Perinatal glyphosate-based herbicide impaired maternal behavior by reducing the striatal dopaminergic activity and delayed the offspring reflex development / A administração perinatal do herbicida à base do glifosato prejudicou o comportamento maternal por reduzir a atividade do sistema dopaminérgico estriatal e atrasou o desenvolvimento de reflexos da prole

Glyphosate, a non-selective herbicide, causes in mammals’ cellular mutagenesisand toxic effects at the embryonic, fetal, and placental levels, even at lowconcentrations. This study investigated in rats the effects of perinatal exposureto glyphosate-base herbicide on maternal behavior and the hypothalamic andstriatal levels of dopamine and serotonin. The pup’s physical and behavioraldevelopment were observed. Glyphosate-base herbicide (50 or 150 mg/kg, peros) was administered in dams during gestation (15º gestational day to 7ºlactation day. The female body weight was recorded throughout the pregnancyand lactation. The dams’ reproductive performance was observed at postnatalday 2, the open field behavior at postnatal day 5 and the maternal behavior atpostnatal day 6. At weaning, the dam’s hypothalamic and striatal levels ofdopamine and serotonin were measured. Maternal exposure to both glyphosatebase herbicide doses: i) had few effects on maternal body weight gain; ii)decreased the number and body weight of the pups; iii) impaired the maternalcare; iv) both doses decreased the activity of striatal and hypothalamic dopaminergic systems; v) 50 mg/kg increased and 150 mg/kg decreased theserotoninergic hypothalamic activity. In offspring, no effects on physicaldevelopment but a delay on reflex development. Conclusions: perinatal exposureto glyphosate-base herbicide decreased the maternal care by a reduced striataldopaminergic activity and delayed the pup’s reflex development.

O glifosato é um herbicida não seletivo, que causa mutagênese celular e efeitostóxicos embrionário, fetal e placentário, mesmo em baixas concentrações. Esteestudo investigou, em ratos, os efeitos da exposição perinatal ao herbicida àbase de glifosato sobre o comportamento materno e os níveis hipotalâmicos eestriatais de dopamina e serotonina. O desenvolvimento físico e comportamentaldos filhotes foi observado. O herbicida (50 ou 150 mg / kg, per os) foiadministrado às mães durante a gestação (15º dia gestacional ao 7º dia delactação. O peso corporal foi registrado durante a gestação e lactação Odesempenho reprodutivo das mães foi observado no dia pós-natal 2, ocomportamento de campo aberto no dia pós-natal 5 e o comportamento maternono dia pós-natal 6. Ao desmame os níveis hipotalâmicos e estriatais da dopaminae da serotonina foram medidos. A exposição materna às duas doses do glifosato:i) teve poucos efeitos sobre o ganho de peso corporal materno; ii) diminuiu onúmero e peso corporal dos filhotes; iii) prejudicou o cuidado materno; iv)ambas as doses diminuíram a atividade dos sistemas dopaminérgicos estriatal ehipotalâmico; v) 50 mg / kg e 150 mg / kg do glifosato diminuíram a atividadehipotalâmica serotoninérgica. Na prole, não houve efeitos no desenvolvimentofísico, mas observou-se atraso no desenvolvimento reflexológico. Poucos efeitosna atividade geral do filhote foram observados. Conclusões: a exposiçãoperinatal ao herbicida à base de glifosato diminuiu o cuidado materno por umaatividade redução da atividade dopaminérgica estriatal e atrasou odesenvolvimento dos reflexos dos filhotes.

Perinatal glyphosate-based herbicide impaired maternal behavior by reducing the striatal dopaminergic activity and delayed the offspring reflex development / A administração perinatal do herbicida à base do glifosato prejudicou o comportamento maternal por reduzir a atividade do sistema dopaminérgico estriatal e atrasou o desenvolvimento de reflexos da prole

Glyphosate, a non-selective herbicide, causes in mammals cellular mutagenesisand toxic effects at the embryonic, fetal, and placental levels, even at lowconcentrations. This study investigated in rats the effects of perinatal exposureto glyphosate-base herbicide on maternal behavior and the hypothalamic andstriatal levels of dopamine and serotonin. The pups physical and behavioraldevelopment were observed. Glyphosate-base herbicide (50 or 150 mg/kg, peros) was administered in dams during gestation (15º gestational day to 7ºlactation day. The female body weight was recorded throughout the pregnancyand lactation. The dams reproductive performance was observed at postnatalday 2, the open field behavior at postnatal day 5 and the maternal behavior atpostnatal day 6. At weaning, the dams hypothalamic and striatal levels ofdopamine and serotonin were measured. Maternal exposure to both glyphosatebase herbicide doses: i) had few effects on maternal body weight gain; ii)decreased the number and body weight of the pups; iii) impaired the maternalcare; iv) both doses decreased the activity of striatal and hypothalamic dopaminergic systems; v) 50 mg/kg increased and 150 mg/kg decreased theserotoninergic hypothalamic activity. In offspring, no effects on physicaldevelopment but a delay on reflex development. Conclusions: perinatal exposureto glyphosate-base herbicide decreased the maternal care by a reduced striataldopaminergic activity and delayed the pups reflex development.(AU)

O glifosato é um herbicida não seletivo, que causa mutagênese celular e efeitostóxicos embrionário, fetal e placentário, mesmo em baixas concentrações. Esteestudo investigou, em ratos, os efeitos da exposição perinatal ao herbicida àbase de glifosato sobre o comportamento materno e os níveis hipotalâmicos eestriatais de dopamina e serotonina. O desenvolvimento físico e comportamentaldos filhotes foi observado. O herbicida (50 ou 150 mg / kg, per os) foiadministrado às mães durante a gestação (15º dia gestacional ao 7º dia delactação. O peso corporal foi registrado durante a gestação e lactação Odesempenho reprodutivo das mães foi observado no dia pós-natal 2, ocomportamento de campo aberto no dia pós-natal 5 e o comportamento maternono dia pós-natal 6. Ao desmame os níveis hipotalâmicos e estriatais da dopaminae da serotonina foram medidos. A exposição materna às duas doses do glifosato:i) teve poucos efeitos sobre o ganho de peso corporal materno; ii) diminuiu onúmero e peso corporal dos filhotes; iii) prejudicou o cuidado materno; iv)ambas as doses diminuíram a atividade dos sistemas dopaminérgicos estriatal ehipotalâmico; v) 50 mg / kg e 150 mg / kg do glifosato diminuíram a atividadehipotalâmica serotoninérgica. Na prole, não houve efeitos no desenvolvimentofísico, mas observou-se atraso no desenvolvimento reflexológico. Poucos efeitosna atividade geral do filhote foram observados. Conclusões: a exposiçãoperinatal ao herbicida à base de glifosato diminuiu o cuidado materno por umaatividade redução da atividade dopaminérgica estriatal e atrasou odesenvolvimento dos reflexos dos filhotes.(AU)

Desenvolvimento Físico e Neurocomportamental de Prole de Ratas Wistar após Tratamento com Ipriflavona durante a Lactação Plena / Physical and neurobehavioral development of rat offspring after maternal exposure to ipriflavoneduring lactation

A Ipriflavona (7-isopropoxi-3-fenil-4H-benzopiran-4-ona), um derivado sintético da isoflavona daidzeína, com ação estrogênica comprovada tem sido utilizado por mulheres com objetivo de aumentar a densidade óssea e prevenir a perda óssea. Estudos de toxicologia reprodutiva no período pré-implantacional apontam indícios de toxicidade, interferindo na implantação do blastocisto. Também foi demonstrado que a ipriflavona interfere na via de sinalização Hedgehog, importante no período de desenvolvimento embrionário. Estudos demonstram que as isoflavonas são transferidas para o leite materno o que poderia ocasionar danos a prole. Porém não foram encontrados estudos de toxicologia no período de lactação e desenvolvimento das crias utilizando-se da ipriflavona, sendo este o objetivo desse trabalho. Para o estudo foram utilizadas 48 ratas Wistar. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais (n = 12): controle experimental e tratados I, II e III. O grupo controle experimental recebeu via intragástrica, duas vezes ao dia, do 2º ao 16º dia de lactação, 1 ml de água destilada e os grupos tratados receberam; pelo mesmo procedimento, 1 ml de suspensão aquosa de ipriflavona nas doses de 300, 1500 e 3000mg/kg/dose, respectivamente. As variáveis maternas analisadas foram: presença de sinais clínicos de toxicidade; ganho de peso corporal e consumo de ração. Foram observados comportamentos maternais como: postura de amamentação, organização e manutenção do ninho, ato de recuperar, recolher filhotes e lambê-los. Os filhotes foram analisados quanto ao desenvolvimento físico e reflexológico. Como variáveis de desenvolvimento físico foram analisados: peso corporal, abertura dos olhos, desdobramento das orelhas, aparecimento de lanugo e pêlos, erupção dos incisivos superiores e inferiores, a abertura vaginal ou descida dos testículos...(AU)

The Ipriflavone (7-isopropoxy-3-phenyl-4H-benzopyran-4-one), a synthetic derivative of the isoflavone daidzein, with proven estrogenic activity has been used by women in order to increase bone density and prevent bone loss. Reproductive toxicology studies in the pre-implantation show signs of toxicity, which interferes with implantation of the blastocyst. It was also shown that ipriflavone affects the Hedgehog signaling pathway, important during embryonic development. Studies show that isoflavones are transferred to breast milk which can cause damage to offspring. However no studies were found in toxicology during lactation and development of offspring using the ipriflavone, which is the aim of this work. For the study were used 48 female rats. The animals were randomly divided into four groups (n = 12) experimental control and treated I, II and III. The experimental control group received intragastrically, twice a day, from the 2nd to the 16th days of lactation, 1 ml of distilled water and the treated groups received, by the same procedure, 1 ml of water suspension of ipriflavone at doses of 300, 1500 and 3000mg / kg / dose, respectively. Maternal variables were analyzed: presence of clinical signs of toxicity, body weight gain and feed intake. Maternal behaviors were observed as: breastfeeding posture, organization and maintenance of the nest, the act of recovering, collect pups and licking them. The pups were assessed for physical development and reflexology. As physical variables were analyzed: body weight, eye opening, unfolding of the ears, and appearance of lanugo hair, eruption of upper and lower incisors, the vaginal opening or descent of the testicles. For observing the reflexology development were made the following tests: grip, posture response, dodging the abyss, orientation, and negative geotaxis. In the experimental model studied ipriflavone showed no signs of maternal toxicity, or changes in the physical and reflexology development of offspring.(AU)

Desenvolvimento Físico e Neurocomportamental de Prole de Ratas Wistar após Tratamento com Ipriflavona durante a Lactação Plena / Physical and neurobehavioral development of rat offspring after maternal exposure to ipriflavoneduring lactation

A Ipriflavona (7-isopropoxi-3-fenil-4H-benzopiran-4-ona), um derivado sintético da isoflavona daidzeína, com ação estrogênica comprovada tem sido utilizado por mulheres com objetivo de aumentar a densidade óssea e prevenir a perda óssea. Estudos de toxicologia reprodutiva no período pré-implantacional apontam indícios de toxicidade, interferindo na implantação do blastocisto. Também foi demonstrado que a ipriflavona interfere na via de sinalização Hedgehog, importante no período de desenvolvimento embrionário. Estudos demonstram que as isoflavonas são transferidas para o leite materno o que poderia ocasionar danos a prole. Porém não foram encontrados estudos de toxicologia no período de lactação e desenvolvimento das crias utilizando-se da ipriflavona, sendo este o objetivo desse trabalho. Para o estudo foram utilizadas 48 ratas Wistar. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais (n = 12): controle experimental e tratados I, II e III. O grupo controle experimental recebeu via intragástrica, duas vezes ao dia, do 2º ao 16º dia de lactação, 1 ml de água destilada e os grupos tratados receberam; pelo mesmo procedimento, 1 ml de suspensão aquosa de ipriflavona nas doses de 300, 1500 e 3000mg/kg/dose, respectivamente. As variáveis maternas analisadas foram: presença de sinais clínicos de toxicidade; ganho de peso corporal e consumo de ração. Foram observados comportamentos maternais como: postura de amamentação, organização e manutenção do ninho, ato de recuperar, recolher filhotes e lambê-los. Os filhotes foram analisados quanto ao desenvolvimento físico e reflexológico. Como variáveis de desenvolvimento físico foram analisados: peso corporal, abertura dos olhos, desdobramento das orelhas, aparecimento de lanugo e pêlos, erupção dos incisivos superiores e inferiores, a abertura vaginal ou descida dos testículos...

