Fast protocol for the production of Histoplasma capsulatum antigens for antibody detection in the immunodiagnosis of histoplasmosis / Protocolo rápido de producción de antígenos de Histoplasma capsulatum para la detección de anticuerpos en el inmunodiagnóstico de la histoplasmosis

Background. Current methods for the production of Histoplasma capsulatum antigens are problematic in terms of standardization, specificity, stability, repeatability and reproducibility. Aims. In this study, we sought to optimize the methodology for producing H. capsulatum antigens, and to evaluate its applicability. Methods. Antigenic preparations obtained from 12 H. capsulatum isolates were evaluated by double immunodiffusion and immunoblotting assays against homologous and heterologous sera. Results. The evaluated and optimized protocol allowed a more stable production, as well as repeatable, reproducible, with shorter culture time and less costly. By double immunodiffusion and immunoblotting assays, the best pattern of reactivity was observed for antigens obtained with 33 days of culture from the isolates 200 and 406 against the M antigen and for the isolate 200 with 15 days against H antigen. The SDS-PAGE presented antigenic components of molecular masses between 17 and 119kDa. The immunoblotting sensitivity was 95.5% and 100% with histoplasmosis sera from ill patients and sera from H. capsulatum infected but otherwise healthy patients, respectively, to the antigen derived from isolates 200 and 406. Conclusions. We suggest the employment of the antigen from isolate 200, with 15 or 30 days of culture, in the double immunodiffusion and immunoblotting assays due to its good ability to discriminate both sera from patients with histoplasmosis illness and histoplasmosis infection, in addition to its high specificity against heterologous sera (AU)

Antecedentes. Los métodos actuales para la producción de antígenos de Histoplasma capsulatum son problemáticos en términos de estandarización, especificidad, estabilidad, repetitividad y reproducibilidad. Objetivos. En este estudio se buscó optimizar la metodología para la producción de antígenos y evaluar su aplicabilidad. Métodos. Las preparaciones antigénicas obtenidas de 12 cepas de H. capsulatum se evaluaron por doble inmunodifusión en gel de agar e inmunotransferencia frente a sueros homólogos y heterólogos. Resultados. El protocolo evaluado y optimizado permitió mayor sensibilidad en la producción, más estabilidad, repetitividad y reproducibilidad con menos tiempo de cultivo y menor coste. Los mejores patrones de reactividad por inmunodifusión en gel de agar e inmunotransferencia se observaron en el antígeno M obtenido tras 33 días de cultivo de las cepas 200 y 406, y en el antígeno H de la cepa 200 tras 15 días de cultivo. Con la técnica SDS-PAGE se separaron componentes antigénicos de masas moleculares entre 17 y 119kDa. La sensibilidad de la inmunotransferencia fue del 95,5% y del 100% con sueros obtenidos de pacientes con enfermedad y con sueros de pacientes infectados, pero sanos, respectivamente, con antígenos derivados de las cepas 200 y 406. Conclusiones. Sugerimos el empleo del antígeno de la muestra 200, con 15 o 30 días de cultivo, en los ensayos de doble inmunodifusión en gel e inmunotransferencia debido a su buena capacidad para discriminar los sueros de pacientes enfermos de histoplasmosis y los de pacientes portadores sanos, además de su elevada especificidad frente a sueros heterólogos (AU)

El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el fragmento N-terminal de la proteína relacionada con la parathormona (PTHrP) regulan la proliferación de células madre mesenquimales humanas / Vascular endothelial growth factor (VEGF) and the N-terminal portion of parathyroid hormone-related protein (PTHrP) regulate the proliferation of human mesenchymal stem cells

El tejido adiposo contiene un gran número de células madre mesenquimales (Adipose Stem Cells, ASCs) que residen en su estroma vascular. Aunque existe controversia acerca de la capacidad de generar tejido óseo de estas células in vivo, in vitro constituyen un buen modelo de diferenciación osteogénica debido a su semejanza fenotípica con las células estromales de la médula ósea (Bone Marrow Stromal Cells, BMSCs) en cultivo. La diferenciación de las poblaciones osteoprogenitoras de la médula ósea está intensamente regulada por factores locales, como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la proteína relacionada con la parathormona (PTHrP), que modulan la proliferación de estas poblaciones en distintos estadios de diferenciación. Tanto el VEGF como el fragmento N-terminal de la PTHrP ejercen efectos osteogénicos. En este estudio hipotetizamos que sus efectos sobre la proliferación celular de los osteoprogenitores son dependientes del estadio de diferenciación osteoblástica. Tras confirmar su capacidad de diferenciación in vitro por expresión génica de Runx2 y acumulación de calcio, se analizó la respuesta proliferativa a estímulos con VEGF o PTHrP(1-36) de ASCs sometidas o no a inducción osteogénica. VEGF pero no PTHrP(1-36) estimuló la capacidad proliferativa de las ASCs no inducidas mientras que PTHrP(1-36), pero no VEGF, estimuló la proliferación de las ASCs inducidas, corroborando el papel diferencial de estos factores de crecimiento en distintos estadios de diferenciación (AU)

Adipose tissue contains a large number of mesenchymal stem cells (ASCs) residing in their vascular stroma. Although there is controversy regarding the ability to generate bone tissue from these cells in vivo, the in vitro cells offer a good model of osteogenic differentiation due to its phenotypic similarity with the bone marrow stromal cells (BMSCs) in culture. The differentiation of osteo-progenitor populations of bone marrow is intensely regulated by local factors, such as vascular endothelial growth factor (VEGF) and parathyroid hormone-related protein (PTHrP), which modulate these populations' proliferation in different stages of differentiation. Both the VEGF and the N-terminal fragment of the PTHrP exert osteogenic effects. In this study, we posited that its effects on proliferation of osteo-progenitors are stage dependent of osteoblastic differentiation. After confirming its capacity to in vitro differentiation by Runx2 gene expression and accumulation of calcium, the proliferative response to stimuli was analyzed with VEGF or PTHrP (1-36) of ASCs submitted or not to osteogenic induction. VEGF, but not PTHrP (1- 36), stimulated the proliferative capacity of uninduced ASCs, whereas BMSCs, but not VEGF, stimulated the proliferation of induced ASCs, corroborating the differential role of this growth in different stages of differentiation (AU)

