesenchymal stem cells derived from equine adipose tissue / Caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo equino

Stem cell therapy has shown promising results in tendinitis and osteoarthritis in equine medicine. The purpose of this work was to characterize the adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSCs) in horses through (1) the assessment of the capacity of progenitor cells to perform adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation; and (2) flow cytometry analysis using the stemness related markers: CD44, CD90, CD105 and MHC Class II. Five mixed-breed horses, aged 2-4 years-old were used to collect adipose tissue from the base of the tail. After isolation and culture of AdMSCs, immunophenotypic characterization was performed through flow cytometry. There was a high expression of CD44, CD90 and CD105, and no expression of MHC Class II markers. The tri-lineage differentiation was confirmed by specific staining: adipogenic (Oil Red O), osteogenic (Alizarin Red), and chondrogenic (Alcian Blue). The equine AdMSCs are a promising type of adult progenitor cell for tissue engineering in veterinary medicine.(AU)

O uso de células tronco tem demonstrado resultados promissores na terapia da tendinite e osteoartrite na medicina equina. O objetivo deste trabalho foi caracterizar as células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMs) em cavalos através da (1) avaliação da capacidade das células progenitoras para realizar a diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica; e (2) através da análise por citometria de fluxo, utilizando os marcadores stemness relacionados: CD44, CD90, CD105 e MHC de Classe II. Cinco cavalos sem raça definida, de 2 a 4 anos de idade foram utilizados para a coleta do tecido adiposo da base da cauda. Após o isolamento e cultivo das AdCTMs, a caracterização imunofenotípica foi realizada pela citometria de fluxo. Houve alta expressão dos marcadores CD44, CD90 e CD105, e não houve expressão do MHC Classe II. A diferenciação foi confirmada pela coloração específica: adipogênica (Oil Red O), osteogênico (Alizarin Red), e condrogênico (Alcian Blue). As AdCTMs são um tipo promissor de células progenitoras adulta para a engenharia tecidual na medicina veterinária.(AU)

Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells / Isolamento e caracterização das células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico equino

The objective of the study was to isolate, cultivate and characterize equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells (PbMSCs). Peripheral blood was collected, followed by the isolation of mononuclear cells using density gradient reagents, and the cultivation of adherent cells. Monoclonal mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44, and mouse anti-rat CD90 antibodies were used for the immunophenotypic characterization of the surface of the PbMSCs. These cells were also cultured in specific media for adipogenic and chondrogenic differentiation. There was no expression of the CD13 marker, but CD44 and CD90 were expressed in all of the passages tested. After 14 days of cell differentiation into adipocytes, lipid droplets were observed upon Oil Red O (ORO) staining. Twenty-one days after chondrogenic differentiation, the cells were stained with Alcian Blue. Although the technique for the isolation of these cells requires improvement, the present study demonstrates the partial characterization of PbMSCs, classifying them as a promising type of progenitor cells for use in equine cell therapy.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar, cultivar e caracterizar as células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico (SpCTMs) equino. O sangue periférico foi coletado, seguido do isolamento das células mononucleadas utilizando o reagente de gradiente de densidade e o cultivo das células aderentes. Os anticorpos monoclonais mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44 e mouse anti-rat CD90 foram utilizados para a caracterização imunofenotípica da superfície das SpCTMs. Estas células também foram cultivadas utilizando meio de cultura específico para a diferenciação adipogênica e condrogênica. Não houve expressão do marcador CD13, mas os marcadores CD44 e CD90 foram expressos em todas as passagens testadas. Após 14 dias da diferenciação das células em adipócitos, gotículas de lipídeos foram observados através da coloração com Oil Red O. Vinte e um dias após a diferenciação condrogênica, as células foram coradas com o Alcian Blue. Embora a técnica de isolamento destas células necessite ser otimizada, o presente estudo demonstra a caracterização parcial das SpCTMs, classificando-as como um tipo de células progenitoras promissoras para o uso na terapia celular em equinos.(AU)