The Ipriflavone (7-isopropoxy-3-phenyl-4H-benzopyran-4-one), a synthetic derivative of the isoflavone daidzein, with proven estrogenic activity has been used by women in order to increase bone density and prevent bone loss. Reproductive toxicology studies in the pre-implantation show signs of toxicity, which interferes with implantation of the blastocyst. It was also shown that ipriflavone affects the Hedgehog signaling pathway, important during embryonic development. Studies show that isoflavones are transferred to breast milk which can cause damage to offspring. However no studies were found in toxicology during lactation and development of offspring using the ipriflavone, which is the aim of this work. For the study were used 48 female rats. The animals were randomly divided into four groups (n = 12) experimental control and treated I, II and III. The experimental control group received intragastrically, twice a day, from the 2nd to the 16th days of lactation, 1 ml of distilled water and the treated groups received, by the same procedure, 1 ml of water suspension of ipriflavone at doses of 300, 1500 and 3000mg / kg / dose, respectively. Maternal variables were analyzed: presence of clinical signs of toxicity, body weight gain and feed intake. Maternal behaviors were observed as: breastfeeding posture, organization and maintenance of the nest, the act of recovering, collect pups and licking them. The pups were assessed for physical development and reflexology. As physical variables were analyzed: body weight, eye opening, unfolding of the ears, and appearance of lanugo hair, eruption of upper and lower incisors, the vaginal opening or descent of the testicles. For observing the reflexology development were made the following tests: grip, posture response, dodging the abyss, orientation, and negative geotaxis. In the experimental model studied ipriflavone showed no signs of maternal toxicity, or changes in the physical and reflexology development of offspring.

Experimental exposure to 3-monochloropropane-1,2-diol from the pre-puberty causes damage in sperm production and motility in adulthood / Exposição experimental ao 3-monocloropropano-1,2-diol, a partir da pré-puberdade, causaalteração na produção e motilidade espermática na idade adulta

3-Monochloropropane-1,2-diol (3-MCPD) is a food contaminant that can be formed during the thermic processing of various foodstuffs. Studies of reproductive toxicology of 3-MCPD are mainly concentrated in the evaluation of possible insults caused by exposure of adult animals. However, the prepuberty might be a period of different susceptibility to chemicals. The aim of this study was to evaluate the effects on reproductive endpoints of the 3-MCPD-exposure prepubertal male rats. Wistar male rats were assigned to 4 groups: control and exposed to 2.5; 5 or 10 mg kg-1 day-1 of 3-MCPD for 30 days by gavage. Testis and epididymis were used for sperm counts and histology analysis. Sertoli cell number and dynamic of the spermatogenesis were evaluated. Sperm were collected from the vas deferens for evaluation of the sperm motility and morphology. Number of sperm with progressive movement, number of Sertoli cells and germ cells and relative daily sperm production were decreased in the groups exposed to 5 and 10 mg kg-1 day-1 of 3-MCPD. Sperm morphology, testicular and epididymal histology were comparable among groups. Results show that 3-MCPD-exposure of rats from prepuberty might cause alterations in spermatogenesis and sperm maturation, similarly to exposure in adulthood.(AU)

3-monocloropropano-1,2-diol (3-MCPD) é um contaminante alimentar formado durante o processamento térmico de vários produtos. Estudos de toxicologia reprodutiva do 3-MCPD estão concentrados principalmente na avaliação de danos causados pela exposição de animais adultos. No entanto, a peri-puberdade pode ser um período de susceptibilidade diferente a produtos químicos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos reprodutivos da exposição de ratos machos pré-púberes ao 3- MCPD. Ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos: controle e expostos a 2,5; 5 ou 10 mg kg-1 dia-1 de 3-MCPD durante 30 dias, por gavagem. Os testículos e epidídimos foram usados para contagem espermática e análise histológica. Foram avaliados o número de células de Sertoli e a dinâmica da espermatogênese. Espermatozoides foram coletados a partir dos ductos deferentes para avaliação da motilidade e morfologia. O número de espermatozoides com movimento progressivo, o número de células de Sertoli e de células germinativas e a produção espermática foram reduzidos nos grupos expostos a 5 e 10 mg kg-1 dia-1 de 3-MCPD. A morfologia espermática e histologia testicular e epididimária foram semelhantes entre os grupos. Os resultados mostram que a exposição de ratos ao 3-MCPD, a partir da prépuberdade, pode causar alterações na espermatogênese e na maturação espermática, de forma semelhante à exposição na idade adulta.(AU)

ESTUDOS DE TOXICOLOGIA PRÉ CLÍNICA DE UMA FORMULAÇÃO CONTENDO DERIVADOS DE CANNABIS SATIVA

O Brasil apresenta historicamente em seu cotidiano o uso de plantas e substâncias com ações calmantes, analgésicas dentre outros efeitos. Avanços na pesquisa com plantas medicinais apresentaram efetividade de tais substâncias, e o uso de ativos extraídos de plantas como a Cannabis sativa, maconha como é conhecida popularmente, tem demonstrado eficácia em tratamentos diversos, sendo uma alternativa em potencial para doenças do sistema nervoso central, porém seu uso é limitado devido à questões políticas e culturais. O objetivo do presente estudo foi realizar a comprovação de segurança de uma formulação contendo Canabidiol (CBD) 200mg/ml em solução de administração oral, com testes de avaliação pré-clínica que visam constatar possíveis alterações de parâmetros bioquímicos, hematológicos, alterações em órgãos alvo de metabolismo e avaliação do perfil reprodutivo dos animais a serem testados. Ratos e coelhos foram submetidos à tratamentos agudos e crônicos com diferentes dosagens da formulação de CBD, calculadas via extrapolação alométrica (33, 99 e 297 mg/Kg via oral, e 297 mg/Kg intraperitoneal em ratos, e 17, 51 e 153 mg/Kg via oral, e 153 mg/Kg intraperitoneal em coelhos). Todos protocolos experimentais foram realizados de acordo com as diretrizes da Organization for Economic Co-Operation and Development OECD e Agência Nacional de Vigilância Sanitária ANVISA, bem como também com aprovação no Comitê de Ética em Pesquisa Envolvendo Animais CEPEA da UNIPAR. Os números de animais utilizados em ambos os protocolos foram minimizados de acordo com as diretrizes internacionais em relação à redução de animais utilizados em pesquisa. Testes de toxicidade aguda e crônica aplicados em ambas espécies utilizadas neste estudo demostraram segurança da formulação nas doses e vias administradas, pois não ocorreram alterações significativas nos parâmetros avaliados, bem como não foram observadas macro e microscopicamente alterações nos órgãos alvos de metabolismo. Após realização dos protocolos de toxicidade reprodutiva, não se observou alteração nos parâmetros de fertilidade e reprodução, bem como também nos fetos oriundos das fêmeas submetidas aos tratamentos propostos. Tais resultados nos fornecem preditivos para a segurança da formulação com CBD 200 mg/ml para administração oral, de acordo com os protocolos experimentais realizados neste estudo. Os testes pré-clínicos fazem parte de uma etapa dentro da grande complexidade que é o processo para obtenção do registro de medicamento a partir de substâncias ativas. Tais testes são primordiais, pois são eles que nos indicam a possibilidade da continuidade dos estudos clínicos com substâncias ativas.

Brazil has historically presented in its daily life the use of plants and substances with calming actions, analgesics, among other effects. Advances in research with medicinal plants have shown the effectiveness of such substances, and the use of actives extracted from plants such as Cannabis sativa, marijuana as it is popularly known, has shown efficacy in several treatments, being a potential alternative for diseases of the central nervous system, however its use is limited due to political and cultural issues. The aim of this study was to prove the safety of a formulation containing Cannabidiol (CBD) 200mg/ml in a solution for oral administration, with pre-clinical evaluation tests aimed at verifying possible changes in biochemical and hematological parameters, changes in target organs of metabolism and evaluation of the reproductive profile of the animals to be tested. Rats and rabbits were subjected to acute and chronic treatments with different dosages of the CBD formulation, calculated via allometric extrapolation (33, 99 and 297 mg/kg orally, and 297 mg/kg intraperitoneally in rats, and 17, 51 and 153 mg /kg orally, and 153 mg/kg intraperitoneally in rabbits). All experimental protocols were carried out in accordance with the guidelines of the Organization for Economic Co- Operation and Development OECD and the National Health Surveillance Agency ANVISA, as well as with approval by the Ethics Committee on Research Involving Animals CEPEA at UNIPAR. The numbers of animals used in both protocols were minimized in accordance with international guidelines regarding the reduction of animals used in research. Acute and chronic toxicity tests applied to both species used in this study demonstrated the safety of the formulation in the doses and routes administered, as there were no significant changes in the evaluated parameters, as well as macro and microscopic changes in Organs target organs of metabolism were not observed. After carrying out the reproductive toxicity protocols, there was no change in fertility and reproduction parameters, as well as in fetuses from females submitted to the proposed treatments. These results provide us with predictors for the safety of the formulation with CBD 200 mg/ml for oral administration, according to the experimental protocols carried out in this study. Pre-clinical tests are part of a step within the great complexity of the process for obtaining drug registration from active substances. Such tests are essential, as they indicate the possibility of continuing clinical studies with active substances.

