Ex vivo and in vitro poultry intestinal models to evaluate antimycotoxins additives / Uso de modelos ex vivo e in vitro de intestino de aves para avaliar aditivos antimicotoxinas

In vitro tests are performed to evaluate the efficacy of antimycotoxins additives (AMAs); nevertheless, such assays show a low correlation with in vivo trials, which are also required to determine AMAs' efficacy. In search of an alternative method, the current study investigated the use of an ex vivo technique. Six AMAs (AMA1 to AMA6) had their ability to reduce intestinal absorption of aflatoxin B1 (AFB1) evaluated. Jejunal explants were obtained from broilers and subjected to two treatments per AMA in Ussing chambers: T1 (control) - 2.8 mg/L AFB1, and T2 - 2.8 mg/L AFB1 + 0.5% AMA. AMAs were also tested in vitro to assess adsorption of AFB1 in artificial intestinal fluid. In the ex vivo studies, AMA1 to AMA6 decreased intestinal absorption of AFB1 by 67.11%, 73.82%, 80.70%, 85.86%, 86.28% and 82.32%, respectively. As for the in vitro results, AMA1 to AMA6 presented an adsorption of 99.72%, 99.37%, 99.67%, 99.53%, 99.04% and 99.15%, respectively. The evaluated ex vivo model proved useful in the assessment of AMAs. No correlation was reported between ex vivo and in vitro findings. Further studies are needed to elucidate the correlation between ex vivo and in vivo results seeking to reduce animal testing.

Testes in vitro são realizados para avaliar a eficácia de aditivos antimicotoxinas (AAMs); entretanto, tais experimentos apresentam uma baixa correlação com ensaios in vivo, que também são exigidos para determinar a eficácia de AAMs. Em busca de um método alternativo, o presente estudo investigou o uso de uma técnica ex vivo. A capacidade de seis AAMs (AAM1 a AAM6) de reduzir a absorção intestinal de aflatoxina B1 (AFB1) foi avaliada. Explantes jejunais foram coletados de frangos de corte e submetidos a dois tratamentos por AAM em câmaras de Ussing: T1 (controle) - 2,8 mg/L AFB1, e T2 - 2.8 mg/L AFB1 + 0,5% AAM. Os AAMs também foram testados in vitro para verificar a adsorção de AFB1 em fluido intestinal artificial. Nos ensaios ex vivo, AAM1 ao AAM6 diminuíram a absorção intestinal de AFB1 em 67,11%, 73,82%, 80,70%, 85,86%, 86,28% e 82,32%, respectivamente. Quanto aos achados in vitro, AAM1 ao AAM6 apresentaram adsorção de 99,72%, 99,37%, 99,67%, 99,53%, 99,04% e 99,15%, respectivamente. O modelo ex vivo avaliado mostrou-se eficiente na avaliação de AAMs. Não houve correlação entre os resultados ex vivo e in vitro. Estudos adicionais são necessários para definir a correlação entre achados ex vivo e in vivo na tentativa de reduzir os testes em animais.

Biopanning the mimotopes of aflatoxin B1 and their immunogenicity / Panning de mimotopo aflatoxina B1 e sua imunogenicidade

Utilizando um anticorpo monoclonal contra a aflatoxina B1 (AFB1) como ligante, foi identificado um mimotopo específico de aflatoxina B1 após se realizarem quatro ciclos de seleção biológica de 7-peptídeos aleatórios em biblioteca de fago exibida. O mimotopo é denominado P10, e sua sequência de aminoácidos é YRRHEKD. O soro imunológico de ratos Balb/c imunizados com P10 foi especificamente ligado à aflatoxina B1-albumina, indicando que o anticorpo era específico ao AFB1. Esses resultados sugerem que é possível desenvolver a vacina baseada em mimotopo associado à toxina.(AU)

Biopanning the mimotopes of aflatoxin B1 and their immunogenicity / Panning de mimotopo aflatoxina B1 e sua imunogenicidade

Utilizando um anticorpo monoclonal contra a aflatoxina B1 (AFB1) como ligante, foi identificado um mimotopo específico de aflatoxina B1 após se realizarem quatro ciclos de seleção biológica de 7-peptídeos aleatórios em biblioteca de fago exibida. O mimotopo é denominado P10, e sua sequência de aminoácidos é YRRHEKD. O soro imunológico de ratos Balb/c imunizados com P10 foi especificamente ligado à aflatoxina B1-albumina, indicando que o anticorpo era específico ao AFB1. Esses resultados sugerem que é possível desenvolver a vacina baseada em mimotopo associado à toxina.(AU)

Mycotoxins in broiler production / Micotoxinas na produção de frangos de corte

The occurrence of mycotoxins has become a problem to be discussed, due to its harmfulness to humans and animals health, and may be an obstacle to the poultry economy. Mycotoxins are toxic metabolites produced by certain species of fungi and may contaminate food. Aflatoxins are mainly produced by Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, and B1, B2, G1 and G2 are its best known types. Fumonisin, with its B1, B2 or B3 types, are produced by Fusarium, while ochratoxin A is produced by Penicillium and Aspergillus. The main trichothecenes mycotoxins are T-2 toxin, deoxynivalenol and diacetoxyscirpenol. Zearalenone, produced by different species of Fusarium fungi affects chickens only when they are exposed to extremely high levels of contamination. Generally, immunosuppression, hepatotoxicity and nephrotoxicity as a decrease in performance and production gains are the most observed effects. There are several laboratory methods that can be used for the determination of mycotoxins. In order to control the contamination, it is necessary to adopt proper farming practices which prevent fungi growth. Once grains and feed are contaminated, biological, physical and/or chemical decontamination methods may be employed, although the physical process with adsorbents mixed to the feed is more widely used. Due to the importance of mycotoxins to poultry production, it is necessary to adopt measures to prevent contamination, and also develop a control and an anti-fungal growth and toxin production program by reviewing the critical points favorable to the emergence of toxin-producing fungi.