USO TERAPÊUTICO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E CÉLULAS PROGENITORAS RENAIS NA SÍNDROME DE ISQUEMIA/REPERFUSÃO RENAL EM SUÍNOS

A síndrome de isquemia/reperfusão renal (IRR) representa cerca de 70% das causas de morbimortalidade relacionadas à lesão renal aguda. Ocorre em diversas doenças, a exemplo da embolia da artéria renal, além de ser característica em transplantes renais. A IRR durante a agressão isquêmica leva à necrose tubular aguda e na reoxigenação celular é caracterizada pelo aumento na peroxidação lipídica, no dano celular e na redução da função de filtração e excreção renal. O objetivo deste estudo foi analisar o comportamento in vitro das células progenitoras renais de suínos do córtex renal (CPHCR-su) comparando às células-tronco mesenquimais da medula óssea de suínos (CTMMO-su), e avaliar seu potencial terapêutico na síndrome de isquemia/reperfusão renal. Foram utilizados amostras de medula óssea e fragmentos renais de suínos, para isolamento de CTMMO-su e CPHCR-su. Após estabelecimento da cultura, foram realizados ensaios de cinética celular, unidade formadora de colônia fibroblastoide (UFC-F), citometria de fluxo, diferenciação celular em três linhagens e avaliação da morfologia celular. Para avaliação da terapia celular, foram utilizados 15 suínos machos, sadios, com idade entre 60 a 70 dias, divididos em três grupos de cinco animais (GC Controle, G1- tratamento com CTMMO-su e G2 - tratamento com CPHCRsu), os quais foram submetidos à nefropatia por modelo de isquemia total bilateral durante uma hora, seguido de reperfusão sanguínea. As CTMMO-su e CPHCR-su, foram marcadas com nanocristais fluorescentes (Q-tracker®). Nos animais do GC, foi infundido 1mL de solução fisiológica, via local; nos suínos do G1, a infusão de CTMMO-su (1x106/animal); e no G2, CPHCR-su (1x106/animal). Os animais foram avaliados por meio de ultrassonografia renal e urinálise, antes e após infusão celular e realizada análise histopatológica após quatro e oito dias do tratamento. Os resultados foram submetidos à análise estatística com dados paramétricos em parcela subdividida e comparação de médias por teste F e dados não paramétricos por teste Kruskal- Walis a 5% de significância. As CPHCR-su e CTMMO-su apresentaram comportamento semelhante, aderência ao plástico, morfologia fibroblastoide, positivas ao ensaio de UFC-F, diferenciação em linhagens condrogênica, adipogênica e osteogênica. Na caracterização imunofenotípica, as CTMMO-su apresentaram-se CD14-/CD133-/CD105+/CD90+/CD140b+; as CPHCR-su em segunda passagem (P2), CD14-/CD105-/CD90+/CD140b+/CD133+; e em P4, CD14-/CD105-/CD90+/CD133-/CD140b-. As análises histopatológicas demonstraram diferenças estatísticas significativas, para as variáveis de degeneração tubular, necrose/apoptose tubular e ectasia tubular, com menor média para G2, comparado ao GC e G1, entretanto estes, não diferiram entre si (p<0,05). Dessa forma, foi comprovado com relativa segurança, que as progenitoras isoladas do córtex renal suíno são multipotentes, com expressão similar as tronco mesenquimais medulares. É importante destacar a necessidade de estudos posteriores que determinem a genômica desta população multipotente, para corroborar ou questionar os resultados ora apresentados. Inferese que o nicho cortical renal em suínos representa importante fonte de células progenitoras multipotentes com potencial para ensaios pré-clínicos, conforme demonstrado nos achados teciduais e laboratoriais desta pesquisa. Portanto, podemos concluir que os animais tratados com células progenitoras renais apresentaram melhores resultados teciduais, comparados aos dos grupos controle e tratamento de células-tronco mesenquimais da medula óssea.