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE CRÔNICA E REPRODUTIVA DA OLEUROPEÍNA (SEGMENTO I) EM RATOS WISTAR

A Olea europaea L. (oliveira) é uma árvore frutífera, originária do mediterrâneo e disseminada por diversos países, incluindo o Brasil, onde seu cultivo encontra-se em ascensão. É considerada um dos cultivares mais antigos do planeta, sendo reconhecida por sua ampla gama de atividades biológicas, as quais são atribuídas aos seus compostos fenólicos. A oleuropeína é o composto fenólico majoritário da Olea europaea L., presente em grandes concentrações na planta. Com o objetivo de determinar a segurança no uso dessa substância, o presente estudo avaliou o potencial de toxicidade crônica e reprodutiva da oleuropeína, sobre a fertilidade e o desenvolvimento ponderal de ratos Wistar machos e fêmeas, sendo o segmento I de um estudo mais amplo, composto por 3 segmentos. Constituíram-se quatro grupos experimentais compostos por 30 fêmeas e 10 machos cada: CN (controle negativo água destilada), G1(oleuropeína 500 mg/kg/dia), G2 (oleuropeína 1000 mg/kg/dia) e G3 (oleuropeína 2000 mg/kg/dia). Os machos foram tratados antes (70 dias) e durante o acasalamento (21 dias), e as fêmeas antes (14 dias) e durante o acasalamento (máximo de 21 dias), gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Para identificar alterações toxicológicas nos animais, foram avaliados: consumo relativo de água e ração, evolução do peso corporal, peso relativo dos órgãos e histopatologia, taxas reprodutivas e sinais de toxicidade. Nos machos foi avaliado ainda, dosagem de testosterona, número e morfologia espermática. Os resultados não demonstraram prejuízos nos parâmetros reprodutivos avaliados em nenhum grupo tratado, contrariamente nos machos, foram observados aumentos significativos na produção diária de espermatozoides em G2 (275,59 ± 27,20) e G3 (261,94 ± 47,84). O G2 também apresentou as maiores dosagens de testosterona (6,47±1,42) e menor número de espermatozoides anormais (5,61 ± 0,69). Nas fêmeas, o G2 apresentou elevação nas taxas de gestação (95,85%) e natalidade (100%). Os machos dos três grupos tratados com oleuropeína apresentaram aumento do peso relativo do fígado (G1 = 3,92 ± 0,11; G2 = 3,89 ± 0,09; G3 = 4,29 ± 0,16), quando comparados ao grupo controle (3,31 ± 0,10), todavia não foram observadas alterações histopatológicas hepáticas ou em qualquer outro órgão avaliado. Foram observadas oscilações nos consumos de água e alimento dos três grupos experimentais durante esse estudo, mais evidenciado nos animais do G3 no início do período pré-acasalamento, onde machos e fêmeas tiveram menores consumos de alimento e menores ganhos de peso, diminuições que não se mantiveram ao longo do tempo bem como não ocorreram outras alterações sistêmicas, sugerindo uma adaptação por parte dos animais. Ninhadas mais leves ao nascer foram observadas em G2 (6,90 ± 0,05) e G3 (6,52 ± 0,07), além disso, as fêmeas de G3 tiveram menor ganho de peso durante os últimos dias do período gestacional, sinais que podem sugerir toxicidade materna. Esses resultados fazem da oleuropeína uma substância promissora devido a sua ação benéfica sobre parâmetros de fertilidade masculina, todavia sugere-se cautela no seu uso durante o período gestacional, especialmente em altas doses.

Olea europaea L. (olive tree) is a fruit tree of Mediterranean origin and disseminated in several countries, including Brazil, where its cultivation is growing. It is considered one of the oldest cultivars on the planet, being recognized for its wide range of biological activities, which are attributed to its phenolic compounds. Oleuropein is the major phenolic compound of Olea europaea L., present in high concentrations in the plant. In order to determine its safety use, the present study evaluated the chronic and reproductive potential toxicity of oleuropein, over fertility and body development of male and female Wistar rats. It was segment I of a larger study, which comprised 3 segments. Four experimental groups were formed: CN (negative control - distilled water), G1 (oleuropein 500 mg / kg / day), G2 (oleuropein 1000 mg / kg / day) and G3 (oleuropein 2000 mg / kg /day). Males were treated before (70 days) and during mating (21 days), and females before (14 days) and during mating (21 days maximum), gestation (21 days) and lactation (21 days). To identify male and female reproductive system changes, we evaluated relative water and feed consumption, body weight evolution, relative organs weight and histopathology, reproductive rates and toxicity sings. In males, we also evaluated testosterone dosage, sperm number and morphology. Results showed no impairment on evaluated reproductive parameters in any treated group, contrary in males were observed a significant increase in daily sperm production in G2 (275,59 ± 27,20) and G3 (261,94 ± 47,84). G2 also presented higher testosterone levels (6,47 ± 1,42) and lower number of abnormal sperm (5,61 ± 0,69). In females, G2 showed an increase in pregnancy (95,85%) and birth (100%) rates. Males of the three oleuropein treated groups showed relative liver weight increase (G1 = 3,92 ± 0,11; G2 = 3,89 ± 0,09; G3 = 4,29 ± 0,16), when compared to the control group (3,31 ± 0,10), however, no histopathological changes in liver or any other evaluated organs were observed. Fluctuations in water and food consumption of the three experimental groups were observed during this study, which was more evident at the beginning of pre-mating period in G3 animals, were males and females had lower food consumptions and lower weight gains, decreases that were not maintained over time and there were no other systemic changes, suggesting an adaptation of these animals. Litters birth weights were lower in G2 (6,90 ± 0,05) and G3 (6,52 ± 0,07), moreover, G3 females also had less weight gain during the latest gestational days, signs that may suggest maternal toxicity. These results make oleuropein a promising substance due its beneficial action on male fertility parameters, however caution is suggested in its use during pregnancy, especially in high doses.

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE PRÉ-NATAL: ESTUDO DE TERATOGENICIDADE (SEGMENTO II) DA OLEUROPEINA EM RATOS WISTAR

A Olea europaea pertence à família das Oleaceas, e é uma planta conhecida mundialmente pela produção de azeite. E a oleuropeina é o principal constituinte da Oliveira (Olea europaea). Seus benefícios como sua atividade antimicrobiana, antioxidante, anticancerígena, sua eficácia no tratamento de doenças crônicas como alterações cardiovasculares e diabetes, vêm sendo estudada há muitas décadas por cientistas do mundo inteiro. Considerando-se escassos os dados disponíveis sobre a toxicidade do uso da oleuropeina em fêmeas gestantes, este trabalho tem como objetivo a avaliação da toxicidade pré-natal em ratas Wistar e detecção de possíveis malformações externas e alterações esqueléticas na progênie exposta durante a fase da organogênese. Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais: G1 (oleuropeina 500mg/kg-1), G2 (oleuropeina 1000mg/kg-1), G3 (oleuropeina 2000mg/kg-1) e GC (controle). As fêmeas foram tratadas por gavagem, com auxílio de sonda orogástrica, do 6º ao 15º dia de gestação, conforme segmento II, recomendados pela Organization for Economic Cooperation and Development (2001) e Food and Drug Administration (1994). Durante a gestação, as progenitoras foram monitoradas quanto às alterações de massa corporal relativa, consumo de água e ração. No 21º dia de gestação, as fêmeas foram eutanasiadas para avaliação reprodutiva, teratogênica e de variáveis sistêmicas. Os fetos foram avaliados quanto à embriotoxicidade e à presença de malformações externas e alterações esqueléticas. Os resultados demonstraram que apesar de não terem apresentado diarréia, piloereção, tremores, hemorragias ou outras alterações sistêmicas, o grupo que recebeu 2000 mg/kg-1 demonstrou um grau de toxicidade materna. Não foram detectadas alterações teratogênicas, nem malformações externas nos fetos avaliados, no entanto, ficou evidente que os animais tratados com oleuropeina apresentaram aumento significativo de alterações esqueléticas sugestivas de retardo de desenvolvimento ósseo. Diante dos resultados encontrados pode-se concluir que o uso de oleuropeina na fase de organogênese em progenitoras de ratos Wistar, pode provocar um retardo no desenvolvimento ósseo dos fetos. Além de apresentar um potencial de toxicicidade materna na dose de 2000 mg/kg-1. Frente aos resultados obtidos com o presente trabalho, é recomendado cautela no uso de oleuropeina nas doses de 500 a 2000mg/kg em fêmeas no período de gestação.

Olea europaea belongs to the Oleaceas family, is a plant known worldwide for the production of olive oil and oleuropein is the main constituent of Oliveira (Olea europaea). Its benefits such as its antimicrobial, antioxidant, anticancer activity, effectiveness on treatment of chronic diseases such as cardiovascular disorders and diabetes, have been studied for many decades by scientists worldwide. Considering the lack of available data on the toxicity of the use of oleuropein in pregnant females, this study aims to assess prenatal toxicity in Wistar rats and detect possible external malformations and skeletal changes in the progeny exposed during the phase of organogenesis. The animals were divided into four experimental groups: G1 (oleuropein 500mg / kg-1), G2 (oleuropein 1000mg / kg1), G3 (oleuropein 2000mg / kg-1) and CG (control). The females were treated by gavage, with the aid of an orogastric tube, from the 6th to the 15th day of pregnancy, according to segment II, recommended by the Organization for Economic Cooperation and Development (2001) and Food and Drug Administration (1994). During pregnancy, parents were monitored for changes in relative body mass, water consumption and feed. On the 21st day of pregnancy, the females were euthanized for reproductive, teratogenic and systemic variables evaluation. The fetuses were evaluated for embryotoxicity and for the presence of external malformations and skeletal changes. The results showed that despite not having diarrhea, piloerection, tremors, hemorrhages or other systemic changes, the group that received 2000 mg / kg-1 demonstrated a degree of maternal toxicity. No teratogenic changes or external malformations were detected in the evaluated fetuses; However, it was evident that animals treated with oleuropein showed a significant increase in skeletal changes suggestive of delayed bone development. In view of the results found, it can be concluded that the use of oleuropein in the organogenesis phase in progenitors of Wistar rats, may cause a delay in the bone development of fetuses. In addition to presenting a potential for maternal toxicity at a dose of 2000 mg / kg-1. Based on the results obtained with the present study, caution is recommended in the use of oleuropein in doses between 500 to 2000mg / kg in females during pregnancy. Keywords: Toxicology. Teratogeny. Oliveira. Organogenesis.