A ocorrência de micotoxinas tornou-se um problema a ser discutido, pois representa riscos à saúde dos animais e humanos, podendo constituir um obstáculo à economia avícola. Micotoxinas são metabólitos tóxicos produzidos por algumas espécies de fungos e podem contaminar os alimentos. Aflatoxinas são majoritariamente produzidas por Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, sendo B1, B2, G1 e G2 os tipos mais conhecidos. Fumonisinas são do tipo B1, B2 e B3, e produzidas pelo gênero Fusarium, enquanto a ocratoxina A é produzida por fungos da espécie Penicillium e Aspergillus. As principais micotoxinas dos tricotecenos são toxina T-2, deoxynivalenol e diacetoxyscirpenol. A zearalenona, produzida por diferentes espécies de fungos do gênero Fusarium, afeta os frangos apenas quando estes são expostos a níveis extremamente altos de contaminação. De modo geral, são observados efeitos imunossupressores, hepatotóxicos e nefrotóxicos, com queda no desempenho e nos ganhos de produção. Vários são os métodos laboratoriais que podem ser utilizados para a determinação de micotoxinas. Para o controle da contaminação, é necessário adoção de práticas agrícolas correta, com vistas à prevenção do crescimento de fungos. Após a contaminação de grãos e rações, métodos de descontaminação, biológicos, físicos e/ou químicos podem ser empregados, embora o processo físico com adsorventes misturados às rações seja o mais utilizado. Pela importância que as micotoxinas representam à produção de frangos, é necessário adotar medidas que previnam a contaminação e desenvolver programas de controle e combate ao desenvolvimento fúngico e produção de toxinas, revendo os pontos críticos propícios ao aparecimento dos fungos geradores das toxinas.

Mycotoxins in broiler production / Micotoxinas na produção de frangos de corte

The occurrence of mycotoxins has become a problem to be discussed, due to its harmfulness to humans and animals health, and may be an obstacle to the poultry economy. Mycotoxins are toxic metabolites produced by certain species of fungi and may contaminate food. Aflatoxins are mainly produced by Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, and B1, B2, G1 and G2 are its best known types. Fumonisin, with its B1, B2 or B3 types, are produced by Fusarium, while ochratoxin A is produced by Penicillium and Aspergillus. The main trichothecenes mycotoxins are T-2 toxin, deoxynivalenol and diacetoxyscirpenol. Zearalenone, produced by different species of Fusarium fungi affects chickens only when they are exposed to extremely high levels of contamination. Generally, immunosuppression, hepatotoxicity and nephrotoxicity as a decrease in performance and production gains are the most observed effects. There are several laboratory methods that can be used for the determination of mycotoxins. In order to control the contamination, it is necessary to adopt proper farming practices which prevent fungi growth. Once grains and feed are contaminated, biological, physical and/or chemical decontamination methods may be employed, although the physical process with adsorbents mixed to the feed is more widely used. Due to the importance of mycotoxins to poultry production, it is necessary to adopt measures to prevent contamination, and also develop a control and an anti-fungal growth and toxin production program by reviewing the critical points favorable to the emergence of toxin-producing fungi.(AU)

A ocorrência de micotoxinas tornou-se um problema a ser discutido, pois representa riscos à saúde dos animais e humanos, podendo constituir um obstáculo à economia avícola. Micotoxinas são metabólitos tóxicos produzidos por algumas espécies de fungos e podem contaminar os alimentos. Aflatoxinas são majoritariamente produzidas por Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, sendo B1, B2, G1 e G2 os tipos mais conhecidos. Fumonisinas são do tipo B1, B2 e B3, e produzidas pelo gênero Fusarium, enquanto a ocratoxina A é produzida por fungos da espécie Penicillium e Aspergillus. As principais micotoxinas dos tricotecenos são toxina T-2, deoxynivalenol e diacetoxyscirpenol. A zearalenona, produzida por diferentes espécies de fungos do gênero Fusarium, afeta os frangos apenas quando estes são expostos a níveis extremamente altos de contaminação. De modo geral, são observados efeitos imunossupressores, hepatotóxicos e nefrotóxicos, com queda no desempenho e nos ganhos de produção. Vários são os métodos laboratoriais que podem ser utilizados para a determinação de micotoxinas. Para o controle da contaminação, é necessário adoção de práticas agrícolas correta, com vistas à prevenção do crescimento de fungos. Após a contaminação de grãos e rações, métodos de descontaminação, biológicos, físicos e/ou químicos podem ser empregados, embora o processo físico com adsorventes misturados às rações seja o mais utilizado. Pela importância que as micotoxinas representam à produção de frangos, é necessário adotar medidas que previnam a contaminação e desenvolver programas de controle e combate ao desenvolvimento fúngico e produção de toxinas, revendo os pontos críticos propícios ao aparecimento dos fungos geradores das toxinas.(AU)

EFEITO DA BENTONITA NA SAÚDE E PRODUÇÃO LEITEIRA DE VACAS EM LACTAÇÃO SUBMETIDAS À DIETA NATURALMENTE CONTAMINADA POR MICOTOXINAS

Micotoxinas frequentemente contaminam alimentos de bovinos, podendo causar quadros de lesão hepática, imunodepressão e redução da produção, e em aves e suínos, os adsorventes como bentonita atenuam tais perdas, porém para bovinos há poucos estudos sobre seu uso especialmente quando a intoxicação ocorre por dietas naturalmente contaminadas. Assim, foram escolhidas 18 vacas leiteiras, multíparas no meio do estágio da lactação, consumindo dieta contendo na ração total fumonisina B1 (683,7 g/Kg) e B2 (306,6 g/Kg), zearalenona (503,9 g/Kg). Os animais foram divididos em dois grupos: tratamento (GT, n=9) e controle (GC, n=9), e submetidos às avaliações hematológicas, metabolismo oxidativo de neutrófilos pela técnica do nitroazul de tetrazolium (NBT) e análise físico química do leite, a cada semana, durante dois meses, totalizando oito análises. Foi também realizada a pesquisa para aflatoxina M1 no leite em três momentos. Objetivou-se avaliar se a administração oral diária do adsorvente de micotoxinas, argila bentonita a base de aluminossilicato durante 56 dias atenuaria as alterações causadas pelas micotoxinas. Observou-se que o uso do adsorvente reduziu a excreção láctea de aflatoxina M1 (AFM1), aumento de proteína (p = 0,03) e albumina séricas (p= 0,0001) e aumento do metabolismo oxidativo leucocitário a partir do dia 24 (p = 0,05), e elevou a produção leiteira a partir do 16º dia (p= 0,08). Não foi observado melhora nos índices físico-químicos do leite. Conclui-se que o uso do adsorvente a base de aluminossilicato foi capaz de atenuar os efeitos das micotoxinas na função de leucócitos e de elevar a produção leiteira