Papel de la proteómica en la identificación de proteínas diferenciales en pacientes con SAHS / No disponible

Objetivo: Se diseña un estudio con el objetivo de valorar el papel de la proteómica en la identificación de proteínas diferenciales en pacientes con SAHS. Pacientes y métodos: Fueron incluidos 37 enfermos con sintomatología sugestiva de SAHS y un IAH ≥ 5 y un grupo control compuesto por 18 sujetos roncadores, emparejados por IMC, género y edad con el grupo con SAHS en los que se descartó un SAHS (IAH < 5). En ambos grupos se excluyeron a los sujetos que estaban diagnosticados de enfermedad crónica avanzada. En primer lugar se efectuó electroforesis bidimensional que comparó los geles de ambos grupos y estableció los spots diferenciales (sobreexpresión > 2,5 veces el grupo control y subexpresión < 0,5 veces por debajo del grupo control). Posteriormente se realizó espectrometría de masas mediante MALDI /TOF-TOF (matrix laser assisted desorption- time of flight).Resultados: Respecto al grupo control, IAH = 3,5 (3-4,1), en los enfermos con SAHS, IAH = 53 (27-74), mediante MALDI/TOF-TOF se identificó una proteína sobreexpresada, la haptoglobina que se ha relacionado con mayor riesgo vascular en pacientes con SAHS. Igualmente se identificaron dos proteínas subexpresadas, la albúmina y serotransferrina, proteínas que pueden facilitar una disminución de las defensas antioxidantes en el SAHS. Conclusiones: Se aporta el primer perfil proteómico diferencial en pacientes adultos con SAHS. Se demuestra la validez de la proteómica para identificar un conjunto de proteínas diferenciales que puedan ser útiles para el diagnóstico o para establecer un perfil de riesgo vascular (AU)

Objective: a study was designed to assess the role of proteomics in the identification of differential proteins in patient with obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome (OSAH). Patients and methods: Thirty seven patients with symptoms suggestive of OSAH and a apnea-hypopnea index (AHI) ≥ 5 were included in the study, and a control group was made up of 18 snorers, matched for BMI, gender and age with the OSAH group in which one OSAH was discarded (AHI < 5). Subjects diagnosed with advanced chronic disease were excluded from both groups. First, two-dimensional electrophoresis was performed, which compared the gels of both groups and established the differential spots (over-expression > 2.5 times the control group and under-expression < 0.5 times below the control group). Subsequently, a mass spectrometry was performed by means of MALDI / TOF-TOF (matrix laser assisted desorption - time of flight). Results: Regarding the control group, mean AHI = was 3.5 (3-4.1), and in those affected with OSAH it was, AHI = 53 (27-74). , Aan over-expressed protein, haptoglobin, was identified by means of MALDI/TOF-TOF, which has been related with a greater vascular risk in patient with OSAH. Likewise, two under-expressed proteins, albumin and serotransferrin, were identified, proteins that can facilitate a decrease of the anti-oxidant defences in OSAH. Conclusions: An initial differential proteomic profile in mature patients with OSAH was found. The legitimacy of proteomics to identify a group of differential proteins that could be useful to diagnosis or establish a profile of vascular risk has been demonstrated (AU)

Expresión de metaloproteasa de matriz 9 en el cáncer de próstata. Experiencia preliminar / Expression of matrix metalloproteinase-9 in prostate cancer. Preliminary experience

OBJETIVO: Estudiar la validez de la metaloproteasa 9 (MMP-9) como marcador complementario al PSA en el diagnóstico y el pronóstico del carcinoma de próstata.MÉTODO: Estudio prospectivo estructurado como cohorte de base hospitalaria. Fueron incluidos 100 pacientes consecutivos a los que se iba a practicar una biopsia prostática. La determinación sérica de MMP-9 se realizó mediante inmunoensayo, y el análisis estadístico con el programa informático stata/SE 8.2.RESULTADOS: 32 pacientes fueron diagnosticados de carcinoma prostático y el 52% de ellos con grado Gleason mayor o igual a 7. Los valores de MMP-9 sérica oscilaron entre 225,7 y 1932,3 nanogramos por mililitro, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas entre los pacientes con histología benigna, maligna e incierta (p=0,429). Las diferencias se acercaron a la significación estadística en el subgrupo de pacientes con PSA 4-10 ng/ml (p=0,058) y en el subgrupo PSA libre/total menor de 15% se observaron diferencias significativas (p=0,037). No se encontró relación entre el grado Gleason y el nivel de MMP-9 (p=0,739). Los niveles de PSA y MMP-9 demostraron ser independientes (Coeficiente de correlación de Pearson -0,1).CONCLUSIONES: No fue posible demostrar la eficacia de la MMP-9 para predecir el resultado de la biopsia. En el grupo de pacientes con elevaciones discretas del PSA (entre 4 y 10 ng/ml) todas las variables descriptivas fueron superiores en el grupo con histología maligna, sin alcanzar la significación estadística. Sí se alcanzó la significación cuando el cociente de PSA libre entre PSA total fue menor del 15%, pero este hallazgo no tiene relevancia en la práctica clínica, pues estos pacientes ya tienen indicación clara de biopsia. Tampoco se demuestra relación con el pronóstico al no existir diferencias de expresión de MMP-9 entre diferentes grados Gleason(AU)