Renal ischemia / reperfusion syndrome (RRI) represents about 70% of the causes of morbidity and mortality related to acute kidney injury. It occurs in several diseases, such as renal artery embolism, besides being characteristic in renal transplants. IRR during ischemic aggression leads to acute tubular necrosis and cellular reoxygenation is characterized by increased lipid peroxidation, cellular damage, and reduced renal filtration and excretion function. The objective of this study was to analyze the in vitro behavior of porcine renal progenitor cells (PRPC) comparing to the mesenchymal stem cells of the porcine bone marrow (MSCBM-su), and to evaluate its therapeutic potential in renal ischemia / reperfusion syndrome . Samples of bone marrow and renal porcine fragments were used for the isolation of MSCBM-su and PRPC-su. After establishment of the culture, cell kinetics, fibroblast colony forming unit (CFU-F), flow cytometry, cell differentiation in three lines and cell morphology evaluation were performed. To evaluate cell therapy, 15 healthy male pigs, aged 60 to 70 days, divided into three groups of five animals (GC - Control, G1 treatment with MSCBM-su and G2 - PRPC treatment) , who underwent nephropathy by bilateral total ischemia model for one hour, followed by blood reperfusion. MSCBM-su and PRPC -su, were labeled with fluorescent nanocrystals (Q-tracker®). In the CG animals, 1mL of saline solution was infused locally; in the G1 swine, MSCBM-su infusion (1x106 / animal); and in G2, CPR-su (1x106 / animal). The animals were evaluated by means of renal ultrasonography and urinalysis, before and after cellular infusion and histopathological analysis was performed after four and eight days of treatment. The results were submitted to statistical analysis with parametric data in subdivided plot and comparison of means by F test and non-parametric data by Kruskal-Walis test at 5% of significance. The PRPC -su and MSCBM-su presented similar behavior, adherence to plastic, fibroblast morphology, positive for the UFC-F assay, differentiation in chondrogenic, adipogenic and osteogenic lines. In the immunophenotypic characterization, MSCBM-su presented CD14- / CD133- / CD105 + / CD90 + / CD140b +; the second pass PRPC -su (P2), CD14- / CD105- / CD90 + / CD140b + / CD133 +; and in P4, CD14- / CD105- / CD90 + / CD133- / CD140b-. Histopathological analyzes demonstrated significant statistical differences for tubular degeneration, tubular necrosis / apoptosis and tubular ectasia, with a lower mean for G2, compared to GC and G1, but these did not differ between groups (p <0.05). Thus, it has been proven with relative safety, that the progenitors isolated from the swine renal cortex are multipotent, with similar expression to the medullary mesenchymal trunk. It is salutary to stress the importance of further studies that determine the genomics of this multipotent population, to corroborate or question the results presented here. It is inferred that the renal cortical niche in pigs represents an important source of multipotent progenitor cells with potential for pre-clinical tests, as demonstrated in the tissue and laboratory findings of this study. Therefore, we can conclude that the animals treated with renal progenitor cells had better tissue results, compared to the control and treatment groups of mesenchymal stem cells of the bone marrow.

Phenotipic, cytological and functional characterization of bone marrow cells in FELV-negative and FELV- positive cats.

