Effective treatment of a case of pregnancy toxemia in sheep: case report / Tratamento eficaz de um caso de toxemia de gestação em ovelhas: relato de caso

Pregnancy toxemia has a high mortality rate and few cases with effective treatment are reported, especially when associated with secondary diseases. Therefore, the present work reports the case of a sheep, which was referred to the veterinary hospital of UFMG, in the last month of pregnancy, presenting apathy, hyporexia and sternal recumbency. After the diagnosis of pregnancy toxemia, the fetuses were removed while still alive, but did not survive. Monitoring was started with blood gas analysis, blood glucose assessments and laboratory tests. The results were consistent with liver damage, which was justified by the condition of lipolysis. Treatment consisted of electrolyte replacement plus 50% glucose and potassium chloride, along with administration of antibiotics (ceftiofur, 5mg/kg/SID/IM/7 days), flunixim meglumine (2.2mg/kg/SID/IM first day and 1.1mg/kg/SID/IM on the second and third days) and omeprazole (4mg/kg/SID/oral). The patient had secondarily clinical laminitis, which was treated with cryotherapy and anti-inflammatory drugs, in addition to mastitis, using a single dose of intramammary antibiotics. The work demonstrated the effectiveness of the treatment of pregnancy toxemia, when performed early and intensively, associated with daily clinical and laboratory monitoring of the animal.

A toxemia da prenhez possui alto índice de mortalidade, e poucos casos com tratamento eficaz são relatados, principalmente quando associados a doenças secundárias. Diante disso, o presente trabalho relata o caso de uma ovelha, que foi encaminhada ao hospital veterinário da UFMG, no último mês de gestação, apresentando apatia, hiporexia e decúbito esternal. Após o diagnóstico de toxemia da prenhez, os fetos foram retirados ainda vivos, porém não sobreviveram. Iniciou-se um monitoramento com análises hemogasométricas, avaliações de glicemia e exames laboratoriais. Os resultados foram condizentes com lesão hepática, a qual foi justificada pelo quadro de lipólise. O tratamento consistiu em reposição hidroeletrolítica associada à glicose 50% e a cloreto de potássio, juntamente com administração de antibióticos (ceftiofur, 5mg/kg/SID/IM/7 dias), flunixim meglumine (2,2mg/kg/SID/IM no primeiro dia e 1,1mg/kg/SID/IM no segundo e terceiro dias) e omeprazol (4mg/kg/SID/oral). A paciente apresentou secundariamente laminite clínica, a qual foi tratada com crioterapia e antinflamatórios, além de um quadro de mastite, sendo utilizado antibiótico intramamário em dose única. O trabalho demonstrou a eficácia do tratamento da toxemia da prenhez, quando realizado de forma precoce e intensiva, associado a um monitoramento clínico e laboratorial diário do animal.

Potencial deteriorante da microbiota mesófila, psicrotrófica, termodúrica e esporulada do leite cru / Deteriorating potential of the mesophilic microbiota, psychrotrophic, termoduric and spore raw milk

Considerando os diversos problemas tecnológicos e econômicos que os microrganismos deteriorantes acarretam aos laticínios, o objetivo deste trabalho foi quantificar aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos e esporulados no leite cru produzido na região Norte do Paraná e verificar a capacidade proteolítica e lipolítica desses microrganismos. Foram analisadas 20 amostras de leite cru e determinadas contagens de aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos mesófilos, termodúricos psicrotróficos e esporos aeróbios e o perfil proteolítico e lipolítico de cada grupo. A contagem média de aeróbios mesófilos foi de 1,7x106UFC/mL acima do limite estabelecido pela Instrução Normativa 76 (3,0x105UFC/mL); 55% das amostras apresentaram contagens dentro dos padrões. As contagens de psicrotróficos variaram de 1,0x102 a 9,9x106UFC/mL e em 30% das amostras esse valor foi superior ao de mesófilos. A média de termodúricos mesófilos foi de 2,4x104UFC/mL, de termodúricos psicrotróficos 1,7x102UFC/mL e de esporos aeróbios foi de 5,0x101UFC/mL. Quanto ao perfil deteriorante, todos os grupos apresentaram atividade lipolítica e proteolítica elevadas, com predomínio de bactérias lipolíticas. Os valores encontrados indicam que o manejo higiênico-sanitário inadequado durante a ordenha e o resfriamento prolongado favorece a proliferação da microbiota deteriorante, que pode promover alterações significativas na qualidade e no rendimento do leite e seus derivados, mesmo após tratamento térmico.

Considering that technological problems and economic losses are basically caused by spoilage microorganisms on dairy industry, therefore the aim of this study was to quantify the mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric and aerobic spore-forming in raw milk produced in northern Paraná and also verify the proteolytic and lipolytic capacity of these microorganisms. Twenty samples of raw milk were analyzed and were determined mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric mesophilic, psychrotrophic thermoduric and aerobicspore-forming counts and proteolytic and lipolytic capacity from each group. The average counts of aerobic mesophilic were 1,79x106CFU/mL, above the limit established to Normative Instruction 76 (3,0x105CFU/mL); 55% samples had scores within the standards. Psychrotrophic counts ranged from 1,0x102 to 9,9x106CFU/mL and in 30% samples this count was higher than mesophilic. The average mesophilic thermoduric was 2,4x104CFU/mL, psychrotrophic thermoduric was 1,7x102CFU/mL and aerobic spore-forming was 5,0x101CFU/mL. As for the spoilage profile, all groups showed higher lipase and proteolytic activity, with a predominance of lipolytic bacteria. The values found indicates the inappropriate hygienic-sanitary management during milking and maintaining molk refrigerated for long periods until pasteurize, it can favorsthe proliferation of spoilage microbiota, which can promote significant changes in the quality and yield of milk and dairy products, even after the heat treatment.

Potencial deteriorante da microbiota mesófila, psicrotrófica, termodúrica e esporulada do leite cru / Deteriorating potential of the mesophilic microbiota, psychrotrophic, termoduric and spore raw milk

Considerando os diversos problemas tecnológicos e econômicos que os microrganismos deteriorantes acarretam aos laticínios, o objetivo deste trabalho foi quantificar aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos e esporulados no leite cru produzido na região Norte do Paraná e verificar a capacidade proteolítica e lipolítica desses microrganismos. Foram analisadas 20 amostras de leite cru e determinadas contagens de aeróbios mesófilos, psicrotróficos, termodúricos mesófilos, termodúricos psicrotróficos e esporos aeróbios e o perfil proteolítico e lipolítico de cada grupo. A contagem média de aeróbios mesófilos foi de 1,7x106UFC/mL acima do limite estabelecido pela Instrução Normativa 76 (3,0x105UFC/mL); 55% das amostras apresentaram contagens dentro dos padrões. As contagens de psicrotróficos variaram de 1,0x102 a 9,9x106UFC/mL e em 30% das amostras esse valor foi superior ao de mesófilos. A média de termodúricos mesófilos foi de 2,4x104UFC/mL, de termodúricos psicrotróficos 1,7x102UFC/mL e de esporos aeróbios foi de 5,0x101UFC/mL. Quanto ao perfil deteriorante, todos os grupos apresentaram atividade lipolítica e proteolítica elevadas, com predomínio de bactérias lipolíticas. Os valores encontrados indicam que o manejo higiênico-sanitário inadequado durante a ordenha e o resfriamento prolongado favorece a proliferação da microbiota deteriorante, que pode promover alterações significativas na qualidade e no rendimento do leite e seus derivados, mesmo após tratamento térmico.(AU)

Considering that technological problems and economic losses are basically caused by spoilage microorganisms on dairy industry, therefore the aim of this study was to quantify the mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric and aerobic spore-forming in raw milk produced in northern Paraná and also verify the proteolytic and lipolytic capacity of these microorganisms. Twenty samples of raw milk were analyzed and were determined mesophilic aerobic, psychrotrophic, thermoduric mesophilic, psychrotrophic thermoduric and aerobicspore-forming counts and proteolytic and lipolytic capacity from each group. The average counts of aerobic mesophilic were 1,79x106CFU/mL, above the limit established to Normative Instruction 76 (3,0x105CFU/mL); 55% samples had scores within the standards. Psychrotrophic counts ranged from 1,0x102 to 9,9x106CFU/mL and in 30% samples this count was higher than mesophilic. The average mesophilic thermoduric was 2,4x104CFU/mL, psychrotrophic thermoduric was 1,7x102CFU/mL and aerobic spore-forming was 5,0x101CFU/mL. As for the spoilage profile, all groups showed higher lipase and proteolytic activity, with a predominance of lipolytic bacteria. The values found indicates the inappropriate hygienic-sanitary management during milking and maintaining molk refrigerated for long periods until pasteurize, it can favorsthe proliferation of spoilage microbiota, which can promote significant changes in the quality and yield of milk and dairy products, even after the heat treatment.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential

ABSTRACT: The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.