OBJECTIVES: To study the validity of Matrix Metalloproteinase 9 as a complementary marker to PSA for the diagnosis and prognosis of Prostate Cancer.METHODS: Prospective study structured as a hospital-based cohort of 100 consecutive patients undergoing prostate biopsy. Serum determination of MMP-9 was carried out by means of inmunoassay . Statistical analysis was performed using the Stata/SE 8.2 software.RESULTS: 32 patients were diagnosed with prostate cancer and 52% had a Gleason score equal to or greater than 7. The values of serum MMP-9 varied between 225.7 and 1932.3 ng/ml, without significant differences among patients with benign, malignant and uncertain histology (p=0.429). The differences approached statistical significance in the subgroup of patients with PSA at 4-10 ng/ml (p=0.058), and significant differences were observed in the subgroup with free PSA to total PSA coefficient of less than 15% (p=0.037). No relationship between the Gleason score and the level of MMP-9 was shown (p=0.739). The levels of PSA and MMP-9 were shown to be independent (Pearson coefficient of correlation -0.1).CONCLUSIONS: It was not possible to show the efficacy of MMP-9 in predicting the result of the biopsy. In the group of patients with slightly increased levels of PSA (between 4 and 10 ng/ml) all the descriptive variables were higher in the group with malignant histology, though they did not reach statistical significance, they did reach significance when the coefficient of free PSA over total PSA was less than 15%, but this finding is not relevant clinically, as these patients already have a clear indication for biopsy. Neither was the relationship with the prognosis shown as there are no differences of MMP-9 expression at varying Gleason scores(AU)

Liquen plano oral y dendrocitos dérmicos / Oral lichen Planus and Dermal Dendrocytes

Introducción: El liquen plano oral (LPO) es una enfermedad inflamatoria relativamente frecuente que se presenta con un amplio abanico de formas clínicas. Todavía no se ha determinado completamente su patogenia, aunque se sabe que los linfocitos actúan de mediadores con la participación de citoquinas y otras células inflamatorias, entre ellas los dendrocitos dérmicos (DD) tipo I y tipo II (DD positivos para el factor XIIIA y CD34, respectivamente).Objetivos. Describir la presencia y distribución de estas células en el tejido, mediante técnicas inmunohistoquímicas, en 23 muestras procedentes de pacientes que reunían los criterios clínicos e histopatológicos de LPO. Resultados: Los DD factor XIII+ estaban localizados principalmente en la dermis superficial (p < 0,0001) y no en la submucosa profunda. Dichas células se encontraban en abundancia en toda la unión dermoepidérmica y se relacionaban estrechamente con la infiltración linfocitaria. Los DD factor XIIIa+ se encontraban además en el epitelio y la dermis profunda. En cambio, los DD CD34+ se distribuyeron principalmente en la dermis profunda, directamente por debajo del infiltrado linfocitario, con pocas células en la zona subepitelial. Conclusiones: Los DD estaban presentes en el LPO, con diferentes distribuciones en los tejidos. Así, los DD factor XIIIa+ predominaban en la dermis superficial, mientras que los DD CD34+ se encontraban principalmente en la dermis profunda. Esto apunta a que los DD, y sobre todo los DD factor XIIIa+ debido a su capacidad para expresar moléculas de adhesión intercelulares-1 (ICAM-1) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), pueden desempeñar una función destacada en la patogénesis del LPO (AU)

Introduction: Oral lichen planus (OLP) is a relatively common inflammatory disease with a wide range of clinical forms. Its pathogenesis has not been fully elucidated although it is known to be mediated by lymphocytes with the participation of cytokines and other inflammatory cells, including type I and type II dermal dendrocytes (DD) (factor xiIIa+ DD and CD34+ DD, respectively). Objectives: To describe the presence and tissue distribution of these cells, through immunohistochemistry, in 23 specimens from patients with clinical and histopathological criteria of OLP. Results: Factor xiIIa+ DD were mainly located in the superficial dermis (p < 0.0001) as opposed to the deep submucosa. These cells were abundant throughout the dermal-epidermal junction and closely related to lymphocyte infiltration. Moreover, factor xiIIa+ DD were also found in the epithelium and deep dermis. CD34+ DD were distributed mostly to the deep dermis directly below the lymphocyte infiltrate with few cells in the subepithelial region. Conclusions: DD were present in OLP, with distinct tissue distributions. Factor xiIIa+ DD were predominant in the superficial dermis while CD34+ DD could be found mostly in the deep dermis. These findings suggest that DD, and those positive for factor xiIIa+ in particular in view of their ability to express intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and tumor necrosis factor α (TNF-α), may play an important role in pathogenesis of OLP (AU)

The role of cancer stem cells in neoplasia of the lung: past, present and future

Through the identification and subsequent targeting of an exquisitely unique and phenotypically defined cancer stem-cell population exhibiting discrete therapeutic vulnerabilities (a potential source of tumor recurrence) better survival rates for these patients may be achieved. It is this impetus that is making the field of pulmonary stem cell biology a growing field in biomedicine. These efforts are leading to the steady identification of multi-potent, self-renewing and proliferative progenitor cell populations throughout the bronchopulmonary tree. These cells give rise to both transiently amplifying (TA) and terminally differentiated (TD) cells, which (like in many other organs) are crucial for tissue homeostasis. In leukemia, it has been shown that partially committed cells, which are normally responsible for tissue maintenance after trauma, may undergo transformation via mutations resulting in the selective expression of genes that accentuate and perpetuate these cells' self-renewal capabilities. It is therefore perhaps legitimate to consider stem cells as protumorigenic. It is when these cells undergo genetic mutations which make them acquire the ability to metastasize, that cancer occurs, rendering the concept of "cancer stem cells" a rather attractive one indeed (AU)

No disponible

Activación de macrófagos: demasiadas funciones para un tipo celular / Human macrophage activation: Too many functions and phenotypes for a single cell type

Los macrófagos desempeñan un papel fundamental en el reconocimiento y eliminación de patógenos, y en el mantenimiento de la homeostasis tisular. La elevada heterogeneidad fenotípica y funcional de los macrófagos está condicionada por el medio extracelular, y ha conducido a la definición de estados de activación (clásica, alternativa) en los que los macrófagos muestran actividades funcionales muy diversas e incluso opuestas. La base molecular de dicha heterogeneidad funcional ha empezado a desvelarse mediante el análisis de los perfiles de expresión génica y las funciones efectoras de macrófagos en diversas situaciones patológicas. El hallazgo de procesos metabólicos ligados al estado de activación de macrófagos ha conducido a la identificación de posibles dianas terapéuticas en procesos patológicos inflamatorios y proliferativos