Mycotoxins often contaminate cattle feed, which can cause liver damage, immunosuppression and reduced production, and in birds and pigs, adsorbents such as bentonite mitigate such losses, however for cattle there are few studies on their use, especially when intoxication occurs due to naturally contaminated diets. So, 18 dairy cows were chosen, they were multiparous in the middle of the lactation stage, consuming a diet containing fumonisin B1 (683,7 g/Kg) e B2 (306,6 g/Kg) and zearalenona (503,9 g/Kg) on total animal feed. The animals were divided into treatment (TG, n = 9) and control (CG, n = 9) groups, and subjected to hematological assessments, oxidative neutrophil metabolism by the tetrazolium nitroazul (NBT) technique and physical chemical analysis of milk, every week for two months, totaling eight analyzes. A search for aflatoxin M1 in milk was also carried out in three moments. This study aimed to assess whether the daily oral administration of mycotoxin adsorbent, bentonite clay based on aluminosilicate for 56 days would attenuate these changes It was observed that the use of the adsorbent promoted a reduction in the milk excretion of aflatoxin M1 (AFM1), an increase in serum protein (p = 0.03) and albumin (p = 0.0001), an increase in leukocyte oxidative metabolism from the day 24 (p = 0.05), and increased milk production from the 16th day of treatment (p = 0.08). There was no improvement in the physical-chemical indexes of the animals' milk. It is concluded that the use of aluminosilicate-based adsorbent was able to attenuate the effects of mycotoxins on the function of leukocytes and to increase milk production.

Adsorvente biológico de micotoxinas em dietas experimentalmente contaminadas por aflatoxina B1 para vacas leiteiras em lactação

Aflatoxinas B1(AFB1) são metabólitos secundários prejudiciais produzido principalmente pelos fungos Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, são imunossupressores e carcinogênico. As dietas contaminadas com AFB1 são fornecidas para animais lactantes, a toxina é metabolizada principalmente no fígado, irão excretar aflatoxina M1, transportado para a glândula mamária via sangue e transferido para o leite. Por esse motivo, objetivou-se avaliar o uso de adsorvente biológico sobre desempenho produtivo, composição do leite, excreção de aflatoxina M1 no leite, função hepática, renal e viabilidade econômica do adsorvente em vacas leiteiras recebendo dietas experimentalmente contaminadas com aflatoxina B1. Foram utilizadas 05 vacas primíparas da raça Jersey, com produção de leite= 15.0 ± 4,25 kg/dia, peso médio das vacas = 410 ± 36.50 kg. O delineamento em quadrado latino, sendo 5 tratamentos e 5 períodos. Os tratamentos foram: 1- CONTROLE (sem micotoxinas e sem adsorvente); 2- MICOTOXINA (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado e sem adsorvente); 3- ADSORVENTE (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 2 kg de adsorvente ADS/tonelada de concentrado) 4- ANT1 (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 1 kg de ANT. /tonelada de concentrado), 5- ANT3 (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 3 kg de ANT. /tonelada de concentrado). Foram realizadas analises das amostras de alimentos da dieta, para presença de micotoxinas, além da produção e composição do leite, presença e excreção de AFB1 nas amostras de leite cru, analise dos parâmetros sanguíneos. Além de uma análise de viabilidade econômica. A inclusão de adsorvente em dietas contaminadas com AFB1 melhorou a produção de leite, significativamente maior no grupo ANT3 (21,80 kg/d) do que nos grupos MIC (16,38 kg/d). O tratamento foi eficaz na absorção AFB1 no trato gastrointestinal de vacas, reduzindo assim a excreção de AFM1 no leite. Os resultados sugerem um efeito positivo do uso ANTIMICOX MR na imunidade animal.

Aflatoxin B1(AFB1) are harmful secondary metabolites produced mainly by the fungi Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, are immunosuppressive and carcinogenic. Diets contaminated with AFB1 are fed to lactating animals, the toxin is metabolized mainly in the liver, will excrete aflatoxin M1, transported to the mammary gland via blood and transferred to the milk. For this reason, we aimed to evaluate the use of biological adsorbent on productive performance, milk composition, excretion of aflatoxin M1 in milk, liver and kidney function and economic feasibility of the adsorbent in dairy cows receiving diets experimentally contaminated with aflatoxin B1. Five primiparous Jersey cows were used, with milk production= 15.0 ± 4.25 kg/day, average cow weight = 410 ± 36.50 kg. The design was a latin square, with 5 treatments and 5 periods. The treatments were: 1- CONTROL (no mycotoxins and no adsorbent); 2- MYCOTOXIN (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate and no adsorbent); 3-ADSORBENT (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 2 kg of adsorbent ADS/ton of concentrate) 4- ANT1 (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 1 kg ANT. /5- ANT3 (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 3 kg ANT/ton concentrate). Analyses of the feed samples of the diet were performed for the presence of mycotoxins, in addition to milk production and composition, presence and excretion of AFB1 in the raw milk samples, analysis of blood parameters. In addition to an economic feasibility analysis. The inclusion of adsorbent in diets contaminated with AFB1 improved milk production, significantly higher in the ANT3 group (21.80 kg/d) than in the MIC groups (16.38 kg/d). The treatment was effective on AFB1 absorption in the gastrointestinal tract of cows, thus reducing AFM1 excretion in milk. The results suggest a positive effect of ANTIMICOX MR use on animal immunity.