RESUMO: O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study...(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX...(AU)

Spoilage potential of spore-forming bacteria from refrigerated raw milk / Potencial deteriorante de bactérias formadoras de esporos do leite cru refrigerado

Aerobic bacterial spores are an important group of microorganisms in raw milk. These microbes are thermoduric, whereas the vegetative forms are thermophilic, thermoduric and psychrotrophic and reduce the shelf life of pasteurized milk. In Brazil, there are a lack of studies on the load of aerobic spores in raw milk; thus, little is known about the spoilage activity of these organisms. The aim the present study was to quantify the aerobic spores in Brazilian refrigerated raw milk of dairy region of Castro, Paraná state, assess the potential proteolytic and/or lipolytic isolates and identify the microorganisms derived from the germination. Twenty milk samples were evaluated, and the aerobic spore count was performed after plating the samples following heat treatment at 80ºC for 12 min. The activity proteolytic and lipolytic isolates were evaluated through subculture on milk agar and tributyrin agar, respectively, and these microorganisms were identified using partial 16S rRNA gene sequences that were compared through GenBank. The aerobic spore counts ranged from 1 to 3.7 log CFU.mL-¹, with a mean of 1.75 (± 0.59) log CFU.mL-¹. After spore germination, 137 aerobic bacterial isolates were obtained, 40 of which (29.2%) showed milk spoilage activity. Among these, 31 isolates (77.5%) were proteolytic and lipolytic, seven isolates (17.5%) were exclusively lipolytic and two isolates (5%) were only proteolytic. Based on the 16S rRNA gene analysis, Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) and Brevibacillus spp. (2.5%) were identified. Studies of Brazilian raw milk microbiota have not yet described B. circulans which are frequently detected in milk from other countries. Among the 22 B. licheniformis isolates, 21 microbes (95.5%) showed proteolytic and lipolytic activity, and one isolate (4.5%) exhibited only proteolytic activity. The two B. pumilus isolates were proteolytic...(AU)

Esporos de bactérias aeróbias são um importante grupo de micro-organismos no leite cru. Esses micro-organismos são termodúricos, e suas formas vegetativas são termofílicas, termodúricas e psicrotróficas e reduzem a vida útil do leite pasteurizado. No Brasil, não há estudos sobre os esporos aeróbios no leite cru, assim, pouco se sabe sobre o potencial deteriorante dessa microbiota no leite cru brasileiro. O objetivo do presente trabalho foi quantificar esporos aeróbios no leite cru refrigerado brasileiro, avaliar o seu potencial proteolítico e/ou lipolítico e identificar esses micro-organismos originários da germinação dos esporos. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, nas quais foi realizada a contagem de esporos aeróbios após o tratamento térmico de 80ºC por 12 min. A atividade proteolítica e/ou lipolítica dos isolados foi avaliada após o repique das colônias em ágar leite e tributirina, respectivamente, e a identificação desses micro-organismos deteriorantes foi realizada pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e comparação com as sequencias depositadas no GenBank. As contagens de esporos aeróbios variaram de 1 a 3.7 log CFU.mL-¹, com média de 1.75 (± 0.59) log UFC.mL-¹. Após a germinação dos esporos, foram obtidas 137 colônias, das quais 40 (29.2%) apresentaram algum tipo de atividade deteriorante: 31 (77.5%) isolados foram proteolíticos e lipolíticos, sete (17.5%) foram exclusivamente lipolíticos e dois (5%) foram apenas proteolíticos. Baseado nas sequencias do gene 16S rRNA, foram identificados Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) e Brevibacillus spp. (2.5%) entre os esporulados deteriorantes. Estudos preliminaries sobre a microbiota do leite brasileiro ainda não haviam descrito B. circulans e Paenibacillus, gêneros frequentemente descritos no leite de outros países. Entre os 22 B. licheniformis...(AU)

Spoilage potential of Paenibacillussp. in Brazilian raw milk / Potencial deteriorante de Paenibacillus sp. no leite cru refrigerado brasileiro

Bacterial spores are widespread in the environment and can contaminate milk. Spores are resistant to thermal conditions and your germination reduces milk shelf-life because the aerobic bacteria that are sporulated produce proteases and lipases. The aim of this study was identify Paenibacillus sp., the spoilage microbiota, arising from the germination of spores in raw milk and your spoilage potential. Twenty different milk samples were treated at 80°C/12min and plated to isolate spore-forming bacteria. These strains were picked in milk agar and tributyrin agar for verification of their potential proteolytic and lipolytic activities, respectively. Amplification and sequencing of the 16S rRNA gene of the strains for identification by similarity to the DNA sequences deposited in GenBank was performed. One hundred and thirty-seven isolates were obtained, of which 40 (29.2%) showed spoilage activity for milk. Of these, three (7.5%) were identified as strains of Paenibacillus sp., and all were lipolytic. Paenibacillus sp. have been identified as primarily responsible for the spoilage of pasteurized milk with a long shelf-life in other countries. To increase the shelf-life of Brazilian pasteurized milk, it is important to identify the sporulated microbes to determine their origin and to control the contamination of milk by vegetative forms such as spores.(AU)

Os esporos de bactérias estão amplamente difundidos no ambiente e podem contaminar o leite. Os esporos conferem resistência aos processos térmicos e sua germinação pode reduzir a vida útil do leite pasteurizado, uma vez que bactérias esporuladas aeróbias são muito frequentemente produtoras de proteases e lipases. O objetivo do presente trabalho foi identificar Paenibacillus sp. na microbiota deteriorante, oriunda da germinação de esporos no leite cru, e avaliar o seu potencial deteriorante. Vinte amostras de leite de propriedades distintas foram tratadas a 80ºC/12min e semeadas para isolamento de bactérias formadoras de esporos. Essas cepas foram repicadas em ágar leite e tributirina para verificação do seu potencial proteolítico e lipolítico, respectivamente. Foi realizada a amplificação e sequenciamento do gene 16S do rRNA para identificação das cepas por similaridade com as sequências de DNA depositadas no GenBank. Foram obtidos 137 isolados, dos quais 40 (29,2%) apresentaram atividade deteriorante do leite. Dessas, 3 (7,5%) cepas foram identificadas como Paenibacillus sp., todas lipolíticas. Paenibacillus sp. são considerados os principais responsáveis pela deterioração do leite pasteurizado de longa vida útil em outros países. Para o aumento da vida útil do leite pasteurizado brasileiro, é importante conhecer a microbiota esporulada, de forma a determinar sua origem e poder controlar a contaminação do leite tanto pelas formas vegetativas como por seus esporos.(AU)

Spoilage potential of Paenibacillussp. in Brazilian raw milk / Potencial deteriorante de Paenibacillus sp. no leite cru refrigerado brasileiro

Bacterial spores are widespread in the environment and can contaminate milk. Spores are resistant to thermal conditions and your germination reduces milk shelf-life because the aerobic bacteria that are sporulated produce proteases and lipases. The aim of this study was identify Paenibacillus sp., the spoilage microbiota, arising from the germination of spores in raw milk and your spoilage potential. Twenty different milk samples were treated at 80°C/12min and plated to isolate spore-forming bacteria. These strains were picked in milk agar and tributyrin agar for verification of their potential proteolytic and lipolytic activities, respectively. Amplification and sequencing of the 16S rRNA gene of the strains for identification by similarity to the DNA sequences deposited in GenBank was performed. One hundred and thirty-seven isolates were obtained, of which 40 (29.2%) showed spoilage activity for milk. Of these, three (7.5%) were identified as strains of Paenibacillus sp., and all were lipolytic. Paenibacillus sp. have been identified as primarily responsible for the spoilage of pasteurized milk with a long shelf-life in other countries. To increase the shelf-life of Brazilian pasteurized milk, it is important to identify the sporulated microbes to determine their origin and to control the contamination of milk by vegetative forms such as spores.

Os esporos de bactérias estão amplamente difundidos no ambiente e podem contaminar o leite. Os esporos conferem resistência aos processos térmicos e sua germinação pode reduzir a vida útil do leite pasteurizado, uma vez que bactérias esporuladas aeróbias são muito frequentemente produtoras de proteases e lipases. O objetivo do presente trabalho foi identificar Paenibacillus sp. na microbiota deteriorante, oriunda da germinação de esporos no leite cru, e avaliar o seu potencial deteriorante. Vinte amostras de leite de propriedades distintas foram tratadas a 80ºC/12min e semeadas para isolamento de bactérias formadoras de esporos. Essas cepas foram repicadas em ágar leite e tributirina para verificação do seu potencial proteolítico e lipolítico, respectivamente. Foi realizada a amplificação e sequenciamento do gene 16S do rRNA para identificação das cepas por similaridade com as sequências de DNA depositadas no GenBank. Foram obtidos 137 isolados, dos quais 40 (29,2%) apresentaram atividade deteriorante do leite. Dessas, 3 (7,5%) cepas foram identificadas como Paenibacillus sp., todas lipolíticas. Paenibacillus sp. são considerados os principais responsáveis pela deterioração do leite pasteurizado de longa vida útil em outros países. Para o aumento da vida útil do leite pasteurizado brasileiro, é importante conhecer a microbiota esporulada, de forma a determinar sua origem e poder controlar a contaminação do leite tanto pelas formas vegetativas como por seus esporos.