Macrophages play pivotal roles in pathogen recognition and elimination, and in the maintenance of tissue homeostasis. To accomplish these tasks, macrophages exhibit a large degree of phenotipic and functional heterogeneity, whose extremes have been labeled as «classical» and «alternative» macrophage activation states. In the present review we summarize recent data on gene expression profiling and functional characterization of various types of macrophages under normal and pathological conditions. These studies have established new links between macrophage effector functions and several metabolic pathways, which have consequently become potential therapeutic targets for inflammatory and proliferative diseases

El potencial de la inmunomodulación con anticuerpos monoclonales anti-CD137 (4-1BB) para terapia de enfermedades malignas e infecciones virales crónicas / The immunotherapy potential of agonistic anti-CD137 (4-1BB) monoclonal antibodies for malignancies and chronic viral diseases

La manipulación farmacológica del sistema inmunitario para conseguir respuestas linfocitarias de mayor intensidad tiene aplicación potencial en inmunoterapia tumoral y en el tratamiento de enfermedades virales crónicas. Los anticuerpos monoclonales inmunoestimuladores se definen como una familia de fármacos que aumentan la respuesta inmunitaria al interaccionar como ligandos artificiales con proteínas funcionales del sistema inmunitario, activando o inhibiendo su función. Hay anticuerpos monoclonales humanizados dirigidos frente al receptor inhibidor linfocitario CD152 (CTLA-4) que se están probando en ensayos clínicos con evidencia de actividad antitumoral, aunque con la contrapartida de producir reacciones autoinmunitarias severas. Los anticuerpos anti-CD137 tienen la capacidad de inducir potentes respuestas inmunitarias, mediadas principalmente por linfocitos T citotóxicos, con el resultado de erradicar tumores transplantables de ratón de forma comparativamente superior a los anticuerpos frente a CD152. CD137 (4-1BB) es un antígeno de diferenciación expresado selectivamente en la superficie de linfocitos T y NK activados y sobre células dendríticas. Los anticuerpos monoclonales que actúan como ligandos artificiales estimuladores de este receptor (anticuerpos monoclonales agonistas anti-CD137) potencian la inmunidad celular antitumoral y antiviral en modelos experimentales murinos. Paradójicamente, estos mismos anticuerpos previenen o mejoran el curso de enfermedades autoinmunitarias establecidas en ratones como modelo. A la luz de estos datos experimentales, varios grupos de investigación han procedido a la humanización de anticuerpos dirigidos frente a CD137 humano y se plantea la inminente realización de los primeros ensayos clínicos

Pharmacological intervention on the immune system to achieve more intense lymphocyte responses has potential application in tumour immunology and in the treatment of chronic viral diseases. Immunostimulating monoclonal antibodies are defined as a new family of drugs that augment cellular immune responses. They interact as artificial ligands with functional proteins of the immune system, either activating or inhibiting their functions. There are humanized monoclonal antibodies directed to the inhibitory receptor CD152 (CTLA-4) that are being tested in clinical trials with evidence of antitumoural activity. As a drawback, anti-CTLA-4 monoclonal antibodies induce severe autoimmunity reactions in a fraction of the patients. Anti-CD137 monoclonal antibodies have the ability to induce potent immune responses mainly mediated by cytotoxic lymphocytes with the result of frequent complete tumour eradications in mice. Comparative studies in experimental models indicate that the antitumour activity of anti-CD137 monoclonal antibodies is superior to that of anti-CD152. CD137 (4-1BB) is a leukocyte differentiation antigen selectively expressed on the surface of activated T and NK lymphocytes, as well as on dendritic cells. Monoclonal antibodies acting as artificial stimulatory ligands of this receptor (anti-CD137 agonist antibodies) enhance cellular antitumoural and antiviral immunity in a variety of mouse models. Paradoxically, anti-CD137 monoclonal antibodies are therapeutic or preventive in the course of model autoimmune diseases in mice. In light of these experimental results, a number of research groups have humanized antibodies against human CD137 and early clinical trials are about to start

Alteraciones de los fenómenos de neuroplasticidad en las enfermedades de Alzheimer y Creutzfeldt-Jakob. Interrelaciones con fenómenos involutivos / Neuroplasticity changes in Alzheimer´s and Creutztfeldt-Jakob´s Diseases. Relationships to involutive phenomena

Se ha postulado que en las enfermedades neurodegenerativas,las alteraciones en los fenómenos de neuroplasticidady adaptación tienen una función muy importante,como desencadenante o motor del curso patogénico delas enfermedades. Para aclarar este extremo se ha llevadoa cabo un estudio morfohistoquímico comparativo en lacorteza cerebral prefrontal y en la corteza cerebelosa(neocerebelo) de cerebros de enfermos de Alzheimer yCreutzfeldt-Jakob (EA y ECJ). Se han analizado las variacionesen marcadores supuestamente relacionados confenómenos de neuroplasticidad sináptica (Drebrina, SNAP-25), factor de activación nuclear (NF kappa Beta -NFkB) eisoforma neuronal de la óxido nítrico sintasa (nNOS) juntoa marcardores de neuropatología (acumulación de proteínasbeta –amiloide en EA y PrPsc en ECJ-, reacción microgliale inducción de enzimas pro-inflamatorias iNOS yciclo-oxigenasa 2 (COX-2). Los resultados han mostradograndes variaciones de los marcadores entre ambos procesospatológicos, entre las cortezas cerebral y cerebelosa,entre diferentes áreas de esas regiones y entre diferentesestirpes neuronales y gliales. El significado de algunosde los marcadores (NFkB, nNOS, proteínas sinápticas) puede ser variable (plástico o involutivo) según los casos(enfermedad, región, factores). La neuroplasticidad disminuyede manera diversa según las áreas cerebrales y susrelaciones con las manifestaciones neuropatológicas tambiénson variables, aunque son manifiestos fenómenos deneuroplasticidad/adaptación en muchas áreas y neuronas.Se concluye que la activación de los supuestos marcadoresde neuroplasticidad en fases avanzadas de la enfermedad,con una idea terapéutica, puede activar fenómenosinvolutivos en algunas regiones o neuronas del cerebro