Avaliação de jejuno e fígado de frangos de corte suplementados com composto prebiótico à base de mananoligossacarídeos, frutoligossacarídeos e glucoligossacarídeos

Este trabalho teve por objetivo avaliar o jejuno e o fígado de frangos de corte suplementados com composto prebiótico a base de mananoligossacarídeos, frutoligossacarídeos e glucoligossacarídeos. Foram utilizadas 240 aves fêmeas distribuídas em três tratamentos experimentais com três repetições de quatro aves cada, no período de um a 42 dias de idade. Os tratamentos experimentais foram: Tratamento 1 (T1) 500 g de composto prebiótico por tonelada de ração; Tratamento 2 (T2) 16,5 ppm de Flavomicina por tonelada de ração; Tratamento 3 (T3) As aves receberam a ração sem nenhum tratamento. No Tratamento 1 (T1) o composto prebiótico utilizado como aditivo alimentar, tem como base mananoligossacarídeos (MOS), os glucoligossacarídeos (GOS) e os frutoligossacarídeos (FOS). Aos 7, 14, 28 e 42 dias de tratamento as aves foram pesadas e em seguida foram coletadas amostras de fígado e jejuno que foram fixadas em formol neutro tamponado e posteriormente processadas para emblocamento em parafina. As alterações histopatológicas do fígado foram analisadas por distribuição de frequência estatística, utilizando o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, adotando-se nível de significância de 5% e utilizando GraphPad Prism 7,0. Nas amostras de jejuno foram realizadas10 medidas de alturas, médias de largura e distâncias entre as vilosidades e 10 medidas de diâmetros de criptas que posteriormente foram analisadas pelo teste de normalidade ANOVA e pelo teste t-student com significância de 5%. Após análise dos resultados obtivemos resultados mostrando que aos 7 e 14 dias todos os tratamentos apresentavam lesões hepáticas, porém o tratamento 1 evoluiu com melhoras significativas mais rapidamente, assim como também apresentou melhor peso das aves nas avaliações semanais e maior área de absorção no jejuno apesar de não ter diferença estatística. É possível concluir que o composto prebiótico avaliado atuou de forma efetiva na defesa contra a aflatoxina, contribuindo com a redução das lesões hepáticas e dessa forma promovendo um melhor peso corporal aos 7 e 14 dias, e o T1 apresentou maior área de absorção em relação aos demais tratamentos, atuando positivamente proporcionando maior área de absorção, menor frequência de lesões hepáticas e consequentemente maior peso corporal.

This work aimed to evaluate the jejunum and the liver of broilers supplemented with prebiotic compound based on mananoligosaccharides, fructoligosaccharides and glucoligosaccharides. 240 birds were used, distributed in three experimental treatments with three replications of four birds each, from one to 42 days of age. The experimental treatments were: Treatment 1 (T1) 500 g of prebiotic compound per ton of feed; Treatment 2 (T2) 16.5 ppm of Flavomycin per ton of feed; Treatment 3 (T3) The birds received the feed without any treatment. In Treatment 1 (T1), the prebiotic compound used as a food additive is based on mannan oligosaccharides (MOS), glucoligosaccharides (GOS) and fructoligosaccharides (FOS). At 7, 14, 28 and 42 days of treatment the birds were weighed and then collected from the liver and jejunum, which were fixed in a neutral buffer and then processed according to histological routine. Histopathological changes in the liver were analyzed by statistical distribution, using the Kruskal-Wallis non-parametric test, adopting a significance level of 5% and using GraphPad Prism 7.0. In the jejunum groups, 10 measurements were taken (heights, width averages, and distances between villi) and 10 crypt diameter measurements, which were subsequently analyzed using the ANOVA normality test and the t-student test, with a 5% significance level. ,. After analyzing the results, we obtained results showing that at 7 and 14 days all treatments had liver damage, however treatment 1 evolved with relevant improvements more quickly, as well as showing better weight of birds in weekly evaluations and greater area of absorption in the jejunum despite of having no statistical difference. It is possible to obtain that the evaluated prebiotic compound acted effectively in the defense against aflatoxin, contributing to the reduction of liver lesions and thus promoting a better body weight and at 7 and 14 days, and the T1 greater air absorption in relation to the other treatments, acting positively in increasing the absorption area.

Adição de produtos naturais na forma isolada (silimarina) e combinada (blend fitogênico) na dieta de frangos de corte contaminada por micotoxinas: Impactos sobre desempenho, saúde das aves e qualidade de carne