EXPOSIÇÃO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS AO VITANOLIDO D: ANÁLISE E TENTATIVA DE REDUÇÃO DOS EFEITOS TÓXICOS USANDO A MELATONINA

O vitanolido D (VD) tem sido mencionado como um potencial candidato a quimioterápico, porém seus efeitos tóxicos podem ser deletérios à reserva folicular ovariana, comprometendo a fertilidade feminina. Por outro lado, a associação do VD a substâncias citoprotetoras como a melatonina (MT) poderá minimizar os efeitos indesejáveis. O objetivo deste estudo foi avaliar se a MT é capaz de atenuar os efeitos do VD sobre folículos pré-antrais (primordiais e em desenvolvimento) caprinos in situ (fase I) ou folículos secundários isolados (fase II). Para isso, foram avaliados a morfologia e desenvolvimento folicular, bem como a expressão de proteínas envolvidas nos danos ao DNA (ATM e H2AX), apoptose (caspase-3 ativa) ou defesa do oócito (TAp63). Na fase I, fragmentos ovarianos foram incubados por 48 h na presença de: (1) - MEM; (2) -MEM + 6 M de VD; (3) -MEM + 3 mmol/L de MT e (4) -MEM + 6,0 M de VD + 3 mmol/L de MT. Na fase II, folículos secundários isolados foram incubados por até 96 h em: (1) apenas meio de cultivo (-MEM++/-MEM++); (2) -MEM++ + 3 mmol/L (MT/MT); (3) -MEM++ por até 48 h, seguido por mais 48 h de incubação na presença do VD 6 M (-MEM++/WD) ou (4) de MT 3 mmol/L por até 48 h, seguido por mais 48 h de exposição ao VD 6 M e MT 3 mmol/L (MT/MT + WD). Os resultados revelaram uma redução no percentual de folículos pré-antrais (in situ) normais após 48h de exposição ao VD ou VD + MT comparada às condições in vivo ou controle. O diâmetro dos folículos primordiais expostos ao VD foi reduzido, comparado aos demais tratamentos. Na fase II, foi observada uma redução no percentual de folículos secundários normais expostos ao VD e à MT, associados. Além disso, o diâmetro folicular na presença do VD sozinho ou associado à MT foi reduzido. No tocante à expressão de proteínas, na fase I, o percentual de folículos positivamente marcados para ATM foi maior na presença das drogas, enquanto que a marcação para H2AX, na presença do VD foi superior ao controle ou à MT. Na fase II, foi observada marcação positiva para ATM, H2AX em folículos isolados de todos os tratamentos. Resultados similares foram observados para a TAp63 nos folículos das fases I e II. Em conclusão, este estudo mostrou que a melatonina não conferiu proteção aos folículos pré-antrais e pode ter aumentado o efeito tóxico do VD aos folículos presentes ou fora do córtex ovariano.

The withanolide D (WD) is a candidate to chemotherapeutic of phytotherapeutic origin with high toxicity on tumor and healthy cells. However, the use of melatonin (MT) as a protector agent against damages caused by WD on ovarian function was not yet investigated. The aim of the present study was to evaluate if melatonin is able of mitigating toxic effects of WD exposure to preantral follicles in situ (phase I) or isolated secondary follicles (phase II) on follicular morphology and development, as well as damage to DNA. In phase I, fragments were exposed to WD for 48 h in the following treatments: (1) -MEM; (2) -MEM plus 6 M WD; (3) - MEM plus 3 mmol/L MT or (4) -MEM plus 6,0 M WD and 3 mmol/L MT. In phase II, secondary follicles were exposed for until 96 h in: (1) only to basic medium (-MEM++/- MEM++); (2) -MEM++ plus 3 mmol/L MT (MT/MT); (3) -MEM++ until 48 h, followed by more 48 h in 6 M WD (-MEM++/WD) or (4) a pre-exposure to 3 mmol/L MT for until 48 h, followed by more 48 h of exposure to 6 M WD plus 3 mmol/L MT (MT/MT + WD). In phase I, it was a reduction in the percentage of normal preantral follicles after 48 h of exposure to WD or WD + MT compared to control. The diameter of primordial follicles exposed to WD was lower than that of primordial follicles from other treatments. In addition, the percentage of positively stained follicles for ATM was higher in the presence of drugs, whereas for H2AX, in the presence of WD, the percentage of stained follicles was higher than control and MT. In phase II, it was observed a reduction in the percentage of normal follicles exposed to WD and MT associated. Furthermore, the diameter of follicles exposed to WD and to MT, alone or associated, was reduced. It was observed positive staining for ATM, H2AX and TAp63 in isolated follicles in all treatments. In conclusion, this study shows that WD was toxic during exposure of caprine preantral follicles in situ and melatonin was not able of exert a cytoprotector effect. Moreover, pre-exposure to melatonin followed by exposure to WD of isolated secondary follicles negatively affects follicular survival and growth.

Reproductive toxicity of Samanea tubulosa on rats / Toxicidade reprodutiva de Samanea tubulosa em ratos

Samanea tubulosa is a plant used for medicinal and feeding purposes. However, ingestion of S. tubulosa pods has been associated with bovine abortion. Thus, the aim of this work was to investigate the effects of diet containing 5% of S. tubulosa pod meal on male and female Wistar rats. Diet was administered to male rats (n = 10) for 60 days before mating. Female rats (n = 10) received the treatment for 30 days, during cohabitation and from gestational day (GD) 0 to GD20. Treated animals were mated with untreated rats. In male rats, plant consumption caused decreased food consumption and 20% fertility index reduction. Litters from treated males presented lower body weight and crownrump length. Female rats treated with the plant increased water and food intake and body weight. Decreases in fertility, fecundity and gestation indices and increase of placenta weight and mean number of corpora lutea were found. Thus, owing to the possible general and reproductive toxic effects, long-term consumption of S. tubulosa is not recommended for phytotherapic or food purposes(AU)

Samanea tubulosa é uma planta utilizada na fitoterapia e na alimentação animal. Entretanto, a ingestão de vagens de S. tubulosa tem sido associada à ocorrência de abortos em bovinos. Assim, o objetivo do trabalho foi investigar os efeitos da dieta contendo 5% de vagens de S. tubulosa em ratos machos e fêmeas Wistar. A dieta foi administrada para ratos machos (n = 10) por 60 dias antes do acasalamento. Ratos fêmeas (n = 10) receberam o tratamento por 30 dias, durante a coabitação e do dia gestacional (GD) 0 ao GD 20. As fêmeas tratadas foram acasaladas com ratos não tratados. Em machos, o consumo da planta causou diminuição no consumo de ração e redução de 20% no índice de fertilidade. A prole de machos tratados apresentou menor ganho de peso e comprimento cabeça cauda. Fêmeas tratadas com a planta apresentaram aumento do consumo de ração e água e do peso corporal. Ainda, foram observadas diminuição na fertilidade, fecundidade e no índice de gestação e aumento do peso da placenta e no número médio de corpos lúteos. Desse modo, em decorrência aos possíveis efeitos tóxicos sistêmicos e reprodutivos, o consumo prolongado de S. tubulosa não é recomendado para fins fitoterápicos ou alimentar(AU)

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE PRÉ-NATAL: ESTUDO DE TERATOGENICIDADE DO INSETICIDA PIRIPROXIFENO EM RATOS WISTAR

RESUMO O piriproxifeno é um pesticida análogo ao hormônio juvenil de insetos. A molécula age mimetizando o hormônio regulador de crescimento, impedindo que os insetos atinjam a maturidade ao interromper o desenvolvimento larval, o que resulta em sua morte. Recomendado pela Organização Mundial da Saúde para uso em água potável no controle da dengue, o piriproxifeno foi definido pelo Governo Brasileiro no ano de 2014, como uma das formas de controle focal das larvas do mosquito Aedes aegypti, após a detecção de populações de mosquitos resistentes aos inseticidas comumente utilizados no país. Contudo, o inseticida foi apontado como uma das possíveis causas da epidemia de microcefalia no Brasil ao final do ano de 2015. Considerando-se os escassos dados disponíveis sobre a toxicidade do piriproxifeno e a sua possível relação com o aumento da incidência de microcefalia em recém-nascidos, este estudo investigou a toxicidade reprodutiva do inseticida em ratos Wistar, avaliando seus efeitos no desenvolvimento fetal da progênie, bem como a presença de malformações externas e alterações esqueléticas nos animais expostos durante a fase da organogênese. Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais: 1P (piriproxifeno 100 mg.kg-1), 3P (piriproxifeno 300 mg.kg-1), 5P (piriproxifeno 500 mg.kg-1) e CN (controle negativo). As fêmeas foram tratadas por gavagem, com auxílio de sonda orogástrica, do 6° ao 15° dia de gestação, conforme segmento II, recomendados pela Organization for Economic Cooperation and Development (2001) e Food and Drug Administration (1994). Durante a gestação, as progenitoras foram monitoradas quanto às alterações de massa corporal relativa, consumo de água e ração. No 21° dia de gestação, as fêmeas foram eutanasiadas para avaliação reprodutiva, teratogênica e de variáveis sistêmicas. Os fetos foram avaliados quanto à embriotoxicidade e à presença de malformações externas e alterações esqueléticas. Os resultados demonstraram que a administração do piriproxifeno não provocou toxicidade materna sistêmica, uma vez que não foi evidenciada alteração no consumo de água e ração, nem no peso dos órgãos. Além disso, não foi detectada presença de diarreia, piloereção, tremores, hemorragia ou outras alterações sistêmicas. O inseticida também não causou perdas nos índices reprodutivos, como no número de fetos por progenitora e perdas pós-implantação. A administração do piriproxifeno pode ter determinado aumento na média da massa corporal dos fetos, na maior dose testada (500 mg.kg- 1), contudo, não demonstrou interferência nos demais índices fetais. Não foram detectadas alterações teratogênicas, nem malformações externas nos fetos avaliados, no entanto, pode-se perceber que os animais expostos ao inseticida apresentaram aumento significativo de alterações esqueléticas sugestivas de retardo de desenvolvimento, especialmente nas doses mais altas testadas (300 mg.kg-1 e 500 mg.kg-1). Diante dos resultados encontrados, conclui-se que a administração do inseticida piriproxifeno em ratas Wistar possa interferir na gestação de fêmeas tratadas no período organogênico, no que se refere ao desenvolvimento fetal. Por fim, diante da situação complexa de risco para a saúde humana, mostra-se importante a execução de investigações adicionais por meio de estudos em outras espécies animais, juntamente com estudos epidemiológicos, de forma a contribuir com a adequada avaliação de risco para o uso do piriproxifeno em água potável.