Proteolytic and lipolytic microbiota of refrigerated raw milk from northeast and southern regions of Brazil / Microbiota proteolítica e lipolítica de leite cru refrigerado da região nordeste e sul do Brasil

The shelf life of milk and milk derivatives is directly related to the microbiological quality of refrigerated raw milk. Spoilage microorganisms with proteolytic and/or lipolytic properties are primarily responsible for the decrease in the quality of milk, which is reflected in the shelf life of pasteurized milk and all derivatives. The aim of this study was to determine the spoilage microbial load of refrigerated raw milk from the northeast and southern regions of Brazil, which have different climatic and technological conditions of production. We evaluated 46 samples of milk from the state of Paraná in the southern region, and 10 samples of milk from the state of Maranhão in the northeast region, totaling 56 samples collected from November 2013 to November 2014. The producers of Paraná were divided into large (20) or small (26) according to the average daily production. All producers of Maranhão were considered small ( 500L/day). The proteolytic and lipolytic microorganism counts were conducted in milk agar and tributyrin agar, respectively. Milk from the large producers of Paraná had average counts of 1.4 × 104 CFU/mL for proteolytic microorganisms and 1.2 × 103 CFU/mL for lipolytics microorganisms, significantly (p 0.05) lower than the small producers in the same state, and the producers of Maranhão. Producers of Maranhao had counts of 1.1 × 105 CFU/mL for proteolytic microorganisms and 2 × 105 CFU/mL for lipolytic microorganisms, with the proteolytic count significantly lower than that of small Paraná producers. The amount of proteolytic and lipolytic spoilage microorganisms in milk is influenced by the adaptation of the microorganisms to cold, promoted by the cooling of milk, which is practiced less frequently in the countrys northeastern region. The amount of spoilage microorganisms is also affected by the implementation of milking hygiene practices, which reduce contamination.(AU)

A vida útil do leite e de seus derivados está diretamente relacionada à qualidade microbiológica do leite cru refrigerado. Os micro-organismos deteriorantes proteolíticos e/ou lipolíticos são os principais responsáveis pela diminuição da qualidade tecnológica do leite, repercutindo na vida útil do leite pasteurizado, UHT e todos os derivados. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi determinar a carga microbiana deteriorante do leite cru refrigerado das regiões nordeste e sul do Brasil, que apresentam diferentes condições climáticas e tecnológicas de produção. Foram avaliadas 46 amostras de leite do estado do Paraná, região sul, e 10 amostras do Maranhão, região nordeste, totalizando 56 amostras coletadas no período de novembro de 2013 a novembro de 2014. Os produtores paranaenses foram divididos entre grandes (20) ou pequenos (26) de acordo com a produção diária média. Todos os produtores do estado do Maranhão foram considerados pequenos ( 500L/dia). Foi realizada a contagem de micro-organismos proteolíticos e lipolíticos em ágar leite e ágar tributirina, respectivamente. O leite oriundo dos grandes produtores do estado do Paraná apresentou contagens médias de 1,4 x 104 UFC/mL para proteolíticos e 1,2 x 103 UFC/mL para lipolíticos, significativamente (p 0,05) mais baixas em relação pequenos produtores do mesmo estado, e também menores que as contagens dos produtores maranhenses. Os produtores do estado do Maranhão apresentaram contagens de 1,1 x 105 UFC/mL para proteolíticos e 2 x 105 UFC/mL para lipolíticos, com contagem de proteolíticos significativamente inferior à apresentada por pequenos produtores do Paraná.(AU)

Proteolytic and lipolytic microbiota of refrigerated raw milk from northeast and southern regions of Brazil / Microbiota proteolítica e lipolítica de leite cru refrigerado da região nordeste e sul do Brasil

The shelf life of milk and milk derivatives is directly related to the microbiological quality of refrigerated raw milk. Spoilage microorganisms with proteolytic and/or lipolytic properties are primarily responsible for the decrease in the quality of milk, which is reflected in the shelf life of pasteurized milk and all derivatives. The aim of this study was to determine the spoilage microbial load of refrigerated raw milk from the northeast and southern regions of Brazil, which have different climatic and technological conditions of production. We evaluated 46 samples of milk from the state of Paraná in the southern region, and 10 samples of milk from the state of Maranhão in the northeast region, totaling 56 samples collected from November 2013 to November 2014. The producers of Paraná were divided into large (20) or small (26) according to the average daily production. All producers of Maranhão were considered small ( 500L/day). The proteolytic and lipolytic microorganism counts were conducted in milk agar and tributyrin agar, respectively. Milk from the large producers of Paraná had average counts of 1.4 × 104 CFU/mL for proteolytic microorganisms and 1.2 × 103 CFU/mL for lipolytics microorganisms, significantly (p 0.05) lower than the small producers in the same state, and the producers of Maranhão. Producers of Maranhao had counts of 1.1 × 105 CFU/mL for proteolytic microorganisms and 2 × 105 CFU/mL for lipolytic microorganisms, with the proteolytic count significantly lower than that of small Paraná producers. The amount of proteolytic and lipolytic spoilage microorganisms in milk is influenced by the adaptation of the microorganisms to cold, promoted by the cooling of milk, which is practiced less frequently in the country’s northeastern region. The amount of spoilage microorganisms is also affected by the implementation of milking hygiene practices, which reduce contamination.

A vida útil do leite e de seus derivados está diretamente relacionada à qualidade microbiológica do leite cru refrigerado. Os micro-organismos deteriorantes proteolíticos e/ou lipolíticos são os principais responsáveis pela diminuição da qualidade tecnológica do leite, repercutindo na vida útil do leite pasteurizado, UHT e todos os derivados. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi determinar a carga microbiana deteriorante do leite cru refrigerado das regiões nordeste e sul do Brasil, que apresentam diferentes condições climáticas e tecnológicas de produção. Foram avaliadas 46 amostras de leite do estado do Paraná, região sul, e 10 amostras do Maranhão, região nordeste, totalizando 56 amostras coletadas no período de novembro de 2013 a novembro de 2014. Os produtores paranaenses foram divididos entre grandes (20) ou pequenos (26) de acordo com a produção diária média. Todos os produtores do estado do Maranhão foram considerados pequenos ( 500L/dia). Foi realizada a contagem de micro-organismos proteolíticos e lipolíticos em ágar leite e ágar tributirina, respectivamente. O leite oriundo dos grandes produtores do estado do Paraná apresentou contagens médias de 1,4 x 104 UFC/mL para proteolíticos e 1,2 x 103 UFC/mL para lipolíticos, significativamente (p 0,05) mais baixas em relação pequenos produtores do mesmo estado, e também menores que as contagens dos produtores maranhenses. Os produtores do estado do Maranhão apresentaram contagens de 1,1 x 105 UFC/mL para proteolíticos e 2 x 105 UFC/mL para lipolíticos, com contagem de proteolíticos significativamente inferior à apresentada por pequenos produtores do Paraná.

Influência do segundo mensageiro GMPc e suas vias de sinalização no conteúdo lipídico de complexos cumulus-oócitos bovinos maturados in vitro

SCHEFER, L. Influência do segundo mensageiro GMPc e suas vias de sinalização no conteúdo lipídico de complexos cumulus-oócitos bovinos maturados in vitro. 2020. 81f. Dissertação (Mestrado) Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga - SP, 2020. A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotecnologia amplamente utilizada no Brasil e no mundo. No entanto, ainda existem limitações quanto à sua eficiência em comparação com embriões produzidos in vivo. Em bovinos, uma das dificuldades encontradas é o acúmulo lipídico em blastocistos de PIV que diminui a qualidade embrionária e sua resistência à criopreservação. Buscando alternativas para resolver este problema, é necessário compreender do metabolismo lipídico de complexos cumulus-oócitos bovinos (CCOs). A via AMPc/PKA é a via clássica da lipólise celular, porém, foi demonstrada também a atuação da via do GMPc/PKG no metabolismo lipídico. Assim, como CCOs bovinos expressam componentes dessa via, o objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento do GMPc no metabolismo lipídico de CCOs bovinos através da manipulação farmacológica da mesma. No primeiro estudo, divido em três experimentos, foi avaliado o conteúdo lipídico de oócitos e células do cumulus (CC) sob influência de estimuladores de síntese do GMPc (NPPB e Protoporfirina IX) e sob a influência da inibição da PKG (KT5823). Observamos que apenas o NPPB foi capaz de reduzir o conteúdo lipídico dos oócitos e nas células do cumulus. Além disso, avaliamos a expressão de genes relacionados ao metabolismo lipídico (PLIN2), dos receptores de peptídeos natriuréticos (NPRs) e foi realizada a quantificação dos níveis intracelulares de GMPc nos mesmos tratamentos anteriormente utilizados, porém não houve diferença significativa em nenhum dos parâmetros avaliados. Durante todos os experimentos realizados, foram avaliadas as taxas de maturação nuclear dos oócitos e nenhum dos tratamentos utilizados afetou a maturação oocitária. No segundo estudo, dividido em dois experimentos, foram utilizados os mesmos estimuladores de síntese de GMPc (NPPB e Protoporfirina IX) na MIV, sendo avaliados os perfis lipídicos de oócitos e embriões produzidos in vitro. Os perfis de oócitos e embriões bovinos não foram alterados pela manipulação da via GMPc. As taxas de clivagem e blastocisto com NPPB não foram afetadas, porém, no grupo tratado com Protoporfirina IX, as taxas foram zeradas. Em conclusão, sugerimos o envolvimento da via GMPc no metabolismo lipídico de CCOs bovinos e que a manipulação dessa via pode reduzir o conteúdo lipídico dos oócitos sem afetar o perfil lipídico dos oócitos e embriões resultantes.