Changes in neuroplasticity and neuronal adaptativemechanisms have been postulated as origin and/or mainpathophysiological factor in neurodegenerative diseases.To analyze these theories, a comparative morphohistochemicalstudy on the cerebral (prefrontal) and cerebellar(neocerebellar) cortex from Alzheimer´s (AD) and Creutzfeldt-Jakob (CJD) post-mortem brains has been carriedout. Variations in putative markers of neuroplasticity andneuronal adaptation (synaptic proteins such as drebrinand SNAP-25; nuclear factor NF kappa Beta –NFkB-; neuronalisoform of oxide nitric synthase -nNOS) have beenstudied in close association with neuropathological markers(beta-protein deposition – amyloid in AD and PrPsc inCJD-; microglial activation, induction of iNOS and cyclooxygenase2 –COX-2). Results have shown sharp variationsin these markers when compared AD and CJD; cerebraland cerebellar cortex; different areas of these anatomicalregions; and different sets of neurons and glial cells.The meaining of somme of these markers (NFkB; nNOS;synaptic proteins) could be variable (plastic/adaptative orinvolutive), depending on different factors (disease, anatomicalregion, general or local factors, etc.). Neuroplasticity is evident in several brain regions or neurons, but this neuronalfeature decreases in different form depending alsoon the disease and the anatomical region. Their relationshipsto the neuropathological findings were also variable.In conclusion, the activation of these putative markers ofneuroplasticity, considering as therapeutical targets, inadvanced steps of the diseases, could activate neuronalinvolutive phenomena in several regions or neurons

El diagnóstico microbiológico independiente del cultivo en la candidiasis invasora. Importancia de los marcadores fúngicos / Microbiological non-culture methods for the diagnosis of invasive candidiasis: usefulness of surrogate markers

La utilidad de los marcadores serológicos en el diagnóstico de la candidiasisinvasora pasa por detectar la infección por las distintas especies del géneroCandida y diferenciar cuando estos hongos se encuentran como colonizadores ycuando se encuentran causando una infección invasora. Esta diferenciación seha intentado detectando antígenos, anticuerpos y otros componentes deCandida en el suero de los pacientes. En este artículo se revisan los antígenos,anticuerpos y otros componentes de Candida que son de utilidad en el diagnósticode laboratorio de la candidiasis invasora en pacientes críticos no neutropénicos

The usefulness of surrogate markers in the diagnosis of invasive candidiasis isbased on their ability to detect the infection caused by the different Candida spp.and to differentiate when the fungus is a colonizer or it is causing an invasivedisease. This differentiation has been tried by detecting antigens, antibodies andother Candida components in the patient's sera. In this paper we will review theantigens, antibodies and other Candida components which may be useful in thelaboratory diagnosis of invasive candidiasis in the non-neutropenic critically illpatient

Anticuerpos anti-micelio de Candida albicans en dos pacientes de cuidados intensivos con candidiasis invasora / Antibodies to Candida albicans germ tubes in two intensive care patients with invasive candidiasis

Se describen dos casos de candidiasis invasora en pacientes de una Unidad deCuidados Intensivos en los que se muestra la utilidad de los anticuerpos frente ala fase micelial de Candida albicans en el diagnóstico de la candidiasis invasoray en el seguimiento del tratamiento antifúngico

Two cases of invasive candidiasis in intensive care patients are presented toillustrate the usefulness of detection of antibodies to Candida albicans germtubes in the diagnosis of invasive candidiasis and in monitoring the efficacy ofthe antifungal treatment

Evaluation of 3 different tests for the detection of stool antigens to confirm Helicobacter pylori eradication after treatment. A pilot study

Introducción: Recientemente se han desarrollado varios métodos diagnósticos nuevos dirigidos a la detección de antígenos de Helicobacter pylori en las heces. El objetivo de nuestro estudio ha sido la evaluación de la precisión de 3 pruebas distintas de detección de antígenos en heces para confirmar la erradicación de H. pylori. Pacientes y métodos: Se administró tratamiento de erradicación de H. pylori a 26 pacientes. La erradicación se confirmó 6-8 semanas después mediante la prueba de urea marcada con 13C en el aire espirado, con análisis de muestras de heces mediante una prueba policlonal (Premier-Platinum-HpSATM), una prueba monoclonal (Amplified-IDEIA®-HpStARTM) y una prueba rápida (ImmunoCard-STAT-HpSATM). Resultados: La erradicación de H. pylori se confirmó en el 85% de los casos. Los porcentajes correspondientes a la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo negativo de la prueba policlonal fueron del 25, el 91, el 33 y el 87%. Los resultados correspondientes a la prueba monoclonal utilizando el umbral recomendado por el fabricante fueron del 100, el 46, el 25 y el 100%. No obstante, el mejor umbral considerado en nuestro estudio dio lugar a una sensibilidad del 100% y una especificidad del 95%. El área bajo la curva de rendimiento diagnóstico (receiver operating characteristics) respecto a las pruebas policlonal y monoclonal fue de 0,65 y 0,95, respectivamente. Los resultados correspondientes a la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo negativo de la prueba rápida fueron del 75, el 90, el 60 y el 95%. Conclusión: Para la confirmación de la erradicación de H. pylori tras el tratamiento no se pueden recomendar la prueba policlonal ni la prueba rápida de detección de antígenos en heces. La prueba monoclonal muestra una precisión diagnóstica mayor, aunque son necesarios nuevos estudios para poder recomendar definitivamente su aplicación de cara a la confirmación de la erradicación de H. pylori