Pyriproxyfen is a pesticide analogous to the juvenile hormone of insects. The molecule acts mimicking the growth regulating hormone, preventing the insects from reaching maturity by disrupting larval development, which results in their death. Recommended by the World Health Organization for use in drinking water for dengue control, pyriproxyfen was defined by the Brazilian Government in 2014 as one of the forms of focal control of larvae of the Aedes aegypti mosquito in the country, after the detection of populations of mosquitoes resistant to commonly used insecticides in the country. However, the insecticide was pointed out as one of the possible causes of the microcephaly epidemic in Brazil in the end of the year 2015. Considering the few data available on the toxicity of pyriproxyfen and its possible relation with the increase of the incidence of microcephaly in newborns, this study investigated the reproductive toxicity of the insecticide in Wistar rats, evaluating their effects on the fetal development of the progeny, as well as the presence of external malformations and skeletal changes in exposed animals during the organogenesis phase. The animals were divided in four experimental groups: 1P (pyriproxyfen 100 mg.kg-1), 3P (pyriproxyfen 300 mg.kg-1), 5P (pyriproxyfen 500 mg.kg-1) and CN (negative control). The females were treated by gavage an orogastric tube, from the 6th to the 15th day of gestation, according to segment II, recommended by the Organization for Economic Cooperation and Development (2001) and Food and Drug Administration (1994). During the gestation, the females were monitored for relative body mass, water and feed consumption. On the 21st day of gestation, the progenitors were euthanized for reproductive, teratogenic and systemic evaluation. Fetuses were evaluated for embryotoxicity and presence of external malformations and skeletal abnormalities. The results demonstrated that the administration of the insecticide pyriproxyfen can not induce systemic maternal toxicity, since there was no change in water and feed consumption or in the mass of the progenitor organs. In addiction, diarrhea, piloerection, tremors, hemorrhage or other systemic alterations were not detected. The insecticide also did not cause losses in the reproductive indexes, such as number of fetuses per parent and losses after implantation. No external malformations were detected in the evaluated fetuses, however, it was observed that the animals exposed to the insecticide showed a significant increase in skeletal abnormalities suggestive of developmental delay and variations, especially in the highest doses tested (300 mg.kg-1 and 500 mg.kg-1). In view of the results found, it is concluded that the administration of the insecticide pyriproxyfen in Wistar rats can interfere in the gestation of females treated in the organogenic period, regarding fetal development. Finally, in view of the potential risk situation for human health, it is important to carry out additional studies by means of studies in other animal species, together with epidemiological studies, in order to contribute to risk assessment for the use of pyriproxyfen in drinking water. Key

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE REPRODUTIVA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Rosmarinus officinalis L. EM RATOS WISTAR

O alecrim (Rosmarinus officinalis L.) é uma planta comum de jardim, estudada por suas diversas atividades biológicas. O óleo essencial de alecrim (OEA) é composto por substâncias químicas que interagem entre si e com o organismo de forma complexa, portanto, para que possa ser utilizado pela indústria farmacêutica é necessário avaliar minuciosamente a sua segurança. Os testes de toxicidade reprodutiva são recomendados pela ANVISA, OECD e FDA como parâmetros a serem avaliados em relação aos efeitos de desenvolvimento reprodutivo. Tendo em vista a importância de estabelecer segurança ao usar esta planta, este estudo investigou a toxicidade reprodutiva do óleo essencial de Rosmarinus officinalis e seu composto majoritário (1,8 cineol) em ratos Wistar, avaliando machos e fêmeas adultos, efeitos sobre o desenvolvimento fetal e parâmetros comportamentais da prole. Os animais foram divididos em cinco grupos experimentais: CN (controle negativo Tween 80), C3 (OEA 300 mg.kg-1), C6 (OEA 600 mg.kg-1), C12 (OEA 1200 mg.kg-1) e CE (1,8 cineol 134,55 mg.kg-1). Os machos foram tratados antes (70 dias) e durante o acasalamento (21 dias) e as fêmeas antes (14 dias) e durante o acasalamento (21 dias), gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Para o estudo dos efeitos teratogênicos sobre as ninhadas, somente fêmeas foram tratadas do 6° ao 15° dia de gestação. Para identificar alterações no sistema reprodutivo dos machos e da fêmeas foram avaliados: consumo relativo de água e ração, peso relativo de órgãos, histopatologia, taxas reprodutivas e sinais de toxicidade; além disso, para os machos ainda foram estudados número e morfologia dos espermatozoides. Na prole, foram avaliados: comportamento e sinais de toxicidade materna, parâmetros reprodutivos e comportamentos em campo aberto e sexual. E para o potencial teratogênico, os fetos passaram pelo processo de diafanização, coloração e em seguida avaliados individualmente para a presença de alterações esqueléticas. O composto majoritário identificado e quantificado no óleo foi 1,8-cineol (44,85 %). Na avaliação dos efeitos reprodutivos de machos e fêmeas adultos, as fêmeas do grupo CE apresentaram redução no número de fetos por ninhada (8,3) e aumento da massa corporal (7,1g) dos mesmos, sugerindo embrioletalidade. Os animais não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica. Para a prole avaliada, houve aumento da testosterona sérica (7,98 ng/mL) e do número de espermatozoides (624,37 x 106) para o grupo CE. No PPD 2 os animais dos grupos C6 (27,8s) e C12 (28,73s) levaram mais tempo para concluir o reflexo de endireitamento em superfície, o que também ocorreu para os animais do grupo C6 (12,27s) no PPD4. Os animais do grupo C6 (19,45s) e C12 (20,70s) também tiveram aumento do tempo no reflexo de geotaxia no PPD2. O grupo C3 demonstrou maior comportamento exploratório no teste de campo aberto, com aumento da frequência de entrada no centro (14,73) e diminuição de grooming (0,54) quando comparados ao grupo controle. Não foram observados sinais de toxicidade materna. Na avaliação dos fetos expostos durante o período de organogênese, houve uma tendência para o aumento das perdas pós-implantação, quanto maior a dose testada, para os grupos que receberam OEA. Os tratamentos interferiram no desenvolvimento fetal demonstrado pelo retardo no desenvolvimento esquelético em todos os grupos, sugerindo que a exposição à estas doses do óleo essencial e 1,8 cineol devem ser evitadas em gestantes. Os grupos C6, C12 e CE apresentaram maior proporção de fetos com anormalidades no esqueleto (78,31%, 100% e 95,06%, respectivamente).

The Rosemary (Rosmarinus officinalis L.) is an ordinary plant from the yard studied for its several biological activities. The Rosemary essential oil (REO) is composed by chemical substances which interact with each other and with the organism of complex form, therefore, its necessary to evaluate its safety deeply for making its usage possible for the industry. The reproductive toxicity tests are recommended by ANVISA, OECD and FDA as parameters to be evaluated regarding the effects of reproductive development. Aiming at the importance of establishing confidence on this plant usage, the present study investigated the reproductive toxicity of the Rosmarinus officinalis essential oil and its majority component (1,8 cineol) in Wistar rats considering male and female adults, effects on the fetal development and behavior parameters of the offspring. The animals were divided into five experimental groups: NC (negative control - Tween 80), C3 (REO 300 mg.kg-1), C6 (REO 600 mg.kg-1), C12 (REO 1200 mg.kg-1) e CE (1,8 cineol 134,55 mg.kg-1). The male samples were fed before (70 days) and during the mating (21 days) and the female ones were fed before (14 days) and during the mating (21 days), pregnancy (21 days) and lactation (21 days). For studying teratogenic effects on the offspring, just female samples were fed from the sixth to the fifteenth day of pregnancy. In order to identify modifications on the reproductive system of male and female samples it was analyzed: relative water and feed consumption, relative weight of organs, histopathology, reproductive taxes and toxicity signs; besides, for the male ones, number and morphology of sperm were also studied. About the offspring, maternal behavior and signs of toxicity, reproductive parameters and open and sexual field were studied. For the teratogenic potential, the offspring were submitted to a diaphanous process, coloring and next were evaluated separately for checking the existence of skeletal changes. The majority component identified and qualified into the oil was 1,8-cineol (44,85 %). In evaluating the reproductive effects of adults males and females, the females of the CE group presented a reduction in the number of fetuses per litter (8,3) and increased body mass (7,1g), suggesting embryoletality. The animals showed no signs of systemic toxicity. For the evaluated offspring, there was an increase in serum testosterone (7,98 ng / mL) and the number of spermatozoa (624.37 x 106) for the CE group. In PPD 2 the animals of groups C6 (27,8s) and C12 (28,73s) took longer to complete the surface righting reflex, which also occurred for the animals of the C6 group (12,27s) in PPD4. The animals of group C6 (19,45s) and C12 (20,70s) also had increased time in the geotaxia reflex in PPD2. The C3 group showed higher exploratory behavior in the open field test, with an increase in the entrance frequency in the center (14,73) and a decrease in grooming (0,54), when compared to the control group. No signs of maternal toxicity were observed. In the evaluation of the fetuses exposed during the period of organogenesis, there was a tendency for the increase in the post-implantation losses, the larger the dose tested, for the groups that received REO. Treatments interfered in fetal development demonstrated by delayed skeletal development in all groups, suggesting that exposure to these doses of essential oil and 1,8-cineol should be avoided in pregnant women. Groups C6, C12 and CE presented a higher proportion of fetuses with skeletal abnormalities (78,31%, 100% and 95,06%, respectively).

Efeito paradoxal de baixas doses de nanopartículas de prata na expressão testicular de genes relacionados com a espermatogênese, hormônios sexuais e funcionalidade espermática

Nanopartículas de prata (AgNPs) destacam-se nas áreas da medicina e da indústria por suas propriedades antibacterianas, antifúngicas e antivirais. O alto grau de comercialização aumenta a preocupação quanto a sua potencial toxicidade sobre os diversos sistemas incluindo o reprodutivo. Este trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade reprodutiva das AgNPs sobre os parâmetros selecionados numa curva de dose-resposta, onde a dose mais alta correspondeu à LOAEL (menor dose com efeito adverso observado) previamente estabelecida (15 g/kg) em ratos Wistar pré-púberes como modelo experimental. Avaliou-se a produção espermática, as reservas espermáticas, o tempo de trânsito espermático, a funcionalidade espermática (integridades acrossômica e da membrana plasmática, atividade mitocondrial e morfologia espermática). A expressão de mRNA nos testículos foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real a partir da transcrição reversa (RT-qPCR) para os genes do receptor de andrógenos (Ar), receptor de estradiol (Esr1), receptor de estradiol (Esr2), receptor de estrógeno 1 acoplado a proteína G (Gper) e aromatase (Cyp19a1). Foram dosadas as concentrações séricas de testosterona e estradiol. Os resultados foram analisados estatisticamente pela análise de variância seguida do pós-teste de Dunnet, considerando-se diferenças estatísticas quando p<0,05. A exposição às AgNPs durante a fase pré-púbere resultou na alteração da expressão de genes Ar, Gper e Esr1 relacionados ao controle da espermatogênese, bem como nos níveis de hormônios, reserva, tempo de trânsito e funcionalidade espermáticas. Pode-se concluir que as AgNPs possuem efeitos dose-resposta não lineares agindo como um potencial desregulador endócrino químico e causando decréscimo na fertilidade masculina.