SCHEFER, L. Influence of the second messenger cGMP and its signaling pathways on the lipid content of in vitro matured bovine cumulus-oocyte complexes. 2020. 81f. M.Sc. Dissertation - Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga - SP, 2020. In vitro embryo production (IVP) is a biotechnology widely used in Brazil and worldwide. However, there are still limitations regarding its efficiency compared to embryos produced in vivo. In cattle, one of the difficulties encountered is the accumulation of lipids in IVP blastocysts, which reduces embryonic quality and its resistance to cryopreservation. Looking for alternatives to solve this problem, it is necessary to understand the lipid metabolism of bovine cumulus-oocyte complexes (COCs). The cAMP/PKA pathway is the classic cell lipolysis pathway, but the role of the cGMP/PKG pathway in lipid metabolism has also been demonstrated. Thus, as bovine COCs express components of this pathway, the objective of the present study was to investigate the involvement of cGMP in the lipid metabolism of bovine COCs through its pharmacological manipulation. In the first study, divided into three experiments, the lipid content of oocytes and cumulus cells (CC) was evaluated under the influence of cGMP synthesis stimulators (NPPB and Protoporphyrin IX) and under the influence of PKG inhibition (KT5823). We observed that only NPPB was able to reduce the lipid content of oocytes and cumulus cells. In addition, we evaluated the expression of genes related to lipid metabolism (PLIN2), natriuretic peptide receptors (NPRs) and the quantification of intracellular cGMP levels was performed in the same treatments, however, there were no significant differences in any of the parameters evaluated . During all the experiments carried out, nuclear oocyte maturation rates were evaluated and none of the treatments used affected oocyte maturation. In the second study, divided into two experiments, the same cGMP synthesis stimulators (NPPB and Protoporphyrin IX) were used during IVM, and the lipid profiles of oocytes and embryos produced in vitro were evaluated. The lipid profiles of bovine oocytes and embryos were not altered by manipulation of the cGMP pathway. Cleavage and blastocyst rates were not affected by NPPB, but in the group treated with Protoporphyrin IX, no development was observed. In conclusion, we suggest the involvement of the cGMP pathway in the lipid metabolism of bovine CCOs and that manipulation of this pathway can reduce the lipid content in oocytes without affecting the lipid profile of these of oocytes and resulting embryos.

Qualidade do leite UAT sob diferentes condições de armazenamento

O leite UAT (UHT) é o tipo de leite fluido mais consumido pela população, devido principalmente à possibilidade de ser estocado a temperatura ambiente, por longo período de tempo. Porém, esse armazenamento prolongado pode resultar em perda de qualidade e integridade, devido principalmente a ação de enzimas termorresistentes que permanecem ativas após o processamento. Apesar do Regulamento Técnico de Identidade e Qualidade do leite UAT estabelecer exigências quanto ao teor de matéria gorda, acidez, estabilidade ao etanol 68% e à quantidade de micro-organismos mesófilos aeróbios, observa-se que apenas esses parâmetros podem não ser suficientes para averiguar a qualidade desse leite. Por isso, objetivou-se avaliar as alterações de natureza físico-química e microbiológica que ocorrem durante o armazenamento do leite UAT por até 120 dias. Foram avaliadas 120 amostras de leite UAT, procedentes de duas indústrias do estado de Minas Gerais, armazenadas em duas temperaturas de estocagem (20°C/30°C) e por cinco períodos de armazenamento (0, 30, 60, 90 e 120 dias). Foi adotado o delineamento inteiramente casualizado, em um arranjo fatorial 2x2x5, totalizando 20 tratamentos, com seis repetições por tratamento (seis lotes). O estudo objetivou avaliar a contagem de micro-organismos mesófilos aeróbios, determinar a composição centesimal, contagem de células somáticas, acidez, densidade, crioscopia, índice de lipólise e caseinomacropeptídeo (CMP), além das análises de conservantes e reconstituintes no leite UAT. Quando comparados aos parâmetros exigidos pelo RTIQ do leite UAT, observou-se que os valores médios de acidez, gordura e extrato seco desengordurado (ESD) mantiveram-se dentro do padrão até o último dia de estocagem. Quanto aos outros parâmetros [densidade, crioscopia, índice de lipólise, lactose, sólidos totais (ST), contagem de células somáticas (CCS); teor de proteína, caseína e CMP], não são abrangidos pela legislação específica do leite UAT, o que pode levar a falhas durante a inspeção desse produto. A densidade, CCS, contagem de micro-organismos mesófilos aeróbios e Contagem Bacteriana Total (CBT) não tiveram alterações relacionadas aos períodos de estocagem, diferentes temperaturas de armazenamento e indústrias. Houve aumento gradativo e significativo (p<0,05), ao longo do tempo, da acidez, índice de lipólise e CMP; por outro lado houve diminuição gradativa significativa (p<0,05) de matéria gorda, ST, ESD e proteína total. A lactose manteve-se com média praticamente constante durante o período de estocagem e teve diminuição significativa (p<0,05) apenas aos 120 dias. Houve efeito de temperaturas e indústrias nos parâmetros de índice crioscópico, lactose, ST, ESD e CMP, mostrando que o aumento da temperatura de armazenamento pode intensificar as alterações que ocorrem no leite e a qualidade do leite está associada à sua origem (indústria). Nas análises de neutralizantes da acidez, reconstituintes da densidade, conservantes do leite e resíduos de antibióticos não foram encontradas alterações, descartando a possibilidade de fraudes no leite. Os resultados demonstram que há perda gradativa da qualidade do leite UAT durante sua vida de prateleira, devendo-se atentar para a qualidade do leite cru que será processado e refletirá na vida útil do leite UAT. Além disso, a legislação do leite UAT pode ser aprimorada, de modo a estabelecer parâmetros de controle de qualidade que permitam sua avaliação em outros quesitos ainda não contemplados, como o CMP que pode ser um ótimo índice de qualidade do leite no mercado por refletir condições de qualidade do leite cru e do processado

UHT milk is the most consumed fluid milk by the Brazilian population, because of the easy storage at room temperature. However, such storage, when prolonged, may result in loss of quality, integrity and safety, mainly due to the action of thermoresistant enzymes that remain active after processing. Although the Brazilian Regulation of UHT milk establishes requirements for fat content, acidity, ethanol stability and the counting of aerobic mesophilic microorganisms. It is observed that only these parameters may not be adequate to verify the quality of this milk. The objective of this study was to evaluate the physicochemical and microbiological changes that occur during UHT milk storage for up to 120 days. A total of 120 UHT milk samples were collected from two dairy industries in the state of Minas Gerais, stored at two temperatures (20°C/ 30°C) and five periods (0, 30, 60, 90, and 120 days). A completely randomized design was used in a 2x2x5 factorial arrangement, with a total of 20 treatments, with six replicates per treatment (six batches). The objective of this study was to evaluate: aerobic mesophilic microorganisms counting, centesimal composition, somatic cell count, acidity, density, freezing point, lipolysis index and caseinomacropeptide (CMP), as well as the residues of preservatives and other illegal substances added to UHT milk. When compared to the Brazilian parameters for UHT milk, the average values of acidity, fat and solids non-fat (SNF) contents remained within the acceptable values until the last day of storage. However, the other parameters [density, freezing point, lipolysis index, somatic cell count (SCC), lactose, total solids (TS), casein and protein content, and CMP] are not covered by specific legislation of UHT milk in Brazil. Density, SCC, aerobic mesophilic microorganisms and Total Bacterial Count (TBC) did not change due to storage time and temperatures, and industries. There was a gradual and significant increase (p < 0.05) only at day 120. The different temperatures and industries resulted in considerable changes of freezing point, lactose, TS and SNF contents and CMP, showing that low milk quality and increasing storage temperatures may intensify the changes that occur in milk. No extraneous substances, such as neutralizers of the acidity, density modifiers, preservatives or residues of antibiotics were detected. The results show that there is a gradual loss of UHT milk quality during its shelf life, which is related to the raw milk quality and storage time. In addition, UHT milk legislation could be improved with the addition of new quality control parameters to improve quality monitoring during storage, such as CMP index