Introduction: Recently, several new diagnostic methods aimed to detect Helicobacter pylori stool antigens have been developed. Our aim was to evaluate the accuracy of 3 different stool tests to confirm H. pylori eradication. Patients and methods: Twenty-six patients received H. pylori eradication treatment. Eradication was confirmed with 13C-urea breath test 6-8 weeks later, when stool samples were analyzed by polyclonal (Premier-Platinum-HpSATM), monoclonal (Amplified-IDEIATM-HpStARTM), and rapid test (ImmunoCard-STAT-HpSATM). Results: H. pylori was eradicated in 85% of the cases. Sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value with the polyclonal test were: 25%, 91%, 33% and 87%. Corresponding results with the monoclonal test, using the cut-off point recommended by the manufacturer, were 100%, 46%, 25% and 100%. However, the best cut-off point in our study had 100% sensitivity and 91% specificity. The area under ROC curve for the polyclonal and the monoclonal tests was 0.65 and 0.95. Diagnostic accuracy with the rapid test was 75%, 90%, 60% and 95%. Conclusion: Neither the polyclonal stool antigen test nor the rapid stool antigen test can be recommended to confirm H. pylori eradication after treatment. The monoclonal test has better diagnostic accuracy, although more studies are necessary to definitively recommend its use for the confirmation of H. pylori eradication success

Vigilancia epidemiológica mediante marcadores moleculares de resistencia frente a antimaláricos en aislados de Plasmodium falciparum importados a Barcelona, España / Molecular epidemiological surveillance of markers for antimarial drugs in Plasmodium falciparum isolates imported to Barcelona, Spain

Fundamento y objetivo: Se han descrito correlaciones convincentes entre mutaciones en determinados genes de Plasmodium falciparum y la resistencia contra antimaláricos. Con la intención de aplicar las técnicas moleculares en los mecanismos de vigilancia epidemiológica en el Hospital Clínic de Barcelona, y para mapear grados potenciales de resistencia, investigamos la presencia de mutaciones en los codones relevantes de genes asociados a resistencias en aislados de P. falciparum importados por viajeros. Pacientes y método: Se analizó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y restricción con enzimas el genotipo de los genes pfctr, pfmdr1, dhfr, dhps y citocromo B en cepas de P. falciparum aisladas de 53 pacientes diagnosticados en el Servicio de Medicina Tropical con síntomas de malaria después de haber realizado un viaje a zonas endémicas de malaria. Resultados: El 63% de los pacientes presentó un aislado de P. falciparum con la mutación K76T en pfctr. En el 54% de los aislados se encontró Tyr86 en pfmdr1. Las mutaciones en los codones 51, 59 y 108 de dhfr se encontraron en el 33, el 49 y el 44% de los aislados, respectivamente. Las mutaciones en los codones 436, 437 y 540 de dhps se encontraron en el 35, el 35 y el 8,5% de los aislados. El 30% de los viajeros estaba infectado por parásitos que presentaban 3 o más mutaciones en alguno de los codones de dhps y dhfr. Ninguno de los pacientes presentó mutado el codón Tyr268 en el gen del citocromo B. Conclusiones: La alta prevalencia de mutaciones en los aislados importados sugiere el rápido desarrollo y la expansión de resistencias a la mayoría de los antimaláricos comúnmente usados. La concurrencia de más de una mutación en localizaciones diferentes sugiere la expansión de resistencias múltiples, lo que pone así de manifiesto la ineficacia de la monoterapia con los antipalúdicos más comunes

Background and objective: There have been described compelling correlations between mutations in some Plasmodium falciparum genes and resistance to antimalarial drugs. To apply molecular techniques in the mechanisms of epidemiological surveillance in the Hospital Clínic of Barcelona and to map potential levels of resistance, we investigated the presence of mutations in the relevant codons of genes associated with resistance in P. falciparum isolates imported by travellers. Patients and method: The genes pfctr, pfmdr1, dhfr, dhps and cytocrhome b were analyzed by PCR and enzymatic restriction in P. falciparum isolates from 53 persons attending the Tropical Medicine Department after a trip to a malaria endemic area. Results: 63% of patients were infected with a P. falciparum isolate with the K76T mutation in pfctr. Tyr86 in pfmdr1 was found in 54% of the isolates. Mutations in codons 51, 59 and 108 in dhfr were found in 33%, 49% and 44% of the isolates, respectively. Mutations in codons 436, 437 and 540 in dhps were found in 35%, 35% and 8.5% of the isolates. 30% of travellers were infected by parasites displaying 3 or more mutations in any of the codons of dhps and dhfr. None of the patients had a mutation in the Tyr268 codon of the cytochrome B gene. Conclusions: The high prevalence of mutations in the imported isolates suggests a fast development and expansion of resistance against most of the antimalarial drugs commonly used. The concurrence of more than one mutation in different loci suggests the expansion of multiple resistances

Transdiferenciación neuronal de células madre mesenquimales de médula ósea humana / Neuronal transdifferentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells

En el presente estudio se muestra la posibilidad de lograruna transdiferenciación de células madre mesenquimales humanas,obtenidas del estroma de médula ósea, hacia neuronasadultas. Los resultados obtenidos confirman experiencias previasacerca de que las células madre del estroma de la médulaósea experimentan cambios fenotípicos y expresan marcadoresde diferenciación neuronal cuando se cultivan in vitrocon determinadas sustancias químicas. Por otra parte, el presenteestudio demuestra que la transdiferenciación neuronalde estas células puede ser obtenida también por medio de unco-cultivo con células de Schwann. La transdiferenciación enco-cultivo comienza más tardíamente, y aunque la expresiónde nestina, como primer marcador neural, se observa ya a las4 horas del co-cultivo, esta expresión disminuye entre las 24 y72 horas, momento en que comienzan a observarse células conexpresión de marcadores de diferenciación neuronal, aumentandoprogresivamente el número de células que expresanEnolasa específica neuronal, Proteína de neurofilamentos yBeta-tubulina

This study describes the possibility to obtain neuronaltransdifferentiation of human mesenchymal stem cells, obtainedfrom the bone marrow stroma. Our present resultsconfirm previous experiences showing that these cells expressmarkers of neuronal differentiation when they arecultured with certain chemical factors. On the other hand,the present study demonstrates that a neuronal transdifferentiationof these cells can also be obtained by means of aco-culture with Schwann cells. In co-culture, transdifferentiationbegins later, although nestin expression is first observed4 hours after beginning the co-culture, it decreasedbetween 24 and 72 hours, and at this time, a clear increasein the number of NSE, NF and beta-tubulin-positive cells,can be seen