As micotoxinas são responsáveis por contaminar diversas culturas a campo e no seu armazenamento, apresentando risco a saúde do consumidor, seja ele animal ou humano, elas também são responsáveis por ocasionar percas econômicas incalculáveis em nível mundial. As aflatoxinas e fumonisinas são micotoxinas que normalmente acometem problemas na produção dos animais domésticos. Dentre os problemas, destacam-se as lesões hepáticas e intestinais, imunodepressão e redução nos índices zootécnicos. Portanto, para manter a alta produção avícola do Brasil conhecer aditivos com a capacidade de mitigar os efeitos negativos das micotoxinas é de grande vantagem ao setor. Os compostos fitogênicos são compostos a base de extratos herbais, que possuem uma vasta gama de propriedades medicinais, como ação antioxidante, antimicrobiana e hepatoprotetora, os quais podem ser utilizados de forma isolada ou combinada em forma de blend. Os ácidos orgânicos, taninos, curcumina, óleos essenciais e a silimarina são compostos fitogênicos que se destacam por suas propriedades benéficas quando adicionados na dieta de frangos de corte. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de produtos naturais de forma isolada (silimarina) ou combinada (ácidos orgânicos, taninos, curcumina, óleos essenciais microencapsulados) na dieta de frangos de corte podem reduzir os impactos negativos ocasionados pelas micotoxinas. Para o estudo foram realizados dois experimentos distintos. Experimento I: Foram utilizados 160 pintainhos de um dia, machos, divididos em 4 tratamentos e 4 repetições, com 10 aves/repetição, sendo eles o tratamento controle, T250, T500 e T100 representando doses de teste de 250, 500 e 1000 mg/kg de ração do blend fitogênico a base de ácidos orgânicos, taninos, curcumina, óleos essenciais microencapsulados, o experimento teve duração de 34 dias. No 22 dia de experimento, as aves foram desafiadas com 500 ppb de aflatoxinas na dieta. Na fase inicial (até os 21 dias), não houve diferença entre os grupos em termos de ganho de peso, consumo de ração ou conversão alimentar. Após a adição da micotoxina na ração, foi observado que doses de 250 a 500 mg/kg minimizaram os efeitos negativos no consumo de ração e na conversão alimentar ocasionados pelas aflatoxinas. Nas aves que consumiram o blend fitogênico foram observados redução dos leucócitos totais devido à menor contagem de heterofilos, linfócitos e monócitos; redução de oxidantes e aumento dos antioxidantes séricos e da carne de peito; redução da contagem de bacteriana na cama; maiores concentrações de ácidos graxos saturados e menores concentrações de ácidos graxos insaturados na carne; maiores relações vilosidades/criptas intestinais. Experimento II: Para o estudo foram utilizados 240 pintinhos de 1 dia, machos, divididos em 4 tratamentos e 4 repetições, com 15 pintos por repetição, os tratamentos foram: ração sem aditivos (NoMyc-NoSil); ração suplementada com 100 mg/kg de silimarina (NoMyc-Sil); ração contaminada com aflatoxinas e fumonisinas (Myc-NoSil); ração contaminada com micotoxina e suplementada com silimarina (Myc-Sil). A contaminação de aflatoxinas foi de 0,05 ppm e de fumonisinas de 20 ppm. O consumo de ração contaminada com micotoxinas atrasou o ganho de peso e aumentou a conversão alimentar; no entanto, a adição de silimarina evitou esses efeitos adversos nos sistemas de produção dos frangos de corte. Os níveis de ALT foram maiores em frangos de corte Myc-NoSil do que em outros grupos. A ingestão de silimarina em aves saudáveis aumentou os níveis de globulina sérica e reduziu os níveis de albumina, ALT e AST. Os frangos do grupo NoMyc-Sil obtiveram maiores alturas de vilosidades e profundidades de cripta. A luminosidade e a perda de água pelo cozimento foram afetadas pela ingestão de micotoxinas, não ocorreram mudanças na carne das aves que foram suplementadas com silimarina. A soma dos ácidos graxos saturados e monoinsaturados na carne não se alterou entre os tratamentos, ao contrário da soma dos ácidos graxos poliinsaturados mais elevada na carne das aves que consumiram silimarina. Em conclusão a esta dissertação, a utilização dos compostos fitogênicos tanto em forma isolada ou combinada, são potenciais aditivos para utilização na cadeia avícola do Brasil como redutores dos impactos negativos ocasionados pelas micotoxinas, gerando efeitos positivos no desempenho zootécnico e na saúde das aves. A utilização da silimarina na forma isolada, impede o crescimento retardado e melhora a qualidade da carne das aves. A associação dos compostos fitogênicos (ácidos orgânicos + taninos + curcumina + óleos essenciais microencapsulados) potencializa as propriedades biológicas de cada composto, a associação tem alto potencial para melhorar o desempenho dos frangos de corte nos estágios iniciais e de crescimento.

Mycotoxins are responsible for contaminating various crops in the field and not their storage, which risks the health of the consumer, whether animal or human, they are also responsible for causing incalculable economic losses worldwide. Aflatoxins and fumonisins are mycotoxins that normally affect problems in the production of domestic animals. Among the problems, liver and intestinal injuries, immunosuppression and reduction in zootechnical indexes stand out. Therefore, to maintain high poultry production in Brazil, knowing additives with the ability to mitigate the negative effects of mycotoxins is of great advantage to the sector. Phytogenic compounds are compounds based on herbal extracts, which have a wide range of medicinal properties, such as antioxidant, antimicrobial and hepatoprotective action, which can be used alone or combined as a mixture. Organic acids, tannins, curcumin, essentials and silymarin are phytogenic compounds that stand out for their beneficial properties when made in the diet of broilers. The objective of the study was to evaluate whether the addition of natural products in isolation (silymarin) or combined (organic acids, tannins, curcumin, microencapsulated essential oils) in the diet of broilers can reduce the impacts caused by mycotoxins. Two experiments were carried out for the study. Experiment I: 160 male day-old chicks were used, divided into 4 treatments and 4 repetitions, with 10 birds/repetition, being the control treatment, T250, T500 and T100 representing test doses of 250, 500 and 1000 mg/kg of feed of the phytogenic blend based on acids, tannins, curcumin, microencapsulated essentials, the experiment lasted 34 days. On the 22nd day of the experiment, the birds were challenged with 500 ppb of aflatoxin in the diet. In the initial phase (up to 21 days), there was no difference between the groups in terms of weight gain, feed intake or feed conversion. After adding mycotoxin to the feed, it was observed that doses of 250 to 500 mg/kg minimized the negative effects on feed intake and feed conversion caused by aflatoxin. In birds that consumed the phytogenic blend, a reduction in total leukocytes was observed due to the lower count of lymphocyte and monocyte heterophils; reduced oxidants and increased serum antioxidants and breast meat; reduction of bacterial count in bed; higher certificates of saturated fatty acids and lower Preferences of unsaturated fatty acids in meat; greater villus/intestinal crypt relationships. Experiment II: For the study 240 male 1-day old chicks were used, divided into 4 treatments and 4 repetitions, with 15 chicks per repetition, the treatments were: feed without additives (NoMyc-NoSil); diet supplemented with 100 mg of silymarin per kg (NoMyc-Sil); ration contaminated with aflatoxin and fumonisin (Myc-NoSil); ration contaminated with mycotoxin and supplemented with silymarin (Myc-Sil). The aflatoxin contamination was 0.05 ppm and fumonisin was 20 ppm. The consumption of feed contaminated with mycotoxins delayed weight gain and increased feed conversion; however, the addition of silymarin prevented these adverse effects on chicken production systems. ALT levels were higher in Myc-NoSil broilers than in other groups. The intake of silymarin in birds increased the levels of serum globulin and reduced the levels of albumin, ALT and AST. The chickens of the NoMyc-Sil group had higher villus heights and crypt depths. The luminosity and the loss of water by cooking were affected by the intake of mycotoxins, there were no changes in the meat of the birds that were supplemented with silymarin. The sum of saturated and monounsaturated fatty acids in the meat did not change between treatments, unlike the sum of the higher polyunsaturated fatty acids in the meat of birds that consumed silymarin. In conclusion to this dissertation, the use of phytogenic compounds, either in isolation or in combination, are additives for use in the poultry chain in Brazil as reducers of the impacts caused by mycotoxins, generating positive effects on zootechnical performance and bird health. The use of silymarin in isolation, prevents delayed growth and improves the quality of poultry meat. The association of phytogenic compounds (organic acids + tannins + curcumin + microencapsulated essential oils) enhances the biological properties of each compound, an association has a high potential to improve the performance of broilers in the early and growing stages.