Effect of the chronic administration of caffeine on adipose mass and lipid profile of Wistar rats / Efeito da administração crônica de cafeína na massa adiposa e no perfil lipídico de ratos Wistar

This work aimed at verifying the effect of the chronic ingestion of caffeine on body weight and adiposity of Wistar rats. Sixteen male Wistar rats weighting on average 240 g were divided into two groups, one control and the other caffeine-treated (5 mg kg-1, orally) for five weeks. At the end, the groups were evaluated for their differences in body weight; weight of the periepididymal, retroperitoneal, subcutaneous and mesenteric fat pads; size of the retroperitoneal adipocytes; liver and heart weight; glycemia and plasma lipids. Statistically significant differences were observed in adipocyte size and total serum cholesterol, while the results for the other parameters were not statistically different. Therefore, this study showed that, using an oral dose of caffeine within acceptable (non toxic) limits, it is possible to reduce the size of adipocytes of non-obese Wistar rats, as well as to reduce the serum cholesterol levels, even in the absence of physical activity or other active compounds.(AU)

Este trabalho teve como objetivo verificar o efeito da ingestão crônica de cafeína no peso corporal e na adiposidade de ratos Wistar. Foram utilizados 16 ratos Wistar machos com peso em torno de 240 g divididos em dois grupos, um controle e outro tratado com cafeína (5 mg kg-1, via oral) por cinco semanas. Ao final, foi avaliada a diferença entre os dois grupos em relação ao peso corporal; ao peso dos depósitos de gordura periepididimal, retroperitoneal, subcutânea e mesentérica; ao tamanho dos adipócitos retroperitoneais; ao peso do coração e do fígado; e aos valores de glicemia e lipídeos plasmáticos. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas no tamanho dos adipócitos e na quantidade plasmática de colesterol total, sendo que o resultado das demais variáveis não foi significativo. Portanto, este estudo mostrou que, usando uma dose oral de cafeína dentro dos limites considerados aceitáveis (não-tóxicos), é possível reduzir o tamanho dos adipócitos de ratos Wistar não-obesos, bem como reduzir seus níveis séricos de colesterol, mesmo na ausência de atividade física ou de outros compostos ativos.(AU)

Qualidade do leite em tanques e influência da contagem de células somáticas nas características sensoriais do leite pasteurizado e queijo coalho

A contagem de células somáticas (CCS) aumentada no leite acarreta mudanças nos componentes, pelo incremento na atividade proteolítica e lipolítica do leite, influenciando diretamente no rendimento, qualidade sensorial e vida de prateleira dos derivados lácteos. Diante disso, esta pesquisa teve como principal objetivo avaliar o efeito da contagem de células somáticas sobre a qualidade do leite cru baseado nos parâmetros de composição físico-química, e características sensoriais do leite e derivados. A pesquisa foi desenvolvida na Associação de Pequenos Agropecuaristas do Sertão de Angicos (APASA), no município de Angicos. Foram coletadas amostras de leite cru de 21 tanques de expansão, durante os meses de outubro de 2016 a maio de 2017. Durante as coletas registraram-se as informações referentes ao tipo de ordenha e foi feito o monitoramento da temperatura e tempo de armazenagem do leite nos tanques. As amostras foram coletadas em frascos apropriados, conservadas refrigeradas (4 a 7°C), e, em seguida, enviadas a um laboratório credenciado à Rede Brasileira de Controle de Qualidade do Leite para análise de composição, contagem de células somáticas e contagem bacteriana total. Para relacionar os níveis de CCS com a composição química, foi feito um escalonamento da CCS nos valores de CCS originando três categorias: Baixa CCS - CCS < 200.000 céls/ml; Média CCS - 201 400 mil. A matéria-prima para fabricação dos derivados foi selecionada com base nos valores médios de CCS obtidos do leite cru oriundo dos tanques, obtendo-se duas categorias: Baixa CCS inferior a 100.000 céls/mL; alta CCS entre 400.000 e 500.000 céls/mL. As categorias selecionadas foram submetidas à pasteurização e, posteriormente, fabricado o queijo coalho. A análise sensorial foi realizada no leite pasteurizado e no queijo coalho, ambos com dois níveis de CCS, sendo executada por 100 julgadores não treinados, utilizando-se a escala triangular, escala hedônica e teste de intenção de consumo. Os dados foram submetidos ao método estatístico de análise descritiva, para obtenção de média, desvio-padrão e coeficiente de variação. Em relação ao tipo de ordenha, a contagem bacteriana total foi menor para o leite obtido através de ordenha mecânica. As condições de armazenagem demonstraram que a temperatura teve mais variação nos tanques individuais e observou-se correlação positiva entre o tempo de armazenagem e a CBT do leite. Os parâmetros físico-químicos estavam de acordo com a legislação vigente, porém a maior parte dos valores de CCS e CBT apresentou-se acima do preconizado estabelecido pela IN 7 (BRASIL, 2016). Na análise sensorial, o leite pasteurizado e o queijo coalho elaborados a partir de leite com baixa CCS apresentaram maior aceitação sensorial.

Increased somatic cell count (SCC) in milk leads to changes in the components, by the increase in the proteolytic and lipolytic activity of milk, directly influencing the yield, sensory quality and shelf life of dairy products. There is evidence that there may be a relationship between SCC and the bioactive and antioxidant components of milk. The objective of this research was to evaluate the effect of somatic cell counts on the quality of raw milk based on the parameters of physicochemical composition, bioactive compounds, antioxidant activity and sensorial characteristics of milk and milk products. The research was developed in the Associação de PequenosAgropecuaristas do Sertão de Angicos (APASA) in the city of Angicos. Samples of raw milk were collected from 21 expansion tanks during the months of October 2016 to May 2017. During the collection the information regarding the type of milking was recorded and the temperature and storage time of the milk were monitored in the tanks. The samples were collected in appropriate bottles, stored refrigerated (4 to 7 ° C) and then sent to a laboratory accredited to the Brazilian Milk Quality Control Network for analysis of composition, somatic cell count and total bacterial count. The raw material for the manufacture of the derivatives was selected based on the average SCC values obtained from raw milk from the tanks, obtaining two categories: Low SCC less than 100,000 cells / mL; high SCC between 400,000 and 500,000 cells / mL. The selected classes were submitted to pasteurization and, later, cheese rennet. The sensorial analysis was performed in pasteurized milk and rennet cheese, both with two SCC levels, performed by 100 untrained judges, using triangular scale, hedonic scale and consumption intention test. The data were submitted to the statistical method of descriptive analysis, to obtain mean, standard deviation and coefficient of variation. Regarding the type of milking, the total bacterial count was lower for the milk obtained through mechanical milking. The storage conditions showed that the temperature had more variation in the individual tanks and a positive correlation was observed between the storage time and the total bacterial count of the milk. The physicochemical parameters were in accordance with the current legislation, but most of the values of SCC and CBT were higher than those recommended. In the sensorial analysis, the pasteurized milk and the coalho cheese elaborated from milk with low CCS presented greater sensorial acceptance.

IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE DETERIORANTES MESÓFILOS EM LEITE CRU REFRIGERADO

A baixa qualidade do leite cru e reduzida vida útil do leite pasteurizado no Brasil causados pela deterioração dos constituintes do leite por parte dos microrganismos deteriorantes reflete diretamente seu potencial tecnológico para indústria. Conhecer os microrganismos deteriorantes que constituem a microbiota do leite cru refrigerado possibilita identificar a origem destes contaminantes, desta forma permite-se estabelecer ações de controle para evitar sua presença no leite. O objetivo deste estudo foi identificar geneticamente a microbiota mesofílica deteriorante do leite cru refrigerado da região de Castro-PR por meio de ferramentas moleculares afim de caracterizar a microbiota com atividade proteolítica e lipolítica. Foram coletadas 18 amostras de leite cru refrigerado direto dos tanques de expansão de propriedades da região centro-oriental do Paraná. As propriedades eram dotadas de ordenhadeira mecânica de circuito fechado com sistema de pré-resfriamento em placas e refrigeração por tanque de expansão. A contagem de microrganismos mesófilos foi realizada em Petrifilm ACTM e para a verificação da atividade proteolítica e/ou lipolítica utilizou-se ágar leite suplementado (9:1) com solução leite em pó desnatado reconstituído (10%) e ágar tributirina suplementado (99:1) com tributirina, respectivamente. Para extração de DNA das cepas de mesófilos foi utilizada a técnica da fervura e para amplificação parcial do gene 16S rRNA utilizou-se a técnica de PCR, utilizando os primers 27F e 1492R. Utilizou-se a análise de RFLP para definir os grupos genéticos entre as cepas isoladas e facilitar a escolha dos exemplares para sequenciamento. A média da contagem de microrganismos mesófilos foi de 3,58 log UFC/mL. A microbiota mesofílica com atividade proteolítica e /ou lipolítica foi identificada através da amplificação e sequenciamento do gene 16S rRNA. Todas as cepas foram identificadas com percentual de identidade de 100% a partir da comparação com dados dos GenBank. Diante disso, selecionou-se 172 cepas, as quais apresentaram capacidade proteolítica e/ou lipolítica, onde 66 (38%) cepas apresentaram atividade proteolítica, 57 (33%) ambas atividades e (49) 29% apenas atividade lipolítica. Bactérias Gram-positivas corresponderam 83,72% do total de cepas e 16,28% foram Gram-negativas. A identificação genética das cepas mesofílicas com capacidade deteriorante mostrou predominância dos gêneros Lactococcus e Enterococcus. (40,11%), seguida por Staphylococcus sp. (13,94%); Streptococcus sp (13,36%), Acinetobacter sp. (11,62%), Kurthia sp. e Bacillus sp. (5,23%), Rothia sp. (4,06%) e Stenotrophomonas (1,16%). Em relação a atividade deteriorante os gêneros Lactococcus e Enterococcus apresentaram entre os isolados, maior atividade proteolítica enquanto que o Streptococcus dysgalactae apresentou maior atividade lipolítica. Os gêneros Rothia sp e Kurthia sp foram isoladas pela primeira vez como deteriorantes do leite cru.