Efectos moduladores de los fitoestrogenos sobre la diferenciacion de osteoblastos humanos / Modulatory effects of phytoestrogens on human osteoblast cell differentiation

Los estrógenos, principales responsables del mantenimientode la masa ósea en la mujer, inhiben la resorción óseaen parte a través de su interacción con los osteoblastos. Losisoflavonoides vegetales poseen propiedades estrogénicas y unpotencial terapéutico en la osteoporosis. En el estudio planteado,se han evaluado los efectos de la genisteína, daidzeína yresveratrol sobre la función osteoblástica. Estos fitoestrógenos,de modo similar al b-estradiol, no afectan a la actividaddel factor de transcripción cbfa1/runx2 ni la expresión proteicadel receptor PTH1 (marcadores precoces de diferenciaciónosteoblástica) en células osteoblásticas de hueso trabecularhumano o en células MG-63 de osteosarcoma humano. Sinembargo, en estas células, estos agentes estimularon la actividadde fosfatasa alcalina, y la expresión de osteocalcina y deosteoprotegerina, e inhibieron la interleuquina-6 a través delfactor NF-kB; mientras que ejercieron efectos variables sobrela expresión proteica del ligando del receptor activador delNF-kB. Nuestros resultados indican que los fitoestrógenosanalizados poseen acciones osteoformadoras mediadas por receptoresestrogénicos en los osteoblastos humanos

Estrogens, the main factors responsible for the maintenanceof bone mass in women, inhibit bone resorption at leastin part by interacting with osteoblasts. Plant isoflavoneshave estrogen-like features and thus a potential role in preventingosteoporosis. In the present study, the effects of genistein,daidzein and resveratrol on several osteoblastic markerswere evaluated. We found that these phytoestrogens,similarly to 17b-oestradiol, failed to affect Cbfa1/runx2transcription factor activity and the PTH1 receptor proteinexpression (early osteoblast differentiation markers) in eitherosteoblastic cells from human trabecular bone or humanosteoblastic osteosarcoma cells MG-63. In contrast, inthe latter cells, these agents increased alkaline phosphataseactivity, as well as osteocalcin and osteoprotegerin expression,but they decreased NF-kB-dependent interleukin-6mRNA expression. Meanwhile, they differently affect theprotein expression of the receptor activator of NF-kB ligand.Our findings indicate that these phytoestrogens display osteogenicactions which appear to be mediated through estrogenicreceptors in human osteoblasts

Recidiva del cáncer de próstata después de la prostatectomía radical y radioterapia de rescate / Prostate cancer recurrence after radical prostatectomy and salvage radiotherapy

OBJETIVO: Evaluar la eficacia de la radioterapia en el lecho prostático en pacientes con cáncer de próstata y fracaso bioquímico después de la prostatectomía radical. MATERIAL Y MÉTODOS: Analizamos los resultados de 292 pacientes a los que se le practicó prostatectomía radical por cáncer de próstata localizado T1-T2, entre enero de 1992 y junio de 2003, con un seguimiento medio de 36 meses (rango 6 meses a 12 años). Se detecta fracaso bioquímico (PSA > 0,20 ng/ml) en 75 (26%) pacientes. De los 75 pacientes con fracaso bioquímico, 9 (12%) se diagnosticó de recidiva local siguiendo los siguientes criterios: a) Primer PSA obtenido a las 6 semanas de la intervención 6 meses. c) Tiempo de duplicación del PSA > 6 meses. d) Velocidad de PSA después de la prostatectomía radical <0,75/ng/ml/año. e) Nivel de PSA después de la prostatectomía radical <2,5 ng/ml. Los 9 pacientes diagnosticados de recidiva local reciben una dosis media de 56,42 Gy en el lecho prostático. RESULTADOS: De los 9 pacientes diagnosticados de recidiva local, en 7 (77,7%) se obtuvo una respuesta completa durante un tiempo medio de seguimiento de 25 meses (6-30 meses). El tiempo entre la radioterapia y la respuesta, en los pacientes con respuesta completa, siempre fue inferior a los 3 meses. No se observaron efectos adversos importantes secundarios a la radioterapia. CONCLUSIONES: La radioterapia de rescate puede ser beneficiosa en un seleccionado grupo de pacientes con recidiva local. La cinética del PSA después de la prostatectomía radical es útil para distinguir las recidivas locales de las metástasis a distancia

OBJETIVE: To evaluate the efficacy of the radiotherapy to prostatic bed in patients with biochemical recurrence for prostate cancer after radical prostatectomy. MATERIAL AND METHODS: We analyse the results of 292 patients underwent radical prostatectomy for localized prostate cancer T1-T2 between January 1992 and June 2003, with an average folow-up of 36 months (range 6 months to 12 years). We detect biochemical recurrence (PSA >0.20 ng/ml) in 75 (26%) patients. Of 75 patients with biochemical recurrence, 9 (12 %) was diagnosed of local recurrence by the following criteria: a) The first PSA obtained 6 weeks after radical prostatectomy 6 months. c) The prostate specific antigen doubling time >6 months. d) The prostate specific antigen velocity after radical prostatectomy <0.75 ng/ml/year. e) The prostate specific antigen level after radical prostatectomy <2.5 ng/ml. The 9 patients diagnosed of local recurrence received an average dose of 56.42 Gy in the prostate bed. RESULTS: Of all 9 patients with local recurrence, 7 (77.7%) has complete response with an average time of followup of 25 months (6-30 months). The time between the radiotherapy and the response, in patients with complete response, was lower than 3 months. Were not observed significant adverse effects associated to radiotherapy. CONCLUSIONS: The salvage radiotherapy may be beneficial in select patients with local recurrence. The characteristics of prostate specific antigen elevation are useful in distinguishing men with local recurrence from those with distant metastases

Molecular signals involved in CD4 versus CD8 T cell commitment / Señales moleculares implicadas en la diferenciación cd4 versus CD8