O vírus da leucemia viral felina (FeLV) tem distribuição mundial e pode causar diferentes tipos de alterações no organismo, sejam elas neoplásicas (linfoma, fibrossarcoma e doenças mieloproliferativas) ou não neoplásicas como anemia regenerativa ou arregenerativa. Além disso, podem causar imunossupressão e tornar os gatos mais susceptíveis às infecções oportunistas, como coinfecções com protozoários. A transmissão da FeLV ocorre principalmente pela saliva contaminada. Os objetivos do presente estudo foram avaliar as alterações hematológicas relacionadas ao vírus da FeLV, descrever as características funcionais, citológicas e imunofenotípicas das células hematopoéticas da medula óssea em gatos negativos e positivos para FeLV, assim como determinar a ocorrência dos retrovírus FIV (vírus da imunodeficiência felina) e FeLV e a coinfecção pelos protozoários Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona em gatos no sul do Brasil. Para isso, o presente trabalho foi divido em três capítulos. No primeiro capítulo, um total de 142 gatos domésticos foram testados por PCR em tempo real (qPCR) para detectar a infecção pelo vírus da FeLV e pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV). No segundo capítulo, foram coletadas amostras de medula óssea de 19 gatos, sendo 12 negativos e sete positivos para FeLV, considerando resultados por imunoabsorção enzimática (ELISA) e qPCR, e realizado mielograma, ensaio clonogênico, imunofenotipagem por citometria de fluxo e análise de carga viral, sendo esta última avaliada no sangue também. No terceiro capítulo, em 167 gatos domésticos foi realizado teste sorógico por ELISA para detecção de FIV e FeLV, e realizadas sorologia por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de T. gondii, N. caninum e S. neurona. Dos 142 gatos do primeiro capítulo, o vírus da FeLV foi encontrado em 41 (28,8%) animais. Entre os animais positivos, 27 (19%), 55,5% tinham anemia. As alterações mais prevalentes nestes 41 gatos positivos para FeLV foram anemia, anisocitose, neutrofilia e linfopenia. Nas amostras de medula óssea do segundo capítulo não houve diferença com relação ao crescimento de unidades formadoras de colônias em gatos portadores ou não do vírus. Das sete amostras de medula óssea dos gatos FeLV positivos, em duas verificou-se hipoplasia granulocítica e hiperplasia eritróide. No gato com hiperplasia eritróide foi encontrada a maior carga viral/mL no sangue (2.352.025.174,98) e na medula óssea (1.640.070.897,77). Na caracterização imunofenotípica os marcadores que apresentaram diferença foram o CD8, CD19 e o CD45 que foram mais expressivos em gatos infectados pelo vírus da FeLV. Verificou-se que em gatos infectados pelo vírus da leucemia felina na medula óssea, não houve interferência no desenvolvimento de células precursoras. A maior carga viral foi observada na medula óssea de um gato com hiperplasia eritróide e anemia não regenerativa, demonstrando que apesar da alta produção de células eritróides na medula óssea, o vírus em alta quantidade não permite a maturação das células no sangue periférico. Dos 167 gatos do terceiro capítulo, 27% (45/167) foram soropositivos para T.gondii; 29,3% (49/167) para N. caninum e 3,6% (6/167) para S.neurona. O vírus da FeLV foi detectado em 24,6% e da FIV em 1,7% destes gatos. Os gatos do sul do Brasil foram expostos aos protozoários T. gondii, N. caninum e S. neurona. Observou-se maior ocorrência de anticorpos para T. gondii do que em estudos anteriores realizados na mesma região. O presente estudo demonstrou a maior ocorrência de anticorpos anti N.caninum em gatos do Brasil. A soropositividade para S. neurona é o primeiro relato em gatos no sul do Brasil. Verificou-se coinfecção por mais de um protozoário. Foi observada soropositividade com diferença estatística (p<0,05) entre o protozoário N. caninum e o retrovírus FeLV. Foi notável a maior ocorrência (p=0,1) da FeLV em gatos semidomiciliados, condizente com o estudos que observaram o acesso a rua como fator de risco para este vírus. Entre os machos e fêmeas, não foi observada maior positividade para os agentes, exceto para S. neurona que foi observada maior prevalência para fêmeas. A análise da carga viral da medula óssea, das alterações hematológicas, e das coinfecções relacionadas ao vírus da FeLV devem ser realizadas com mais frequência em estudos científicos e na rotina clínica. Estes dados são de extrema importância para entendermos o modo de ação do vírus e, conseqüentemente, obter prognósticos mais precisos e, futuramente, tratamento.