Silver nanoparticles (AgNPs) stand out in the medicine and industry areas by their antibacterial, antifungical and antiviral properties. The high degree of commercialization increases the concerns about potential toxicity in various systems including the reproductive tract. This study aimed to evaluate the reproductive toxicity of AgNPs in the selected parameters in a dose response curve on which the higher dose corresponded to LOAEL (lowest observed adverse effect level) previously established (15 g/kg) in prepubertal Wistar rats as experimental model. It was evaluated the sperm production, the sperm reserves, the sperm transit time, the sperm functionality (acrosome and plasma membrane integrities, mitochondrial activity and sperm morphology). The mRNA expression in the testis was evaluated by reverse transcription followed by real-time polymerase chain reaction (RTqPCR) for androgen receptor (Ar), estradiol receptor (Esr1), estradiol receptor (Esr2), estrogen receptor 1 coupled to the G-protein (Gper) and aromatase (Cyp19a1) genes. It was measured the serum concentrations of testosterone and estradiol. The results were statistically analyzed by analysis of variance followed by Dunnets post-hoc test considering statistical differences when p<0,05. The exposure to AgNPs during the prepubertal period resulted in altered expression of the genes Ar, Gper and Esr1 related to the spermatogenesis control, and in the hormones levels. The sperm parameters were also altered. It is possible to concluded that AgNPs has non-linear dose-response effects acting as a potential endocrine disrupting chemical and causing reduction in male fertility.

ESTUDO DE TOXICIDADE REPRODUTIVA E GENOTOXICIDADE DO ÓLEO ESSENCIAL DE Origanum majorana

Origanum majorana L., planta rica em óleos essenciais, apresenta atividade antifúngica in vitro contra Malassezia pachydermatis, Candida spp e Trichosporon asahii, entre outras atividades. No entanto, a exposição a produtos químicos, incluindo medicamentos à base de plantas, podem causar mutagenicidade, infertilidade, toxicidade materna e embriofetotoxicidade. Visando avaliar esses efeitos, este estudo investigou toxicidade reprodutiva do óleo essencial de Origanum majorana (Omeo) e compostos majoritários em ratos Wistar, os efeitos sobre o desenvolvimento fetal e parâmetros comportamentais da prole, e atividade mutagênica in vitro. As doses testadas in vivo foram 33mg/kg, 100mg/kg, 300mg/kg Omeo, 77mg/kg -terpineno ou 52mg/kg terpinen-4-ol, estabelecidas de acordo com estudos prévios. Ratos machos foram tratados durante 70 dias e fêmeas por 14 dias antes do acasalamento, durante a gravidez e lactação. Para identificar alterações no sistema reprodutivo de machos foram avaliados: peso relativo de órgãos, histopatologia, número e morfologia de espermatozóides, taxas reprodutivas, ganho de peso, ingestão de água e alimento, e sinais de toxicidade. Comportamento e sinais de toxicidade materna, parâmetros reprodutivos, comportamento em campo aberto e sexual da prole também foram avaliados. O potencial teratogênico foi observado na progênie de machos não tratados e fêmeas tratadas apenas durante a prenhez. No dia 21, após cesárea, os fetos foram diafanizados, corados e avaliados individualmente para a presença de alterações esqueléticas. A exposição reduziu de maneira dose dependente taxas reprodutivas, número e produção diária de espermatozóides, além de induzir aumento de defeitos em espermatozoides (Omeo e terpinen-4-ol), e reduzir peso relativo de testículos e epidídimos com 300mg/kg Omeo. Não foi observada prenhez com esta dose e com terpinen-4-ol. O comportamento materno relacionado ao ninho foi reduzido com 100mg/kg Omeo, mas a capacidade de resposta materna foi mantida pelo comportamento de amamentação e cuidados. Esta dose induziu redução do número de descendentes, aumento do tempo de prenhez e retardo na separação prepucial de filhotes. Outros parâmetros reprodutivos e comportamentais da prole não foram afetados. Observou-se atraso do desenvolvimento esquelético em todos os grupos tratados e malformações do esqueleto com as doses máximas de Omeo e terpinen-4-ol. Mutagenicidade in vitro foi avaliada pelo teste de Salmonella/microssoma utilizando o procedimento de pré-incubação das linhagens TA98, TA97, TA100, TA102 e TA1535 de S. typhimurium, com ou sem ativação metabólica. Não se observou mutação gênica. Para o teste de micronúcleos em células de mamíferos in vitro, foi utilizado células V79 de fibroblastos de pulmão de hamster chinês e Omeo não induziu mutação cromossômica. Concluindo, Omeo não é capaz de induzir in vitro mutações gênicas ou cromossómicas, no entanto, o tratamento contínuo em doses elevadas de Omeo e compostos majoritários afetam a fertilidade masculina, induzem alterações nas taxas reprodutivas e causam malformação e efeitos adversos sobre a descendência, não devendo ser utilizado nessas doses durante a gravidez e lactação

Origanum majorana L., a plant rich in essential oils, presents antifungal activity in vitro against Malassezia pachydermatis, Candida spp and Trichosporon asahii, among other activities. However, exposure to chemicals, including herbal medicines, can cause mutagenicity, infertility, maternal toxicity, embryotoxic effects on offspring. Therefore, this study investigated in vivo reproductive toxicity of the Origanum majorana essential oil (Omeo) and major compounds on rats Wistar, effects on the fetal development and behavioral parameters of the offspring, and in vitro mutagenic activity. The in vivo tested doses were 33mg/kg, 100mg/kg or 300mg/kg Omeo, 77mg/kg -terpinene or 52mg/kg terpinen-4-ol, established according to previous studies. Male parents were treated for 70 days and females for 14 days prior to mating, during pregnancy and lactation. To identify alterations in reproductive system of males were evaluated organs relative weight, histology, sperm number and morphology of spermatozoa. Reproductive index, body weight gain, intake water and food, and toxicity signs were evaluated. Signs of maternal toxicity, maternal behavior, offspring reproductive parameters, open field behavior and sexual behavior were observed. To evaluated the teratogenic potential, female rats Wistar were treated only during pregnancy and males were not treated. At 21th was performed cesarean, fetuses were diaphanized, stained and evaluated individually for the presence of skeletal alterations. The exposure induced dose-dependent way reduction in reproductive index, reduction in sperm number, reduction in daily sperm production, increase in sperm defects to males treated with Omeo and Terpinen-4-ol, reduction in testis and epididymis relative weight to 300mg/kg Omeo, and no pregnancy at this dose and terpinen-4-ol. Maternal toxicity was not observed. The maternal behavior related to the nest was reduced with 100 mg/kg Omeo, but the maternal responsiveness was maintained by the nursing behavior. This dose induced reduction in the number of offspring per parent, increase in the time of pregnancy and changes in the development of males characterized by delayed preputial separation. Other reproductive and behavioral parameters of the male offspring were not affected. However, it was observed skeletal development delay in all treated groups and skeletal malformation at the highest doses of Omeo and terpinen-4-ol. Mutagenicity in vitro was evaluated by the Salmonella/microsome test using the preincubation procedure on TA98, TA97a, TA100, TA102 and TA1535 Salmonella typhimurium strains, with or without metabolic activation. No gene mutation increase was observed. For the in vitro mammalian cell micronucleus test, it was used V79 Chinese hamster lung fibroblasts and Omeo was not able to induce chromosome mutation. In conclusion, Omeo is not able to induce in vitro gene and chromosome mutations, however, the continuous treatment with high doses Omeo and major compounds affect male fertility, induce changes in reproductive rates, cause malformation and adverse effects on the developing offspring, and should not be used during pregnancy and lactation.

AVALIAÇÃO DOS EFEITOS TOXICOLÓGICOS DOS ESPERMATOZOIDES DE JUNDIÁ (Rhamdia quelen) EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE HgCl2

O Jundiá (Rhamdia quelen) é um peixe que se destaca na região sul do Brasil, podendo ser encontrado desde o centro da Argentina até o sul do México, se destaca por possuir fácil adaptação e bons índices reprodutivos, sua maturidade sexual é atingida no primeiro ano de vida apresentando dois picos reprodutivos por ano, um no verão e outro na primavera. Estudos referente ao comportamento de gametas e sua interação com o meio ambiente ainda são incipientes, os gametas são lançados no ambiente onde ocorre a fertilização e neste momento os mesmos estão expostos a diversos contaminantes presentes na água, tais como metais pesados, como o Cloreto de Mercúrio (HgCl2) que tem capacidade de causar danos em qualquer tecido no qual entre em contato. Diante disto, o estudo teve por objetivo avaliar as patologias causadas por danos morfológicos ocasionados pela ativação de espermatozoides com soluções de diferentes concentrações de HgCl2. Para a realização do estudo, foi feita a coleta do sêmen, onde foram utilizados 7 animais machos de idade reprodutiva (489,42 ± 137g e 36,78 ± 3,13cm). O sêmen foi coletado por compressão abdominal, ativado em solução de NaCl 50mM livre de HgCl2 para o grupo controle, e soluções de NaCl 50mM com 0,0001; 0,0002; 0,002 e 0,02 mg/L de HgCl2. Foram avaliados motilidade, vigor e tempo de motilidade como parâmetros subjetivos, integridade e fluidez de membrana, funcionalidade mitocondrial, espécies reativas de oxigênio e fragmentação do DNA como parâmetros de toxicidade celular e patologia espermática como parâmetro de morfologia celular. Os resultados encontrados indicam que em relação aos parâmetros de motilidade, vigor e tempo de motilidade, houve diferença quando comparado ao grupo controle até mesmo na mais baixa concentração avaliada (0,0001mg/L). Entretanto, danos celulares, foram observados apenas, a partir da dose 0,0002mg/L, sendo eles integridade da membrana e fluidez da mesma. No parâmetro morfológico, houve diferença entre o índice de células anormais entre o grupo controle e todas as concentrações avaliadas nos grupos tratados. Estes resultados indicam que o Cloreto de Mercúrio pode ocasionar danos em espermatozoides de Rhamdia quelen, em todas as concentrações testadas.

AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA E ESTUDO DAS ATIVIDADES ANTIINFLAMATÓRIA E ANTIOXIDANTE DO EXTRATO ETANÓLICO DAS VAGENS DA Samanea tubulosa (Benth)

Uma das grandes preocupações da realização de estudos em plantas com grande potencial para alimentação animal, além daquelas usadas como fitoterápicos, se deve ao pouco conhecimento de seus efeitos sobre o organismo. Dentre essas, a Samanea tubulosa é popularmente utilizada na alimentação animal e em tratamentos de infecções de pele e infestações parasitárias com poucas evidências científicas quanto a seu uso. Com isso objetivou-se avaliar a toxicidade do extrato da Samanea tubulosa in vitro e in vivo, com ênfase na função reprodutiva. Concomitantemente, foram investigadas as atividades anti-inflamatórias e antioxidantes. O estudo de toxicidade aguda foi realizado conforme as orientações da OCDE 425. Observações como alterações de pele, agressividade, mortalidade e piloereção foram feitas sistematicamente após administração da dose do extrato nos animais. Testes de MTT e hemólise foram realizados nas concentrações de 6,25 a 800 g/ml. Para toxicidade reprodutiva foram utilizados ratos (Wistar), machos e fêmeas (180-250g), formando cinco grupos gestantes (n=7): 1- Veículo (10mL/kg), 2- Hidroalcoólica, 3- Hexânica, 4- Acetato de Etila e 5-Aquosa, todos com dose de 240mg/kg. Os fetos foram separados para a análise esquelética, eviscerados, desidratados e colocados em Alizarina Red para coloração. No que tange a atividade anti-inflamatória, foi usado a carragenina para induzir edema de pata e peritonite e em seguida foram feitas avaliações histológica, contagem total e diferencial de células inflamatórias e atividade da mieloperoxidase. Além disso, para avaliar a atividade antioxidante, foram realizados ensaios sequestradores de radicais hidroxila, NO e TBARS. Os resultados da toxicidade aguda demonstraram que não houve diferença significativa no peso dos órgãos entre o grupo controle e os tratamentos após 14 dias. Testes de citotoxidade também não exibiram tais efeitos. Os índices de fertilidade e nascimento e a variável de peso ao nascer foram significativamente diferentes entre as frações quando comparadas ao controle. Frações do extrato provocaram um aumento na incidência de alterações esqueléticas e o aparecimento de malformações. O extrato etanólico da Samanea tubulosa (EEST) 25, 50 e 100 mg/kg mostrou-se eficaz na redução do edema chegando a 95.70% de inibição, provocando diminuição significativa na contagem total e diferencial de leucócitos. Todos os testes mostraram um bom potencial antioxidante, diminuindo todos os valores. As frações estudadas das vagens da S. tubulosa apresentam toxicidade na dose de 240mg/kg sobre a gestação de ratas Wistar, provocando redução pronunciada do peso dos fetos, diminuição do índice de fertilidade nas frações hidroalcoólica, aquosa e acetato de etila e diminuição do índice de gestação na fração hexânica, havendo retardo do desenvolvimento do feto e presença de malformações nas esternébras. Portanto, o EEST possui significativos efeitos antioxidantes e antinflamatórios, não produz toxicidade aguda por via oral nas doses estudadas e não tem efeitos significativos no estudo da citotoxicidade em macrófagos e eritrócitos, porém demonstra toxicidade gestacional. Conclui-se a vagem de S. tubulosa contém princípios ativos muito importantes do ponto de vista farmacológico, porém com contra indicação na gestação. Esses princípios deverão ser isolados e melhor estudados no seu potencial farmacológico e toxicológico.

A major concern of studies in plants with great potential for animal feed, those used as herbal medicines, it is due to little knowledge of its effects on the body. Among these, Samanea tubulosa is popularly used in animal nutrition and treatment of skin infections and parasitic infestations with little scientific evidence related to its use. The amis was to evaluate the toxicity of Samanea tubulosa extract in vitro and in vivo with an emphasis on reproduction. Concomitantly, anti-inflammatory and antioxidant activity were investigated. The acute toxicity study was performed according to OECD 425 guidelines. Observations like skin changes, aggression, mortality, piloerection were systematically made after dosing in animals. MTT and hemolysis tests were performed at concentrations 6,25 to 800 g/mL. For reproductive toxicity was used rat (Wistar) male and female (180-250 g), forming five pregnant groups (n=7): 1-Vehicle (10 mL/kg), 2-Hydroalcoholic, 3-Hexane, 4-Ethyl Acetate and 5-Aqueous all at dose 240 mg/kg. The fetuses were separated for skeletal analysis through solutions, then gutted, dried and placed into Alizarin Red for staining. With respect to anti-inflammatory activity has been used carrageenan to induce paw edema and peritonitis, thus performed histological evaluations, the total and differential counts of inflammatory cells and myeloperoxidase activity. Furthermore, to evaluate the antioxidant activity assays were performed scavengers hydroxyl radicals, NO and TBARS. Results of acute toxicity showed no significant difference (p <0.05) in organ weights between the control group and the treatment after 14 days. Cytotoxicity tests showed no cytotoxic effects. The fertility rates and birth and the weight variable at birth were significantly different between fractions when compared to control group. Fractions of the extract caused an increased incidence of skeletal variations and the appearance of malformations. The ethanol extract of Samanea tubulosa (EEST) 25, 50 and 100 mg/kg was effective by reducing edema reaching 95.70% inhibition, causing significant decrease in the total count and leukocyte differential. All tests showed a good antioxidant antioxidant potential, reducing all values. We conclude that EEST did not produce acute oral toxicity at the doses studied and no significant effects on cytotoxicity study in macrophages and erythrocytes. Also concluded that the fractions studied the pods of S. tubulosa showed toxicity at the dose of 240 mg/kg on the pregnancy Wistar rats, which led to a large decrease fetal weight, decreased fertility rate in Hydroalcoholic, Aqueous and Ethyl Acetate fractions and decreased pregnancy rate in Hexane fraction, with delayed development of the fetus and malformations in sternebrae. However, results suggest that the EET has anti-inflammatory and antioxidant effects, thus favoring scavenging free radicals and reducing the paw edema with decreased neutrophil migration.

Avaliação de desreguladores endócrinos em machos: estudo dos efeitos tóxicos da Ipomoea carnea em caprinos / Evaluation of endocrine disruptors in males: study of toxic effects of Ipomoea carnea in goats

Recentemente, pesquisas vêm claramente demonstrando que xenobióticos podem apresentar efeitos deletérios sobre o sistema endócrino e passam a ser de grande importância toxicológica à medida que se tornam contaminantes ambientais. Tais substâncias passaram a ser denominadas de desreguladores endócrinos (DEs). Entre os diferentes DEs identificados, muitos são praguicidas, amplamente utilizados no meio agropecuário em todo o mundo. Atualmente, já são bem estabelecidas as metodologias para avaliação do potencial efeito DE de diferentes substâncias em roedores; porém uma busca na literatura deixa clara a falta de estudos e de protocolos para avaliação de DEs em animais de produção ruminantes, os quais certamente estão expostos a um grande número de agentes tóxicos com estas características. Assim, foi objetivo desta pesquisa dar início ao desenvolvimento de um protocolo para avaliação de efeitos DEs de xenobióticos em ruminantes. Para tal, estudou-se o bisfenol A (BPA), o qual é, classicamente, um DE para roedores. Além disto, avaliou-se o potencial efeito DE da I. carnea, uma planta tóxica de grande importância para ruminantes no Brasil e em outros países. O estudo foi realizado em duas etapas, na primeira avaliou-se os efeitos do BPA e da planta nos caprinos machos púberes; na segunda etapa propôs-se avaliar os efeitos tóxicos da exposição in utero de caprinos machos púberes a estas mesmas substâncias. Os resultados obtidos mostraram que os bodes púberes expostos ao BPA apresentaram redução significante dos níveis séricos de tiroxina, e da qualidade espermática. Também observou-se nestes mesmos animais degeneração vacuolar na rete testis. Já os caprinos machos púberes que receberam a I. carnea apresentaram aumento significante do numero de espermatozoides com alterações morfológicas e degeneração vacuolar testicular. Ainda, estes mesmos animais apresentaram diminuição estatisticamente significante dos níveis séricos dos hormônios tireoidianos (T3 e T4). O protocolo empregado para avaliação dos efeitos da exposição in utero a I. carnea ou ao BPA em machos púberes, não evidenciou nenhuma alteração hormonal e/ou reprodutiva. Conclui-se que o protocolo empregado para avaliação de possíveis efeitos DEs de xenobióticos, em ruminantes foi eficaz, no entanto, futuras metodologias deverão ser introduzidas neste protocolo, para detectar alterações mais sutis no sistema endócrino .

Recently, many studies clearly showed that xenobiotics may have deleterious effects on the endocrine system. These substances are termed endocrine disruptors (EDs), and have great toxicological significance when they become environmental contaminants. Many of EDs are identified as pesticides, which were widely used in agriculture and livestock worldwide. Currently, there are already well-established methodologies for assessing the potential effect of endocrine disruptor (ED) of different substances in rodents; however, a literature search shows clearly the lack of studies and protocols for assessing EDs in ruminant livestock, which are indubitably exposed to a large number of these substances. Thus, the objective of the present research was to start developing a protocol for evaluation of possible effects of EDs in ruminants. For this, it was studied bisphenol A (BPA), a classic ED and also I. carnea, an important toxic plant to ruminants in Brazil and other countries. The study was conducted in two stages, in the first, it was evaluated the effects of BPA and I. carnea in pubescent male goats, and in the second stage it was studied the effects in pubescent male goats from mothers exposed, during pregnancy, to BPA or the toxic plant. The pubescent male goats treated with BPA showed significant reduction in serum thyroxine levels and in the sperm quality. Those animals also presented vacuolar degeneration in the rete testis. Pubescent male goats exposed to I. carnea showed many alterations: significant increase in morphological changes in the sperm, decrease in serum levels of thyroid hormones (T3 and T4) and testicular vacuolar degeneration. The used protocol for evaluation of the effects of in utero exposure to BPA or I. carnea in pubescent male goats showed no hormonal or reproductive changes in male goats evaluated at the puberty. In conclusion, the protocol used in the present study showed to be worthy to evaluate EDs effects in ruminants; however future methodologies should be introduced to detect more subtle changes in the endocrine system .

Avaliação de desreguladores endócrinos em machos: estudo dos efeitos tóxicos da Ipomoea carnea em caprinos / Evaluation of endocrine disruptors in males: study of toxic effects of Ipomoea carnea in goats

Recentemente, pesquisas vêm claramente demonstrando que xenobióticos podem apresentar efeitos deletérios sobre o sistema endócrino e passam a ser de grande importância toxicológica à medida que se tornam contaminantes ambientais. Tais substâncias passaram a ser denominadas de desreguladores endócrinos (DEs). Entre os diferentes DEs identificados, muitos são praguicidas, amplamente utilizados no meio agropecuário em todo o mundo. Atualmente, já são bem estabelecidas as metodologias para avaliação do potencial efeito DE de diferentes substâncias em roedores; porém uma busca na literatura deixa clara a falta de estudos e de protocolos para avaliação de DEs em animais de produção ruminantes, os quais certamente estão expostos a um grande número de agentes tóxicos com estas características. Assim, foi objetivo desta pesquisa dar início ao desenvolvimento de um protocolo para avaliação de efeitos DEs de xenobióticos em ruminantes. Para tal, estudou-se o bisfenol A (BPA), o qual é, classicamente, um DE para roedores. Além disto, avaliou-se o potencial efeito DE da I. carnea, uma planta tóxica de grande importância para ruminantes no Brasil e em outros países. O estudo foi realizado em duas etapas, na primeira avaliou-se os efeitos do BPA e da planta nos caprinos machos púberes; na segunda etapa propôs-se avaliar os efeitos tóxicos da exposição in utero de caprinos machos púberes a estas mesmas substâncias. Os resultados obtidos mostraram que os bodes púberes expostos ao BPA apresentaram redução significante dos níveis séricos de tiroxina, e da qualidade espermática. Também observou-se nestes mesmos animais degeneração vacuolar na rete testis. Já os caprinos machos púberes que receberam a I. carnea apresentaram aumento significante do numero de espermatozoides com alterações morfológicas e degeneração vacuolar testicular. Ainda, estes mesmos animais apresentaram diminuição estatisticamente significante dos níveis séricos dos hormônios tireoidianos (T3 e T4). O protocolo empregado para avaliação dos efeitos da exposição in utero a I. carnea ou ao BPA em machos púberes, não evidenciou nenhuma alteração hormonal e/ou reprodutiva. Conclui-se que o protocolo empregado para avaliação de possíveis efeitos DEs de xenobióticos, em ruminantes foi eficaz, no entanto, futuras metodologias deverão ser introduzidas neste protocolo, para detectar alterações mais sutis no sistema endócrino (AU).