During T cell development in the thymus, differentiation and selection processes take place to ensure the generation of a restricted self-tolerant T cell repertoire with the ability to recognize and eliminate foreign pathogens. Thymocytes that recognise self peptides on self MHC molecules with low avidity are rescued from programmed cell death and are positively selected, while those thymocytes recognising self peptide-MHC complexes with high avidity are deleted by negative selection. It is known that signals transduced through the T Cell Receptor are crucial for the survival and differentiation of immature thymocytes, during positive selection. One of the most important events during this selection process is the choice of a specific T cell lineage, to become a helper CD4 T cell or a cytotoxic CD8 T cell. The molecular events involved in this choice are still on debate. The initial models described to explain this selection process were known as the «instructive» and the «stochastic» models, both of which have found experimental evidence in favour and against. However, a «strength of signal» model, based on the intensity and/or duration of the TCR-MHC/peptide interaction has recently acquired more support. Finally we also describe a new model called “kinetic signalling” model which offers a new perspective of the mechanisms by which T cell commitment takes place in the thymus. In this review, we will also discuss the current knowledge about the molecular mechanisms involved in CD4 versus CD8 lineage commitment, including signalling and transcriptional pathways, which have been postulated to participate in this differentiation process (AU)

Durante el desarrollo de los linfocitos T se llevan a cabo distintos procesos de selección y diferenciación que aseguran la generación de un repertorio de linfocitos T restringido por MHC propio y auto-tolerante, capaz de reconocer y eliminar patógenos extraños. Los timocitos que reconocen con baja avidez péptidos propios son rescatados de la muerte celular programada y seleccionados positivamente, mientras que los timocitos que reconocen complejos péptido-MHC con alta avidez son eliminados mediante selección negativa. Se sabe que las señales moleculares transducidas a través del receptor para el antígeno de los linfocitos T (TCR), son cruciales para la supervivencia y diferenciación de los timocitos inmaduros durante la selección positiva. Uno de los eventos más importantes durante este proceso de selección es la elección de un linaje T específico, que diferenciará el timocito en un linfocito T CD4 cooperador, o bien CD8 citotóxico. Las señales moleculares implicadas en esta elección están todavía en debate. Inicialmente los modelos propuestos para explicar la elección de linaje, conocidos como los modelos «instructivo» y estocástico, encontraron evidencia experimental a favor y en contra. Recientemente ha adquirido mayor apoyo el modelo de la «fuerza de la señal» basado en la intensidad y/o duración de la interacción TCR-MHC/péptido. Por último, describimos un nuevo modelo «de la cinética de señalización» que aporta una nueva perspectiva sobre los mecanismos implicados en el proceso de elección de linaje que tiene lugar durante el desarrollo de los timocitos. Esta revisión discute el conocimiento actual sobre los mecanismos moleculares implicados en el compromiso hacia linaje CD4 versus CD8, incluyendo las vías de señalización y los factores transcripcionales que se ha postulado participan en dicho proceso de diferenciación (AU)

Traumatismo craneoencefálico: valor pronóstico de los marcadores de hipercoagulabilidad y fibrinólisis / Head trauma: prognostic value of hypercoagulability and fibrinolysis markers

Objetivo. Estudiar la activación hemostática en los enfermos con traumatismo craneoencefálico (TCE) y su relación con la gravedad y el pronóstico. Diseño. Estudio de cohortes prospectivo con un período de inclusión de 28 meses y seguimiento evolutivo a los 6 meses. Ámbito. Un Servicio de Medicina Intensiva de un Hospital Universitario. Pacientes y método. Pacientes con TCE único, con menos de 6 horas de evolución al ingreso y que no presentaran situaciones que interfirieran con la coagulación. Intervenciones. Realizamos dos extracciones sanguíneas de vena periférica (al ingreso y a las 24 horas). Determinamos fragmentos de trombina 1+2 (F1+2), complejo trombina-antitrombina (TAT) y D-dímeros. La gravedad del TCE fue medida mediante Glasgow Coma Score (GCS) y dividimos a los pacientes en dos grupos, TCE grave y moderado-leve. La evolución fue medida mediante Glasgow Outcome Score (GOS), obteniendo dos grupos, buena y mala evolución. Realizamos un análisis estadístico de los resultados mediante ANOVA de dos vías. Resultados. Se incluyeron 45 enfermos. Edad media 46,1; 31 varones. GCS 10,1; SAPS II 32,5. Veintiséis enfermos presentaron TCE leve-moderado y 19 TCE grave. Veintisiete tuvieron mala evolución y 18 buena evolución. Los marcadores fueron más elevados de forma significativa en el grupo de TCE severo frente al grupo TCE levemoderado y el grupo de peor evolución frente al grupo de buena evolución. Conclusiones. F1+2, TAT y D-dímeros están más elevados en pacientes con TCE más grave y peores resultados evolutivos a los 6 meses (AU)

Señalización mediada por el receptor para el antígeno de los linfocitos T (TCR): CD3-epsilon es algo más que un amplificador de señales / Insights into T cell antigen receptor (TCR) signaling: CD3-epsilon is more than a signal amplifier

Para que se produzca el reclutamiento de tirosincinasas y otras moléculas adaptadoras o efectoras al receptor para el antígeno de los linfocitos T (complejo TCR/CD3) se necesita la fosforilación de las tirosinas de un motivo de activación presente en todas las subunidades CD3 del complejo. Este motivo es conocido por su acrónimo ITA M (del inglés Immuno receptor Ty rosine-based Activation Motif). En los últimos diez años se ha investigado a fondo el papel de los ITAM de CD3 en la activación de los linfocitos T y en la selección tímica. Sin embargo, la función de los ITAM de las otras subunidades CD3 es menos conocida. En esta revisión se pondrá de manifiesto el potencial señalizador del dominio intracitoplásmico de CD3 con especial hincapié en el papel que tienen las interacciones proteína - proteína y proteína-lípidos en la regulación de la activación de linfocito T. También se discutirá la capacidad del ITAM de CD3 para actuar como un regulador negativo de la señalización mediada por el T C R (AU)

Los marcadores tumorales de secreción: algo más que indicadores clínicos / Tumoral secretion markers:something more than clinical indicators

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