Feline viral leukemia virus (FeLV) has a worldwide distribution and can cause different types of abnormalities in the body, whether they are neoplastic (lymphoma, fibrosarcoma and myeloproliferative diseases) or non-neoplastic, such as regenerative or arregenerative anemia. In addition, they can cause immunosuppression and make cats more susceptible to opportunistic infections, such as coinfections with protozoa. The transmission of FeLV occurs mainly by contaminated saliva. The objectives of the present study were to evaluate the hematological changes related to the FeLV virus, to describe the functional, cytological and immunophenotypic characteristics of hematopoietic cells of the bone marrow in FeLV positive and negative cats, as to determine the occurrence of the retrovirus FIV (feline immunodeficincy virus) and FeLV and coinfection by the protozoa Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona in cats in southern Brazil. For this, the present work was divided in three chapters. In the first chapter, a total of 142 domestic cats were tested by real-time PCR (qPCR) to detect infection by FeLV virus and feline immunodeficiency virus (FIV). In the second chapter, bone marrow samples were collected from 19 cats, 12 negative and 7 positive for FeLV, considering results by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and qPCR, and myelogram, clonogenic assay, flow cytometric immunophenotyping and load analysis viral activity, the latter being evaluated in the blood as well. In the third chapter, 167 domestic cats were tested by ELISA for FIV and FeLV, and indirect immunofluorescence (IFR) serology was performed for the detection of T. gondii, N. caninum and S. neurona. Of the 142 cats in the first chapter, FeLV virus was found in 41 (28.8%) animals. Among the positive animals, 27 (19%),55.5% had anemia. The most prevalent changes in these 41 FeLV positive cats were anemia, anisocytosis, neutrophilia and lymphopenia. In the samples of bone marrow of the second chapter there was no difference with respect to the growth of colony forming units in cats with or without virus. Of the seven bone marrow samples from FeLV-positive cats, two showed granulocytic hypoplasia and erythroid hyperplasia. In the cat with erythroid hyperplasia, the highest viral load / mL was found in the blood (2.352.025.174.98) and in the bone marrow (1.640.070.897.77). In the immunophenotypic characterization the markers that showed difference were the CD8, CD19 and CD45 that were more expressive in cats infected with FeLV virus. It was found that in cats infected with the feline leukemia virus in the bone marrow, there was no interference in the development of precursor cells. The highest viral load was observed in the bone marrow of a cat with erythroid hyperplasia and non-regenerative anemia, demonstrating that despite the high production of erythroid cells in the bone marrow, the virus in high quantity does not allow the maturation of the cells in the peripheral blood. Of the 167 cats in the third chapter, 27% (45/167) were seropositive for T.gondii, 29.3% (49/167) for N. caninum and 3.6% (6/167) for S. neurona. FeLV virus was detected in 24.6% and FIV in 1.7% of these cats. Cats from southern Brazil were exposed to protozoa T. gondii, N. caninum and S.neurona. There was a higher occurrence of antibodies to T. gondii than in previous studies conducted in the same region. The present study demonstrated the highest occurrence of N. caninum antibodies in Brazilian cats. Seropositivity for S. neurona is the first report in cats in southern Brazil. Coinfection was observed by more than one protozoan. Seropositivity was observed with statistical difference (p<0.05) between the protozoan N. caninum and the retrovirus FeLV. A highest occurrence (p=0.1) of FeLV in semi-domiciled cats was notable, consistent with studies that observed access to the street as a risk factor for this virus. Among males and females, no higher positivity was observed for the agents, except for S. neurona that a higher prevalence was observed for females. Analysis of bone marrow viral load, haematological abnormalities, and coinfections related to FeLV virus should be performed more frequently in scientific studies and clinical routine. These data are extremely important to understand the mode of action of the virus and, consequently, to obtain more accurate prognoses and, in the future, treatment.

Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais / Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages

O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.(AU)

The interest in stem cells derived from fetal annexes of many species has exponentially increased during the last decades, because they are adult stem cell sources with potential of differentiation in several cell lineages; which present little or no immunogenicity and are an alternative with great importance for storage cell banks. Despite the rising interest, studies for the equine species are still rare. The aim of this study was to isolate, characterize and differentiate mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from initial, middle and late third of gestation (AF-MSCs), and compare their results. Twenty three samples from equine amniotic fluid were evaluated by morphological, immunocytochemical and immunophenotypical (Flow cytometer) assays and osteogenic, adipogenic and chondrogenic in vitro differentiation. All samples demonstrated plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The immunocytochemical assay demonstrated cells from all the studied groups were positive for CD44, PCNA and vimentin and negative for cytokeratin and Oct-4. Flow cytometry demonstrated expression of CD44 and CD90 and no expression of CD34, where CD44 and CD90 markers presented decreasing pattern of expression in relation to the gestational development. All samples collected from all gestational phases were capable to differentiate in osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages. Thus, cells obtained from equine amniotic fluid presented morphological and immunophenotypical characteristics and potential of differentiation typical of MSCs showing that the collection can be performed at any stage of pregnancy. However, more studies should be performed about the expression of pluripotent markers as Oct-4 and the differentiation potential for extra mesodermal lineages prior demonstrated in the literature.(AU)

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DERIVADAS DO TECIDO ADIPOSO DE BOVINOS

As células-tronco mesenquimais (CTM) representam uma atrativa ferramenta para a medicina regenerativa, a engenharia de tecidos e a terapia celular. Na espécie bovina, as pesquisas sobre a caracterização de CTM ainda são raras, principalmente utilizando-se o tecido adiposo como fonte de obtenção. Com o objetivo de isolar e caracterizar CTM derivadas do tecido adiposo de bovinos, foram utilizadas amostras de seis vacas e isoladas CTM por meio de digestão enzimática e cultivo celular em monocamada. As células em primeira (P0) e terceira passagem (P3) foram, então, submetidas a caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo. A diferenciação osteogênica e adipogênica foi avaliada microscopicamente após 10 dias de indução e por qPCR em tempo real após 3 e 15 dias de indução. Foram obtidas células fibroblastóides e aderentes ao plástico. Estas apresentaram, na citometria de fluxo, marcação positiva para CD44 (86,6 % em P0 e 76,6 % em P2) e vimentina (82,48 % em P2), baixa marcação de CD34 (8,7 % em P0 e 1,8 % em P2) e marcação negativa para MHC II (2,1 % em P0 e 2,3 % em P2). Na avaliação microscópica, todas as amostras responderam positivamente às diferenciações nas linhagens osteogênica e adipogênica, além de apresentarem expressão de osteopontina e colágeno tipo I e PPAR-, respectivamente, pelo qPCR em tempo real. Não foi observada a expressão de osteocalcina em nenhuma amostra submetida a indução osteogênica. Os resultados obtidos indicam o tecido adiposo de bovinos como uma fonte viável de CTM para medicina regenerativa e terapia celular.

Mesenchymal stem cells (MSC) are an interesting tool for regenerative medicine, tissue engineering and cell therapy. In bovine species, MSC are not well described. Therefore, the aim of this study was to isolate and characterize bovine MSC obtained from adipose tissue. Samples from six cows were used to isolate MSC by enzymatic digestion followed by monolayer culture. These cells were, then, submitted to immunophenotyping by flow cytometer at first (P0) and third (P2) passages. Osteogenic and adipogenic differentiation potential was evaluated microscopically after 10 days of induction and by Real Time qPCR after 3 and 15 days of induction. Cells showed plastic-adherent characteristic and fibroblastoid morphology. They expressed CD 34 (8,7 % at P0 e 1,8 % at P2), CD44 (86,6 % at P0 e 76,6 % at P2)and vimentin (82,48 % at P2) and did not express MHC II (2,1 % at P0 e 2,3 % at P2). All samples showed potential to differentiate into osteogenic and adipogenic lineages and expressed osteopontin and collagen type I and PPAR-, respectively. Osteocalcin was not expressed in any sample. Our results shows the possibility of using bovine adipose tissue as a source of MSC for regenerative medicine and cell therapy. ¨¨