Recently, many studies clearly showed that xenobiotics may have deleterious effects on the endocrine system. These substances are termed endocrine disruptors (EDs), and have great toxicological significance when they become environmental contaminants. Many of EDs are identified as pesticides, which were widely used in agriculture and livestock worldwide. Currently, there are already well-established methodologies for assessing the potential effect of endocrine disruptor (ED) of different substances in rodents; however, a literature search shows clearly the lack of studies and protocols for assessing EDs in ruminant livestock, which are indubitably exposed to a large number of these substances. Thus, the objective of the present research was to start developing a protocol for evaluation of possible effects of EDs in ruminants. For this, it was studied bisphenol A (BPA), a classic ED and also I. carnea, an important toxic plant to ruminants in Brazil and other countries. The study was conducted in two stages, in the first, it was evaluated the effects of BPA and I. carnea in pubescent male goats, and in the second stage it was studied the effects in pubescent male goats from mothers exposed, during pregnancy, to BPA or the toxic plant. The pubescent male goats treated with BPA showed significant reduction in serum thyroxine levels and in the sperm quality. Those animals also presented vacuolar degeneration in the rete testis. Pubescent male goats exposed to I. carnea showed many alterations: significant increase in morphological changes in the sperm, decrease in serum levels of thyroid hormones (T3 and T4) and testicular vacuolar degeneration. The used protocol for evaluation of the effects of in utero exposure to BPA or I. carnea in pubescent male goats showed no hormonal or reproductive changes in male goats evaluated at the puberty. In conclusion, the protocol used in the present study showed to be worthy to evaluate EDs effects in ruminants; however future methodologies should be introduced to detect more subtle changes in the endocrine system (AU).

Efeitos na esfera reprodutiva da exposição prolongada a Solanum lycocarpum durante a puberdade de ratos / Effects on reproductive system of long-term exposition to Solanum lycocarpum during rats puberty

A Solanum lycocarpum é uma planta encontrada em quase todos os estados do Brasil, podendo ser ingerida por animais em idade fértil e em condições naturais. Os frutos desta planta possuem glicoalcalóides esteroidais com propriedades semelhantes aos esteróides. Neste estudo investigou-se os efeitos na esfera reprodutiva causados pela ingestão de S. lycocarpum durante a puberdade de ratos. Os frutos secos foram administrados na ração (10%) desde o desmame até a idade adulta (70dias). Foram avaliados o peso corpóreo e de órgãos, o comportamento e a orientação sexual, os níveis de hormônios sexuais nas fezes, a bioquímica sérica, os níveis de neurotransmissores centrais e os achados anatomopatológico, tanto de ratos machos como de fêmeas. Observou-se os seguintes resultados: 1) Redução no peso corpóreo dos machos e das fêmeas; 2) Em machos, o peso relativo aumentou nos epidídimos, vesícula seminal e testículos; 3) Não houve diferenças no hemograma entre os grupos controle e experimental de ambos os sexos; 4) Alterações na bioquímica sangüínea sugerem leve toxicidade em células musculares e hepática; 5) Em fêmeas, não constatou-se nenhuma alteração no ciclo estral e no comportamento sexual; enquanto nos machos houve melhora do comportamento sexual e 6) Os níveis de neurotransmissores do estriado foi modificado mas não os do hipotálamo. Esses achados indicam que a exposição a S. lycocarpum durante a puberdade prejudicou parâmetros da esfera reprodutiva, em particular, dos machos

Solanum lycocarpum St. Hil, a toxic plant common in almost all states of Brazil, may be consumed by animals in fertile age and in natural condition. The fruits of this plant contain steroidal glycoalkaloids with steroid-like properties. Presently the reproductive effects of S. lycocarpum fruit ingestion during puberty were investigated. The dried fruits were administered in the diet (10%) from the weaning up to adult age (70 days). The body and organs weights, sexual behavior as well as sexual orientation, the feces hormonal levels, hemogram and biochemical blood evaluations, hypothalamic and striatal neurotransmitter levels, and anatomopathological studies of male and female rats were performed. The results showed: 1) a reduced body weight in male and female; 2) in male, an increased epydidimis, seminal vesicle and testis relative weights; 3) no differences of controls and experimental groups of both sex in the hemogram; 4) blood biochemical alterations meaning slight toxicity in muscular and hepatic cells; 5) in female, no interference was detected in estrous cycle and sexual behavior; an improvement of male sexual behavior was observed; 6) that striatal neurotransmitter levels were modified but not in the hypothalamus. These results indicate that exposure to S. lycocarpum during puberty prejudiced the reproductive system, particularly in male rats

Avaliação dos efeitos tóxicos do cianeto e do tiocianato no período perinatal. Estudo em ratos / Evaluation of toxic effects of cyanide and thiocyanate during perinatal period. Study in rats

O objetivo do presente estudo foi o de determinar os efeitos da exposição prolongada ao KCN e ao KSCN em ratos, no período perinatal. Inicialmente, realizou-se o estudo toxicocinético do tiocianato em ratas, em três estados fisiológicos diferentes: fase estrogênica, gestacional e de lactação. Para tal, estes animais receberam, por via oral, na água de bebida ou gavage, a dose única de 3 mg/kg de KCN. Os resultados obtidos mostraram aumento significante nos níveis séricos, lácteos e no líquido amniótico, de tiocianato, após a administração do KCN. A partir destes dados, foram calculados os parâmetros toxicocinéticos. Na segunda etapa, foram utilizadas ratas, as quais foram divididas em 3 grupos controles e 18 experimentais, que receberam as diferentes doses de KCN (1; 3 e 30 mg/kg) ou KSCN (0,8; 2,4 e 24 mg/kg), na água de bebida, do 6º ao 20º dia de gestação e submetidas à eutanásia no 20º dia da gestação ou no 22º dia pós-parto; e do 1º ao 19º dia da lactação, e submetidas à eutanásia no 19º dia deste período. Ao final de cada experimento, os animais foram submetidos à eutanásia, no período apropriado, bem como os fetos e filhotes, coletando-se soro para análise dos níveis de tiocianato, glicose, colesterol, uréia, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina, bem como foram retirados fragmentos do sistema nervoso central, do rim, do pâncreas, da tireóide, do fígado, do pulmão e do baço para estudo histopatológico. Ainda, realizou-se a dosagem de tiocianato no líquido amniótico e no leite, bem como a análise óssea e visceral dos fetos. Dos parâmetros bioquímicos analisados, em relação às mães, verificou-se que os níveis séricos de tiocianato estiveram aumentados, significantemente, em diversos grupos experimentais, no entanto, poucas foram as alterações nas enzimas e outras substâncias avaliadas. O estudo histológico revelou, tanto naquelas gestantes quanto nas lactantes, nefrose, hemorragia e hemossiderose renal; congestão, neuronofagia e gliose no SNC; congestão, vacuolização e proliferação dos ductos biliares e aumento no número de vacúolos de reabsorção no colóide dos folículos tireoidianos, de forma dose-dependente, nos diferentes grupos experimentais. Ratas gestantes, submetidas à eutanásia no 20º dia da gestação apresentaram, ainda, depleção de células das ilhotas de Langerhans. Em relação aos filhotes, tanto aqueles provenientes de fêmeas tratadas durante a gestação quanto da lactação, verificou-se que, embora a avaliação bioquímica tenha revelado alteração apenas no tiocianato sérico de filhotes de mães provenientes dos grupos experimentais, o estudo histológico, nestas proles, mostrou várias lesões, a saber: congestão, neuronofagia e gliose no SNC, congestão renal e hepática, vacuolização e proliferação dos ductos biliares. Por outro lado, não foram detectadas alterações na performance reprodutiva bem como na análise visceral e óssea dos fetos. Portanto, pode-se sugerir que o cianeto e/ou seu metabólito promovam efeito tóxico diretamente sobre o feto, no entanto estas alterações são passíveis de detecção apenas na fase pós-natal. Além disto, verificou-se, que o cianeto e/ou o tiocianato são carreados para o leite, podendo comprometer, também, a saúde do neonato

The aim of the present study was to determinate the toxic effects of long-term exposure to KCN and KSCN in rats, during perinatal period. Initially, it was achieved the toxicokinetics study of the thiocyanate in female rats, in three different physiological states: estrogenic, gestation and lactation. These animals received, per os, in the drinking water or by gavage, the unique dose of 3.0 mg KCN/kg. The results showed significantly increased in the thiocyanate levels in the serum, milk and amniotic fluid, after the administration of the KCN. The toxicokinetics parameters were calculated based on these data. In a second part, female rats were distributed in 18 experimental and 3 control groups. The experimental groups were dosed with 1, 3 and 30 mg KCN/kg or 0.8; 2.4 and 24 mg KSCN/kg, daily, in the drinking water, from days 6 to 20 of gestation and euthanized on day 20 of gestation or on day 22 postpartum; or received from days 1 to 19 of lactation and euthanized on day 19 of lactation. At the end of each experiment, the animals were euthanized, in the appropriated period, as well as the fetuses and pups. The serum samples were obtained in order to determine the thiocyanate, glucose, cholesterol, urea, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase levels as well as samples of the following organs for the histopathological study: central nervous system, kidney, pancreas, thyroid, liver, lung and spleen. Yet, the levels of thiocyanate were evaluated in the amniotic fluid and milk, from the mothers, as well as the skeletal and visceral analysis of the fetuses. From the biochemical parameters, in relation to the dams, it was verified that the thiocyanate levels were significantly increased, in several experimental groups; otherwise, too few alterations were observed in the enzymes and others substances analyzed. The histopathological study revealed, in the pregnant and lactating rats, nephrosis, hemorrhage and hemosiderosis in the kidneys; congestion, neuronophagia and gliosis in the CNS; vacuolization and proliferation of the biliar ducts in the liver and increase in the number of reabsorption vacuoles in follicular colloid, in a dose-dependent manner, in some experimental groups. At the pregnant rats that were euthanized on day 20 of gestation, it was verified depletion of cells from the islets of Langerhans. In relation to the pups, from mothers exposed during the gestation and lactation, it was verified alteration in the thiocyanate levels from experimental groups and the histopathological study revealed: congestion, neuronophagia and gliosis in the CNS, renal and hepatic congestion, vacuolization and proliferation of biliar ducts. On the other hand, it was verified no alterations in the reproductive performance nor skeletal and visceral analysis of the fetuses. Thus, it was suggested that the cyanide and/or its metabolite promoted toxic effect straight to the fetuses; however, these alterations are susceptible of detection only at postnatal phase. Furthermore, the cyanide and/or thiocyanate are transferred to the breast milk of rats and can also compromise the health of the offspring