Desenvolvimento de uma metodologia ex vivo para avaliação de aditivos antimicotoxinas para aves

A inclusão de aditivos antimicotoxinas (AAMs) em rações para aves é uma das principais estratégias para reduzir os efeitos prejudiciais das micotoxinas. AAMs são substâncias capazes de adsorver, inativar, neutralizar ou biotransformar micotoxinas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia ex vivo para avaliação de AAMs utilizados na produção avícola. Explantes jejunais de frangos de corte destinados ao consumo humano foram utilizados em dois estudos para testar a eficácia de AAMs frente à aflatoxina B1 (AFB1) e ao deoxinivalenol (DON); o efeito direto de DON sobre as vilosidades intestinais também foi investigado. Quatro pares de câmaras de Ussing com área de contato intestinal de 1,0 cm² foram mantidas a 37 ºC e borbulhadas com carbogênio durante 120 min. No estudo 1, seis AAMs disponíveis comercialmente (aditivo antimicotoxinas - AAM 1 a 6) tiveram sua capacidade de reduzir a absorção intestinal de AFB1 avaliada a fim de verificar eficácia. Explantes jejunais (n=4/ave) foram obtidos de 60 frangos no abate, totalizando 240 amostras (40 amostras/AAM). Os explantes foram submetidos a dois tratamentos por AAM: T1 (controle) - 2,8 mg/L de AFB1 e T2 - 2,8 mg/L de AFB1 + 0,5% AAM. Os AAMs também foram testados in vitro para avaliar a adsorção de AFB1 em fluido intestinal artificial. O estudo 2 analisou o impacto deletério de DON sobre as vilosidades intestinais e a eficácia de um AAM. Dois experimentos foram conduzidos para avaliar parâmetros histopatológicos e imunohistoquímicos: Experimento 1) T1 (controle positivo) - somente solução tampão, e T2 - 10 mg/L de DON (duas replicatas/tratamento); e Experimento 2) T1 (controle positivo) - somente solução tampão, T2 (controle negativo) - 10 mg/L de DON, T3 - somente o AAM (0,5%) e T4 - 10 mg/L de DON + 0,5% AAM. Explantes jejunais (n=4/ave) foram obtidos de 22 frangos no abate, totalizando 88 amostras (40 e 48 amostras para os experimentos 1 e 2, respectivamente). Os resultados do estudo 1 demonstraram que AAM1 ao AAM6 reduziram a absorção intestinal de AFB1 nos ensaios ex vivo em 67,11%, 73,82%, 80,70%, 85,86%, 86,28% e 82,32%, respectivamente; já nos testes in vitro, AAM1 ao AAM6 apresentaram adsorção de 99,72%, 99,37%, 99,67%, 99,53%, 99,04% e 99,15%, respectivamente. Não houve correlação entre os achados ex vivo e in vitro. Quanto ao estudo 2, DON reduziu o tamanho dos enterócitos e de seus núcleos e aumentou a vacuolização do citoplasma, o desnudamento do ápice das vilosidades e o número de células apoptóticas no Experimento 1; os parâmetros investigados no Experimento 2 revelaram que o uso do AAM mitigou os efeitos prejudiciais de DON sobre as vilosidades intestinais. A presente avaliação demonstra que o modelo ex vivo utilizando explantes intestinais de frangos de corte montados em câmaras de Ussing é uma ferramenta viável para complementar ensaios in vitro e in vivo empregados na avaliação da eficácia de AAMs e também para a triagem de novos compostos. Além disso, essa metodologia pode ser aplicada para determinar o impacto negativo de DON na integridade do epitélio intestinal de frangos de corte

Inclusion of antimycotoxins additives (AMAs) in poultry feed is one of the main strategies to reduce the harmful effects of mycotoxins. AMAs are substances capable of adsorbing, inactivating, neutralizing or biotransforming mycotoxins. This work aimed to develop an ex vivo methodology to evaluate AMAs used in poultry production. Intestinal explants from broiler chickens destined to human consumption were used in two studies to test the efficacy of AMAs against aflatoxin B1 (AFB1) and deoxynivalenol (DON); the direct effect of DON upon intestinal tissue was also investigated. Four pairs of Ussing chambers with an intestinal contact area of 1.0 cm² were used at 37°C and bubbled with carbogen gas for 120 min. In study 1, six commercially available AMAs (antimycotoxins additive - AMA 1 to 6) had their ability to reduce intestinal absorption of AFB1 evaluated in order to assess efficacy. Jejunal explants (n=4/bird) were collected from 60 broilers at slaughter, totaling 240 samples (40 samples/AMA). The explants were subjected to two treatments per AMA: T1 (control) - 2.8 mg/L of AFB1, and T2 - 2.8 mg/L of AFB1 + 0.5% AMA. The AMAs were also tested in vitro to investigate AFB1 adsorption in artificial intestinal fluid. Study 2 analyzed the detrimental impact of DON on intestinal tissue as well as the efficacy of an AMA. Two experiments were conducted to examine histopathological and immunohistochemical parameters: Experiment 1) T1 (positive control) - buffer solution only, and T2 - 10 mg/L DON (two replicates/treatment); and Experiment 2) T1 (positive control) - buffer solution only, T2 (negative control) - 10 mg/L DON, T3 - AMA (0.5%) only, and T4 - 10 mg/L DON + 0.5% AMA. Jejunal explants (n=4/bird) were taken from 22 broilers at slaughter, totaling 88 samples (40 and 48 samples for experiments 1 and 2, respectively). Results of study 1 showed that AMA1 to AMA6 decreased intestinal absorption of AFB1 in the ex vivo assays by 67.11%, 73.82%, 80.70%, 85.86%, 86.28% and 82.32%, respectively; as for the in vitro tests, AMA1 to AMA6 presented an adsorption of 99.72%, 99.37%, 99.67%, 99.53%, 99.04% and 99.15%, respectively. No correlation was seen between ex vivo and in vitro findings. Regarding the second study, DON reduced the size of enterocytes as well as of their nuclei and increased cytoplasmic vacuolization, apical denudation of villi and the number of apoptotic cells in Experiment 1; the parameters investigated in Experiment 2 evidenced that the AMA mitigated the harmful effects of DON upon intestinal villi. The present assessment demonstrates that the ex vivo model using intestinal explants from broiler chickens mounted on Ussing chambers is a viable tool to complement in vitro and in vivo assays employed to evaluate the efficacy of AMAs and also to screen new compounds. Moreover, this methodology may be applied to determine the burden imposed by DON on the integrity of the intestinal epithelium of broilers