AVALIAÇÃO DA INFLUÊNCIA DO SEXO FETAL NA CINÉTICA E CARACTERIZAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA DAS CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS DA PLACENTA DE CÃES

Estudos das células-tronco mesenquimais (CTMs) comprovaram a influência do sexo do doador nas suas capacidades proliferativa e imunomoduladora. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é investigar se há disparidades entre as células da placenta derivada de fetos de sexos diferentes, fato que ainda não foi descrito na medicina veterinária. Foram coletadas 11 pares de membrana alantoamniótica de cães (ALAM), isoladas por digestão enzimática e cultivadas. Utilizamos amostras de tecido para avaliação histológica e imunohistoquímica. Avaliamos os cultivos celulares para padrões morfológico, proliferativo e de capacidade de diferenciação. A justaposição íntima das membranas alantoideana e amniótica observada nos cortes histológicos justifica estudá-las juntas. Observamos que as células obtidas da ALAM de ambos os sexos apresentaram características semelhantes. As alterações morfológicas foram consistentes entre as amostras, e a viabilidade e a curva de crescimento apresentaram p>0,05. As células demonstraram capacidade de diferenciação nas linhagens adipogênica e osteogênica. Na imunocitquímica, as amostras expressaram a vimentina e os marcadores de pluripotência (Oct-4 e Nanog). Na citometria de fluxo, elas expressaram valores significativos de CD44 e CD90, além da baixa expressão de CD34 e MHCII. Esses resultados indicam não haver diferença entre as células quando comparamos as células da ALAM derivadas de fetos de sexos diferentes, mas sugerem seu uso futuramente na medicina regenerativa

Mesenchymal stem cells (MSCs) studies have proven the influence of the donors gender in its proliferative and immunomodulatory abilities. Therefore this study aims to investigate the presence of discrepancies among the MSCs of the placenta derived from different sex fetus, which havent been described in the veterinary medicine. Eleven pairs of canine allantoamniotic membranes (ALAM) were collected, isolated through enzymatic digestion and cultivated. Tissue samples were used for histological and immunohistochemistry assessment. The cell cultures were evaluated for morphological, proliferative, and differentiation potential standards. The intimate juxtaposition of the allantoic and amniotic membranes detected in the histological slides justifies studying them together. Similar characteristics were observed for the cells derived from ALAM in both genders. The morphological alterations were consistent among samples, and viability and growth curve exhibited p>0.05. The cells displayed capability to: differentiate in adipogenic and osteogenic lineages; express vimentin and Oct-4 and Nanog pluripotent markers, with immunocytochemistry; and express significatively CD44 and CD90, regardless of the low expression of CD34 and MHCII, with flow cytometry. These results indicate there are no differences among cells when comparing the ALAM cells derived from opposite sex fetus, but suggest using this source for the regenerative medicine in the future.

POTENCIAL DE DIFERENCIAÇÃO INDUZIDO E ESPONTÂNEO DE CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS ORIUNDAS DE TECIDO ADIPOSO E MEDULA ÓSSEA DE EQUINOS (Equus caballus)