The low quality of raw milk and short shelf life of pasteurized milk in Brazil caused by deterioration of milk constituents by spoilage microorganisms directly reflects their technological potential for industry. Knowing the spoilage microorganisms that constitute the microbiota of refrigerated raw milk makes it possible to identify the origin of these contaminants, in this way it is possible to establish control actions to avoid their presence in milk. The objective of this study was to genetically identify the spoilage mesophilic microbiota of the refrigerated raw milk from Castro-PR through molecular tools in order to characterize the microbiota with proteolytic and lipolytic activity. Eighteen samples of refrigerated raw milk were collected directly from bulk tanks of properties in the central-eastern region of Paraná. The properties consisted of a closed-loop mechanical milking machine with pre-cooling system and refrigerated bulk tank. The counts of mesophilic microorganisms were carried out in Petrifilm ACTM and for the proteolytic and / or lipolytic activity using supplemented milk agar (9: 1) with reconstituted skimmed milk powder (10%) and supplemented tributyrin agar (99: 1) with tributyrin, respectively. For the extraction of DNA from the mesophilic strains, the boiling technique was used and for partial amplification of the 16S rRNA gene the PCR technique, using primers 27F and 1492R. RFLP analysis was used to define the genetic groups among the isolated strains and to facilitate the selection of the species for sequencing. The mean count of mesophilic microorganisms was 3.58 log CFU / mL. The mesophilic microbiota with proteolytic and / or lipolytic activity was identified through the amplification and sequencing of the 16S rRNA gene. All strains were identified with 100% identity percentage from GenBank data. A total of 172 strains with proteolytic and / or lipolytic capacity were selected, where 66 (38%) strains showed proteolytic activity, 57 (33%) both activities and (49) 29% only lipolytic activity. Gram-positive represented 83.72% of total strains and 16.28% were Gram-negative. The molecular identification of mesophilic strains with spoilage potential showed predominance of Lactococcus and Enterococcus (40.11%), Staphylococcus sp. (13.94%); Streptococcus sp (13.36%), followed by Acinetobacter sp. (11.62%), Kurthia sp. and Bacillus sp. (5.23%), Rothia sp. (4.06%) and Stenotrophomonas (1.16%). In relation to the deteriorating activity, the genera Lactococcus and Enterococcus presented greater proteolytic activity among the isolates, whereas Streptococcus dysgalactae showed higher lipolytic activity. The genera Rothia sp and Kurthia sp were isolated for the first time as spoilage of raw milk.

MICRO-ORGANISMOS DETERIORANTES DO LEITE: ATIVIDADE PROTEOLÍTICA E LIPOLÍTICA DE BACTÉRIAS PSICROTRÓFICAS E TERMODÚRICAS MESÓFILAS

A presença de enzimas microbianas deteriorantes termoestáveis proteolíticas e lipolíticas pode comprometer a qualidade e vida útil do leite processado e derivados, mesmo que o leite cru apresente baixas contagens totais de micro-organismos. Além disso, as formas microbianas vegetativas ou esporuladas podem resistir à pasteurização e também atuarem como deteriorantes do leite pasteurizado. Como passo preliminar para redução dos micro-organismos deteriorantes no leite cru refrigerado, aumento da vida útil e do potencial tecnológico do leite pasteurizado, o presente trabalho teve como objetivo identificar a diversidade genética de micro-organismos psicrotróficos e termodúricos com potencial deteriorante proteolítico e/ou lipolítico no leite cru refrigerado de alta qualidade microbiológica. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado produzido na bacia leiteira da região de Castro, Paraná, nas quais foram utilizados métodos oficiais para a contagem e isolamento de psicrotróficos e termodúricos e técnicas biomoleculares de agrupamento genético hierárquico (Restriction Fragment Length Polymorphism) e caracterização (sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e análise filogenética) dos isolados. As contagens médias de psicrotróficos e termodúricos foram 1,1 x 104 e 3,2 x 102 UFC/mL, respectivamente. Entre os psicrotróficos, 47,8% do total de isolados (n = 295) apresentaram atividade deteriorante, dos quais 30,5% foram proteolíticos e lipolíticos simultaneamente, 31,9% exclusivamente proteolíticos e 37,6% lipolíticos. Pelos dendrogramas foram determinados 36 clusters de psicrotróficos proteolíticos e 47 de lipolíticos com 70% de similaridade hierárquica, cuja identificação filogenética determinou o predomínio das espécies com os mesmos perfis polimórficos de Lactococcus lactis (24,5%), Enterobacter kobei (15,4%), Aerococcus urinaeequi (8,4%) e Acinetobacter lwoffii (6,3%) entre os psicrotróficos deteriorantes. Serratia ureilytica, Enterobacter kobei, Pseudomonas spp. e Yersinia enterocolitica foram os psicrotróficos identificados como potencialmente produtores de metaloprotease alcalina (aprX). Entre os termodúricos, 42,6% do total de isolados (n = 310) foram deteriorantes, dos quais 32,6% apresentaram atividade proteolítica e lipolítica simultaneamente, 31% exclusivamente proteolítica e 36,4% apenas lipolítica. Esses isolados proteolíticos e lipolíticos foram agrupados em 41 e 38 clusters, respectivamente, considerando 50% de similaridade. A análise filogenética das sequências parciais do gene 16S rRNA revelou que predominam entre os termodúricos deteriorantes as espécies Bacillus licheniformis (34,1%), Brachybacterium nesterenkovii (14,4%), Enterococcus faecalis (9,1%) e Streptococcus agalactiae (8,3%). Foi observado que 50% das cepas de termodúricos pertencem aos gêneros Bacillus e Paenibacillus, frequentemente descritos como esporulados que resistem a tratamentos térmicos mais intensos que a pasteurização e que comprometem a vida útil do leite pasteurizado dos Estados Unidos. Os resultados do presente trabalho demonstram que a composição da microbiota é tão importante quanto a sua quantificação. Apesar de baixas contagens, psicrotróficos e termodúricos podem comprometer a qualidade do leite e derivados pela sua atividade deteriorante, sendo um fator limitante na manutenção da qualidade do leite fluido e derivados. Portanto, é necessário desenvolver ferramentas sensíveis e eficientes para monitorar e controlar a presença desses micro-organismos no leite cru.