Estudo sobre a ocorrência de fungos e aflatoxina B1 na dieta de bovinos leiteiros em São Paulo / Study on the occurrence of fungi and aflatoxina B1 in the diet of dairy cattle in São Paulo, Brazil

A qualidade da dieta ofertada às vacas em lactação é uma preocupação dos agentes de saúde devido à possibilidade da detecção de micotoxinas prejudiciais a saúde humana e animal. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil da micobiota, determinar a atividade de água (Aa) e a ocorrência natural de aflatoxina B1 (AFB1) em dietas ofertadas a vacas em lactação de fazendas leiteiras no estado de São Paulo, Brasil. As amostragens das dietas foram realizadas diretamente dos cochos de lote de 15 vacas, em dois dias consecutivos com intervalos de 24h e a cada 15 dias, perfazendo um período de 45 dias de amostragens por fazenda. A purificação e determinação de AFB1 foram realizadas em colunas de imunoafinidade e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O estudo da micobiota presente nas amostras das dietas (288) revelou que as leveduras foram predominantes em todas as dietas (83,97 a 99,98%). Foram isolados 15 gêneros de fungos filamentosos, com os gêneros Aspergillus spp (20,09%), Fusarium spp (14,16%) e Penicillium spp (11,48%) os mais prevalentes. As contagens de Unidades Formadoras de Colônias por grama de alimento (UFC. g-1) variaram de 102 a 1011. A atividade de água das amostras variou entre 0,91 a 0,98. Foi detectada a presença de AFB1 em 31,44% das amostras com teores entre 1,68 a 194,51μg.kg-1. Medidas de boas práticas de produção, estocagem e utilização devem ser tomadas para diminuir a ocorrência de AFB1 nas dietas ofertadas às vacas em lactação.(AU)

The quality of the diet offered to lactating cows is a concern to health officials the possibility of detecting mycotoxins harmful to human and animal health. The objectives were to evaluate the profile of mycoflora, determine the water activity (Aw) and the natural occurrence of aflatoxin B1 (AFB1) in diets offered to lactating cows from dairy farms in the state of São Paulo, Brazil. Samples of the diets were taken directly from the troughs batch of 15 cows, on two consecutive days at intervals of 24 hours and every 15 days with a period of 45 sampling days per farm. Purification and determination of AFB1 were performed on immunoaffinity columns and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The study of mycobiota present in samples of diets (288) revealed that yeast cells were predominant in all diets (83.97 to 99.98%). 15 genera were isolated from filamentous fungi, with Aspergillus spp (20.09%), Fusarium spp. (14.16%) and Penicillium spp. (11.48%) the most prevalent. The counts of colony forming units per gram of food (UFC.g-1) ranged from 102 a1011. The water activity of the samples ranged from 0.91 to 0.98. We have detected the presence of AFB1 in 31.44% of samples with levels between 1.68 a 194.51μg.kg-1. Measures of good production, storage and use should be taken to reduce the occurrence of aflatoxin B1 in the diet offered to lactating cow.(AU)

EFEITOS DO TEMPO DE JEJUM PRÉ-ABATE E AFLATOXINAS NO FÍGADO DE FRANGOS DE CORTE

As aflatoxinas (AFLs) podem ser tóxicas para os animais, mesmo em concentrações relativamente baixas na ração, podendo levar à perda de peso corporal e à alterações na aparência do fígado. O jejum pré-abate é uma prática padrão de manejo, que também possui efeitos nas características do fígado e no desempenho dos frangos. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos dos períodos de jejum alimentar que variaram de 0 a 12 h e os efeitos da ração contaminadas por AFLs em frangos de corte. Um total de 240 frangos de corte Cobb fêmeas de 1 d foi alimentado com uma ração pré-inicial a base de de milho e soja não contaminada (1 a 7 d) e após esse período (8 a 28 d) dividido em um grupo controle com ração comercial (analisado sem AFLs) ou adicionado com 1 ppm de AFLs (792 ppb de aflatoxina B1, 35 ppb de aflatoxina B2, 219 ppb de aflatoxina G1 e quantidades indetectáveis de aflatoxina G2). Ao 28º dia, todas as aves foram pesadas e abatidas após três períodos de retirada das rações (0, 6 e 12h). O peso corporal, o peso do fígado e o conteúdo de gordura do fígado diminuíram à medida que o tempo de jejum pré-abate aumentava, enquanto a taxa de CA e o peso da vesícula biliar aumentava. AFLs diminuíram o peso corporal e o conteúdo de gordura no fígado, mas aumentaram o peso do fígado da vesícula biliar e a taxa de CA. Ambos os fatores independentes interagiram de tal forma que as AFLs exacerbaram os efeitos negativos do jejum sobre o peso corporal, a CA, bem como o aumento do peso do fígado e da vesícula biliar. A gordura do fígado foi reduzida pela retirada da ração, mas aumentou quando as aves foram alimentadas com AFLs. Fígados de frangos de corte sem jejum foram mais claros (L*) do que fígados de frangos de corte em jejum por 6 e 12h (L * = 33,9, 29,5 e 23,9, respectivamente). A coloração amarelada (b *) foi maior nos fígados de frangos sem jejum quando comparado aos períodos de jejum de 6 ou 12h (b * = 11,8, 8,97 e 10,54, respectivamente). Os valores de L* e coloração avermelhada (a *) dos fígados de frangos de corte alimentados sem AFLs (L*= 26,73; a*= 9,55, respectivamente) foram menores que os dos AFLs alimentados com aves (L * = 29,54; a*= 10,74). O aumento do tempo de jejum pré-abate diminui a luminosidade do fígado, enquanto a ingestão de AFL aumenta a coloração amarelada. Essas alterações podem confundir o serviço de inspeção e, eventualmente, levar à condenação errada do fígado nas plantas de processamento.