A medula óssea (MO) e o tecido adiposo (TA) são fontes viáveis e amplamente estudadas de células tronco mesenquimais (CTMs), cujo alto potencial de multiplicação e diferenciação, aliado à característica imunomoduladora, permitem ampla aplicação em Medicina Veterinária com resultados satisfatórios na reconstrução de tecidos danificados. Diversos protocolos são descritos para isolamento e cultivo de CTMs, com divergência na porcentagem de suplementação de soro fetal bovino (SFB), componente xenogênico que é indicado como possível facilitador do processo de diferenciação in vitro. Este estudo analisou a proliferação e diferenciação induzida e não induzida de CTMs-TA e MO cultivadas em 10 ou 20% de SFB, e demonstrou que CTMs cultivadas em 20% de SFB apresentam maior eficiência de proliferação in vitro, e que a proliferação in vitro das CTMs-TA são superiores em comparação à CTMs-MO. O potencial de diferenciação das CTMs-TA e MO foi caracterizado por análise citológica e ultraestrutural após ensaio de diferenciação induzido por meios comerciais específicos e ensaio não induzido, onde as CTMs foram mantidas apenas nos meios basais. Aparente formação de matriz extracelular nas CTMs-TA cultivadas em 10% de SFB e não induzidas a diferenciação sugere possível ocorrência de diferenciação espontânea nesse grupo. Adicionalmente, foi realizada caracterização imunofenotípica das CTMs-TA, com o objetivo de construir um banco de células aplicáveis in vivo.

Bone marrow (BM) and adipose tissue (AT) are viable sources of mesenchymal stem cells (MSCs), which high potential for proliferation and differentiation, in addition to immunomodulatory property allows wide application in Veterinary Medicine, obtaining satisfactory results in reconstruction of damaged tissues. Several protocols are described for isolation and culture of MSCs, although with divergences in percentage of fetal calf serum supplementation (FCS), a xenogenic component indicated as a possible factor for in vitro differentiation process. This study examined the proliferation, induced and non-induced differentiation of MSCs from AT and BM cultured in 10 or 20% FBS, and demonstrated that MSCs cultured in 20% FBS show higher in vitro proliferation efficiency, and proliferation in vitro of MSC-AT are higher compared to MSCs-BM. The differentiation potential of MSCs-AT and BM were characterized by cytological and ultrastructural analysis after differentiation assay induced by specific commercial media and not induced assay, where MSCs were maintained only in the basal media. Apparent formation of extracellular matrix in MSCs-AT cultured in 10% FBS and non-induced to differentiation, which suggests possible occurrence of spontaneous differentiation in this group. Additionally, immunophenotypic characterization was performed of MSCs-TA, with the aim of mantain a cell bank to in vivo application.

Caracterização imunofenotípica e avaliação quantitativa do infiltrado linfocítário junto às áreas de displasia epitelial da próstata de cães adultos sexualmente intactos

Canine prostatic studies have been common due to high incidence of prostatic diseases in these animals and similarities with alterations in human prostatic gland. Due the high frequency of dysplasia associated with interstitial lymphocitary infiltrate and acinar atrophy in canine prostate, the aims in this study were the immunophenotypic characterization and the quantitative evaluation of the same infiltrated using anti-CD3 and anti-CD79a to T and B lymphocytes, respectively. Forty two epithelial dysplasic lesions were graduated in discrete (48%), moderate (38%) and accentuated (14%). Lymphocitary periacinar infiltrate in dysplasic areas was T type and interaction between dysplasia grade and marker was observed, with oscillation of T and B cells in according with epithelial dysplasia grade.

O estudo da próstata canina tem se tornado comum em razão da grande incidência de doenças prostáticas nessa espécie e das similaridades com as alterações apresentadas pela glândula prostática humana. Frente à alta frequência de displasias epiteliais acompanhadas de infiltrado linfocitário intersticial e atrofia acinar na espécie canina, o presente estudo teve como objetivos a caracterização imunofenotípica e a avaliação quantitativa desse infiltrado, utilizando marcadores para identificação de linfócitos T (anti-CD3) e B (anti-CD79a). Foram catalogadas 42 lesões displásicas classificadas em discreta (48%), moderada (38%) e acentuada (14%). O infiltrado linfocitário intersticial periacinar junto às áreas de epitélio prostático displásico constituiu-se predominantemente por linfócitos T (66%) e houve interação entre o grau histológico da displasia e o marcador imunoistoquímico, com oscilação na quantidade de células T e B intersticiais em função do grau da displasia epitelial.