The presence of heat-stable spoilage enzymes can compromise the milk and dairy products quality and shelf life, even if raw milk with low total microorganisms counts. In addition, the vegetative or sporulated microbial forms may resist pasteurization and also deteriorate pasteurized milk. The present work aimed to identify the genetic diversity of psychrotrophic and thermoduric microorganisms with proteolytic and/or lipolytic potential in high microbiological quality refrigerated raw milk. Twenty samples of refrigerated raw milk produced in the dairy region of Castro, Paraná State, Brazil, were evaluated per official methods for the counting and isolation of psychrotrophic and thermoduric. Biomolecular techniques of hierarchical genetic grouping (Restriction Fragment Length Polymorphism) and identification by partial sequencing of the 16S rRNA gene and phylogenetic analysis. The mean of psychrotrophic and thermoduric counts were 1.1 x 104 and 3.2 x 102 CFU/mL, respectively. Among the psychrotrophs, 47.8% of the total isolates (n = 295) presented spoilage potential, of which 30.5% were proteolytic and lipolytic simultaneously, 31.9% exclusively proteolytic and 37.6% lipolytic. The dendrograms determined 36 clusters of proteolytic and 47 lipolytic psychrotrophs with 70% genetic hierarchical similarity, whose phylogenetic identification shows the predominance of the species with the same polymorphic profiles of Lactococcus lactis (24.5%), Enterobacter kobei (15.4%), Aerococcus urinaeequi (8.4%) and Acinetobacter lwoffii (6.3%) among the deteriorating psychrotrophs. Serratia ureilytica, Enterobacter kobei, Pseudomonas spp. and Yersinia enterocolitica were the psychrotrophs identified as potentially producing of alkaline metalloprotease (aprX gene positive). Among the thermoduric, 42.6% of the total isolates (n = 310) shows spoilage potential, of which 32.6% presented proteolytic and lipolytic activity simultaneously, 31% were exclusively proteolytic and 36.4% only lipolytic. These proteolytic and lipolytic isolates were grouped in 41 and 38 clusters, respectively, considering 50% of genetic similarity. Phylogenetic analysis of partial sequences of 16S rRNA gene revealed that Bacillus licheniformis (34.1%), Brachybacterium nesterenkovii (14.4%), Enterococcus faecalis (9.1%) and Streptococcus agalactiae (8.3%). It was observed that 50% of the thermoduric strains belong to the genus Bacillus and Paenibacillus, often described as sporulated that resist heat treatments that are more intense at pasteurization and that compromise the shelf life of the pasteurized milk in the United States. The results of the present study demonstrate that the microbiota composition of raw milk as so important that your quantification. Although low counts, psychrotrophic and thermoduric can compromise the milk quality and dairy produtcs by their deteriorating activity, being a limiting factor for the maintenance of the quality. Therefore, it is necessary to development of a sensitive and efficient tools to monitor and control the presence of these microorganisms in raw milk.

AÇÃO DO GLIFOSATO, IVERMECTINA E FLUAZURON SOBRE O CRESCIMENTO E ATIVIDADE ENZIMÁTICA DOS FUNGOS Penicillium Roqueforti E Penicillium Camemberti E AVALIAÇÃO DO PERFIL MICOLÓGIDO DE QUEIJOS TIPO GORGONZOLA

Medicamentos como a Ivermectina e o Fluazuron e defensivos agrícolas como o glifosato, são amplamente utilizados na agropecuária brasileira, podendo ter ação residual no leite e derivados lácteos, por exemplo: os queijos tipo gorgonzola e tipo brie, que são, respectivamente, produzidos a partir da inoculação dos fungos P. roqueforti e P. camemberti. Esses queijos podem sofrer interferências de contaminações por microrganismos provenientes do ambiente, por contaminação cruzada, entre outros. Nesse sentido, esse trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a ação das drogas Glifosato, Ivermectina e Fluazuron sobre o crescimento e atividade enzimática dos fungos Penicillium roqueforti e Penicillium camemberti utilizados na fabricação dos respectivos queijos, bem como apresentar uma avaliação referente às contaminações micológicas de queijos gorgonzola, comercializados no Sul de Minas Gerais. Como metodologia de pesquisa, foi aplicado o método de difusão em disco, onde concentrações pré-estabelecidas das drogas foram testadas e determinada a Concentração Inibitória Mínima (MIC). Para avaliação da atividade enzimática, as drogas foram diluídas nos meios enzimáticos de proteólise e lipólise. Em seguida os fungos foram cultivados para avaliação da presença da ação enzimática. Os resultados obtidos mostraram que a Ivermectina não promoveu efeito inibitório sobre os fungos, porém o Glifosato e o Fluazuron apresentaram os halos de inibição em ambos os fungos. Foi possível verificar também, que as drogas fluazuron e glifosato possuem efeito inibitório sobre os fungos, mostrando que a qualidade dos queijos finos pode ser comprometida. No teste enzimático observou-se que no meio proteolítico da droga glifosato e fluazuron sobre o fungo P. roqueforti não ocorreu formação de halo, indicando que essas drogas geram inibição da ação proteolítica do fungo, podendo influenciar na qualidade do produto final.

Drugs such as glyphosate, ivermectin and fluazuron, which are widely used in Brazilian agriculture, may cause residual action in milk and dairy products, such as gorgonzola and camembert type cheeses, which are respectively produced from Inoculation of fungi P. roqueforti and P. camemberti. These cheeses can suffer interference from contamination by microorganisms from the environment, cross contamination and others. In this sense, this work was carried out with the objective of evaluating the action of the drugs Glyphosate, Ivermectin and Fluazuron on the growth and enzymatic activity of the fungi Penicillium roqueforti and Penicillium camemberti used in the manufacture of the respective cheeses, as well as to present an evaluation concerning mycological contaminations Of gorgonzola cheeses, marketed in the south of Minas Gerais. As a research methodology, the disc diffusion method was applied, where pre-established drug concentrations were tested and Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined. To evaluate the enzymatic activity, the drug concentrations were diluted in the enzymatic means of proteolysis and lipolysis. The fungi were then spiked in the media and incubated in BOD at 25 ° C for five days, and then one was evaluated for the presence of the enzymatic action. The results showed that Ivermectin did not promote an inhibitory effect on fungi, but Glyphosate and Fluazuron showed inhibition halos in both fungi. It was also possible to verify that the fluazuron and glyphosate drugs have an inhibitory effect on the fungi, showing that the quality of the fine cheeses can be compromised. In the enzymatic test it was observed that in the proteolytic environment of the drug glyphosate and fluazuron on the fungus P. roqueforti there was no halo formation, indicating that these drugs generate inhibition of the proteolytic action of the fungus, leading to a final product of poor quality.

Leite de Cabra: Diagnóstico de qualidade na mesorregião da zona da mata mineira e estudos das alterações do leite armazenado por sete dias em condições laboratorias.

O leite de cabra vem se popularizando no Brasil. O consumo de leite fluido e de queijos finos cresce dentro da população alérgica ao leite de vaca, ou que se interessa pelo seu sabor peculiar. Este aumento do consumo vem associado com a publicação de legislações que regulamentam e estimulam a produção do leite de cabra. Na esfera nacional a Instrução Normativa 37 (2000) determina o Regulamento Técnico de Identidade e Qualidade do leite de cabra, e na esfera estadual a lei 19.583 dispõe sobre a manipulação e o beneficiamento artesanal do leite de cabra em Minas Gerais. Tendo em vista o aumento da produção e do consumo de leite caprino é imprescindível que a comunidade tenha conhecimento acerca da qualidade do leite de cabra produzido. Em Minas Gerais a região da zona da mata destaca-se como produtora de leite de cabra, porém, em alguns casos esta produção é a atividade secundária dos produtores que tradicionalmente plantam café. Esta região do estado também é influenciada por uma indústria de beneficiamento de leite de cabra que coleta leite cru semanalmente, fazendo com que o leite fique sob refrigeração por sete dias sem tratamento térmico. Desta forma foram delineados dois experimentos. O primeiro objetivou diagnosticar a qualidade do leite de cabra na mesorregião da zona da mata mineira, procedendo análises físico-químicas e microbiológicas. Os leites estudados apresentaram elevados índices de proteólise e lipólise, bem como contagem de micro-organismos psicrotróficos totais, proteolíticos, lipolíticos e mesófilos aeróbios elevados. Em 92,8% das propriedades estudadas a contagem bacteriana total foi superior ao limite aceito pela legislação. Conclui-se que a qualidade do leite cru de cabra comercializado na zona da mata mineira é baixa e os dados indicam que os derivados desse leite podem apresentar qualidade e sabor duvidosos. O segundo experimento estudou a degradação do leite cru de cabra refrigerado a 4°C em laboratório. Foram avaliadas sete amostras nos dias 0, 2, 4, 6 e 7 de refrigeração. Análises físico-químicas, microbiológicas e de rendimento de queijo em escala reduzida foram feitas. Nenhum parâmetro físico-químico apresentou diferença (p>0,05) entre os tratamentos. Quanto aos micro-organismos, mesófilos aeróbios, psicrotróficos totais e lipolíticos não foi detectado efeito estatístico nos contrastes de interesse. A contagem de psicrotróficos proteolíticos no dia 0 foi diferente do dia 7 (p = 0,0005). O rendimento do queijo não apresentou diferença estatística, porém ao serem considerados valores econômicos a perda tornou-se importante

Goat's milk has become popular in Brazil. The consumption of fluid milk and fine cheese grows within the population allergic to cow's milk, or that is interested in the peculiar taste of goat's milk. This increase in consumption is associated with the publication of a legislation that regulates and stimulates the production of goat's milk. At national level, IN 37 (2000) determines the RTIQ of goat's milk, and at state level, Law 19.583 provides for the manipulation and artisanal processing of goat's milk. In order to increase the production and consumption of goat milk, it is essential that the community is aware of the quality of goat's milk produced. In Minas Gerais, the region of the zona da mata stands out as a producer of goat's milk, but in some cases this production is the secondary activity of the producers who traditionally grow coffee. This region of the state is also influenced by a goat milk processing industry that collects raw milk weekly, forcing the producerss to keep the milk under refrigeration for seven days without heat treatment. In this way two experiments were delineated. The first one was to diagnose the quality of goat's milk in the mesoregion of zona da mata, carrying out physical-chemical and microbiological analyzes. The studied milk presented high levels of proteolysis and lipolysis, as well as counting of total psychrotrophic microorganisms, proteolytic, lipolytic and elevated aerobic mesophiles. In 92.8% of the studied properties the total bacterial count is higher than the limit accepted by the law. It is concluded that the quality of raw and goat milk marketed in the zona da mata area is low and the data indicate that the milk derived from this milk may present dubious quality and flavor. The second experiment studied the degradation of raw goat's milk refrigerated at 4 ° C in the laboratory. Seven samples with 0, 2, 4, 6 and 7 days of refrigeration were evaluated. Physical-chemical, microbiological and cheese yield analyzes were performed. No physical-chemical analysis showed statistical effect among the treatments. As for microorganisms, aerobic mesophiles, total psychrotrophic and lipolytic, no statistical effect was detected in the contrasts of interest. The proteolytic psychrotrophic count at day 0 is different from day 7 (p = 0.0005). The yield of the cheese did not show statistical difference, but when considering economic values the loss becomes significant.

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DA MICROBIOTA ESPORULADA E FÚNGICA ASSOCIADA À DETERIORAÇÃO DO LEITE

A produção de leite vem aumentado no estado do Paraná e no Brasil, porém, a sua qualidade ainda é um problema. A baixa qualidade do leite cru refrigerado brasileiro faz com que a vida útil do leite pasteurizado não alcance seis dias. O aumento da vida útil do leite pasteurizado está diretamente relacionado à redução das contagens de micro-organismos deteriorantes proteolíticos e lipolíticos, sobretudo os termodúricos e esporulados no leite cru, que constituirão a microbiota remanescente no leite pasteurizado. Não há dados no Brasil sobre a composição da microbiota esporulada e fúngica termodúrica presente no leite, dificultando o seu controle. O presente trabalho teve por objetivo identificar os micro-organismos formadores de esporos e a microbiota fúngica do leite cru refrigerado com atividade proteolítica e/ou lipolítica por técnicas moleculares. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado produzido na bacia leiteira de Castro, região central do estado do Paraná, nas quais foram realizadas a contagem de esporos aeróbios, verificação da atividade proteolítica e lipolítica dos isolados, amplificação parcial do gene 16S rRNA, sequenciamento e identificação por similaridade usando a ferramenta BLAST para comparação com as sequencias depositadas no GenBank do National Center for Biotechnology Information (NCBI). Para o isolamento dos fungos, as amostras de leite cru foram submetidas à pasteurização laboratorial, semeadas e incubadas em temperaturas apropriadas para a multiplicação de bolores e leveduras termodúricos mesófilos e psicrotróficos. Também foi avaliado o potencial proteolítico dos isolados obtidos, que foram identificados por microscopia óptica e confirmados por sequenciamento da região ITS do DNA. As contagens de esporos aeróbios variaram de 1 a 3,7 log UFC.mL-1, com média de 1,75 (±0,59) log UFC.mL-1. Foram obtidos 137 isolados puros de bactérias a partir da germinação dos esporos, dos quais 40 (29,2%) apresentaram atividade deteriorante do leite. Dessas, 31 (77,5%) foram proteolíticas e lipolíticas, 7 (17,5%) foram exclusivamente lipolíticas e 2 (5%) foram apenas proteolíticas. As 40 cepas de esporos aeróbios proteolíticos e/ou lipolíticos submetidas ao sequenciamento do 16S rRNA, foram identificadas como: Bacillus licheniformis (55%), Bacillus sp. (27,5%), Paenibacillus sp. (7,5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2,5%) e Brevibacillus sp. (2,5%). Estudos anteriores sobre a composição da microbiota do leite cru refrigerado brasileiro não relatam a presença de micro-organismos do gênero Paenibacillus, apesar de ser um grupo de micro-organismos frequentemente descrito nos trabalhos desenvolvidos em outros países. Dos 22 isolados de B. licheniformis, 21 (95,5%) apresentaram atividade proteolítica e lipolítica e 1 (4,5%) foi apenas proteolítico. As duas cepas de B. pumilus foram proteolíticas e lipolíticas, enquanto a cepa de B. circulans foi apenas lipolítica. Em relação aos 11 isolados de Bacillus sp., oito (72,7%) foram proteolíticos e lipolíticos, um (9,1%) foi proteolítico e outros dois (18,2%) lipolíticos. Os três isolados de Paenibacillus sp. foram apenas lipolíticos, assim como a cepa de Brevibacillus sp. Com relação aos fungos, foram obtidos 11 isolados, um mesófilo e outros 10 psicrotróficos. Todos os isolados foram proteolíticos. O sequenciamento do DNA fúngico amplificado confirmou a identificação microscópica, sendo a cepa termodúrica mesófila identificada como espécies do complexo Fusarium chlamydosporum (9,09%), e os psicrotróficos como Cladosporium cladosporoides (54,54%), Curvularia geniculatus (9,09%) e os outros 3 isolados foram identificados como Geotrichum candidum (27,27%). A presença de fungos termodúricos mesófilos e psicrotróficos proteolíticos no leite cru pode resultar em redução da vida útil do leite pasteurizado, bem como em risco à saúde pela presença de cepas patogências e produtoras de micotoxinas. A redução dos micro-organismos termodúricos, proteolíticos e/ou lipolíticos no leite cru, diminui a quantidade de micro-organismos e enzimas deteriorantes termoestáveis no leite pasteurizado, aumentando sua vida útil.

Milk production has increased in the Paraná state and Brazil, but its quality is still a important problem. The low quality of brazilian refrigerated raw milk makes the shef-life of pasteurized milk not reach 6 days. Increased shelf-life of pasteurized milk is directly related to the reduction of microorganisms counts proteolytic and lipolytic rough, especially thermoduric and spores in raw milk, which constitute the remaining microbiota in pasteurized milk. There is no data in Brazil about the composition of the spore-forming and thermoduric fungal microbiota in milk, hindering the control. The aim this study was to identify the microorganisms spore-forming and mycoflora of refrigerated raw milk with proteolytic and/or lipolytic activity by molecular biological techniques. Were evaluated 20 samples of refrigerated raw milk produced in the dairy region Castro, Paraná, Brazil, in which were performed aerobic spore count, verification of proteolytic and lipolytic activity of the isolated, partial amplification of the 16S rRNA gene, identification by sequencing data and comparison with the sequences deposited in GenBank of National Center for Biotechnology Information (NCBI). For the isolation of thermoduric fungi, the raw milk samples were subjected to laboratory pasteurization, plated and incubated at appropriate temperatures for multiplication of molds and yeasts mesophilic and psychrotrophic. We also assessed the proteolytic potential of these isolates that were identified by optical microscopy and confirmed by sequencing data the ITS region of DNA. Aerobic spore counts ranged from 1 to 3.7 log CFU.mL-1, with a mean of 1.75 (± 0.59) log CFU.mL-1. One hundred thirty-seven bacterial isolates were obtained from germination of spores, of which 40 (29.2%) showed deteriorating activity of milk. Of these, 31 (77.5%) were proteolytic and lipolytic, 7 (17.5%) were exclusively lipolytic and 2 (5%) were only proteolytic. The 40 strains of aerobic spore-forming proteolytic and/or lipolytic sequecing to 16S rRNA were identified as Bacillus licheniformis (55%), Bacillus sp. (27.5%), Paenibacillus sp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) and Brevibacillus sp. (2.5%). Previous studies about the microbiota of brazilian refrigerated raw milk not report the presence of Paenibacillus genus, although a group of microrganisms frequently described the work undertaken in other countries. Of the 22 isolates of B. licheniformis, 21 (95.5%) showed proteolytic and lipolytic and 1 (4.5%) was only proteolytic. The 2 strains of B. pumilus are proteolytic and lipolytic while the strain of B. circulans was only lipolytic. Of the 11 isolates of Bacillus sp., 8 (72.7%) were proteolytic and lipolytic, 1 (9.1%) was proteolitic and other 2 (18.2%) were lipolytic only. The 3 isolates of Paenibacillus sp. were just lipolytic as well as the strain of Brevibacillus sp.. For fungi were obtained 11 strains, 1 mesophilic and 10 psychrotrophic. All isolates were proteolytic. The sequencing data of the amplified DNA confirmed fungal microscopic identification, and the strain identified as thermoduric mesophilic species complex Fusarium chlamydosporum (9.09%) and the psychrotrophic as Cladosporium cladosporoides (54.54%), Curvularia geniculatus (9.09%) and the other 3 isolates were identified as Geotrichum candidum (27.27%). The presence of mesophilic and psychrotrophic thermoduric proteolytic fungi in raw milk may result in shortening the shelf-life of pasteurized milk, as well as health risk by the presence of patogenic strains and mycotoxin production. The reduction of microorganisms thermoduric, proteolytic and/or lipolytic on raw milk decreases the amount of spoilage microorganisms and thermostable enzymes in pasteurized milk, increasing its shelf-life.