Aflatoxins (AFLs) can be extremely poisonous to animals, even at relatively low in feed concentrations, leading to body weight loss as well as altered liver appearance. Pre slaughter fasted is a standard management practice likewise have effects on the liver characteristics and broiler performance. The objective of the present study was to investigate the effects of feeding withdrawal periods ranging from 0 to 12 h in comparison to AFLs contaminated feeds. A total of 240 one-d-old female Cobb broiler chickens were fed non-contaminated corn-soy pre starters (1 to 7 d) and then (8 to 28 d) a commercial feed Control (analyzed without AFLs) or added with 1 ppm AFLs (792 ppb of aflatoxin B1, 35 ppb of aflatoxin B2, 219 ppb of aflatoxin G1 and undetectable amounts of aflatoxin G2). Day 28 all birds were weighted and slaughtered following 3 feed withdrawal time periods (0, 6 and 12h). Body weight, liver weight and liver fat content decreased as feed withdrawal lengthened whereas FCR and gall bladder weight increased. AFLs decreased body weight and liver fat content but increased FCR, liver and gall bladder weights. Both independent factors interacted such that AFLs exacerbated feed withdrawal negative effects on body weight, FCR, as well as increased liver and gall bladder weights. Liver fat was reduced by feed withdrawal but increased when birds were fed AFLs. Livers from non-fasted broilers showed greater lightness (L*) than livers of broilers fasted for 6 and 12h (L*= 33.9, 29.5 and 23.9, respectively). Yellowness (b*) was greater in livers of non-fasted broilers when compared to those fasted for 6 or 12h (b*=11.8, 8.97 and 10.54, respectively). L* and redness (a*) values of livers of broilers fed without AFLs (L*= 26.73; a*= 9.55, respectively) were lower than those of AFLs fed birds (L*= 29.54; a*= 10.74). Prolonging preslaughter feed withdrawal increases liver darkness whereas AFLs intake increases yellowness. These changes may confound inspection service personnel and eventually can lead to wrong liver condemnation in processing plants.

Toxigenic mycobiota and mycotoxins in shrimp feed / Micobiota toxígena e micotoxinas em ração de camarão

The objective of this study was to identify the toxigenic mycobiota and the occurrence of aflatoxins in shrimp feed products intended for shrimp cultivated in the coastal area of the state of Piauí, Brazil, in three farms ("A", "B" and "C"). The toxigenic capacity of the fungal species isolated was tested for aflatoxins (AF) and ochratoxin A production. The fungal counts of shrimp feed were similar for the "A" and "B" farms at all cultivation phases, collection sites, in closed and opened packages (1.33 to 2.66CFU g-1 log10 -1). The lowest fungal counts were found in feed from "C" farm (0.65CFU g-1 log10 -1) from closed packages. Thirty-four strains of Aspergillus were detected with a greater prevalence of A. flavus. Two strains produced B1, B2, G1 and G2 aflatoxins at concentrations from 0.39 to 0.42ng g-1; 0.18 to 0.27ng g-1; 1.78ng g-1 and 0.09ng g-1 respectively and were classified as atypical A. flavus. Two strains of A. niger aggregate were OTA producers. Fifteen samples (13.88%) presented AFB1 contamination at levels ranging from 0.25ng to 360ng g-1. This study demonstrates the presence of toxigenic fungi in shrimp feed used at different phases of cultivation and farms. Atypical strains of A. flavus were isolated which produced AF B1, B2, G1 and G2 in shrimp feeds. Only AFB1 was detected in the analyzed feed.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar a micobiota toxigênica e a incidência de aflatoxinas em rações comerciais para camarão cultivado no litoral do Estado do Piauí, Brasil, em três fazendas ("A", "B" e "C"). Foi realizada a capacidade toxigênica das espécies de fungos isolados e a produção de aflatoxinas (AF) e ocratoxina A (OTA). As contagens fúngicas da ração foram semelhantes nas fazendas "A" e "B" e em todas as fases de cultivo, locais de coleta e de embalagens fechadas e abertas (1,33-2,66UFC g-1 log10 -1). As mais baixas contagens de fungos foram encontradas nas rações de embalagens fechadas da fazenda "C" (0,65UFC g-1 log10 -1). Foram isoladas trinta e quatro cepas de Aspergillus com maior prevalência de A. flavus e duas linhagens eram produtoras de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em concentrações 0,39-0,42ng g-1; 0,18-0,27ng g-1; 1,78ng g-1, e 0,09ng g-1, respectivamente, e foi classificado como A. flavus atípico, sendo necessária posteriormente a classificação filogenética desta cepa. Duas cepas de A. niger agregados eram produtoras de OTA. Quinze amostras de ração (13,88%) apresentaram contaminação AFB1 em níveis que variam de 0,25ng a 360ng g-1. Este estudo demonstra a presença de fungos toxigênicos em rações de camarão nas fazendas analisadas e nas diferentes fases de cultivo. Foram isoladas, em rações de camarões, cepas atípicas de A. flavus, produzindo AF B1, B2, G1 e G2. Apenas AFB1 foi detectada na ração analisada.(AU)

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk commercialized in the Parana State, Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em leite bovino comercializado no estado do Paraná, Brasil

The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aflatoxina M1 em 82 amostras de leite bovino pasteurizado, coletadas no período de março/2010 a maio/2011 em 11 municípios do Estado do Paraná, Brasil. A metodologia analítica utilizada foi o ensaio imunoenzimático empregada para determinar qualitativamente a presença de AFM1 (limite de detecção = 0,05 ?g.kg-1). AFM1 não foi detectada em nenhuma das amostras avaliadas. Apesar dos resultados satisfatórios, se faz necessário a realização de uma vigilância ativa desta micotoxina, a fim de proporcionar segurança, qualidade e integridade a saúde humana.(AU)

Mutational evaluation of TP53 gene in the canine hepatocellular carcinoma: a comparative approach

Os carcinomas hepatocelulares (CHC) representam uma parte importante das doenças hepáticas em cães, correspondendo a mais de 50% das neoplasias primárias do fígado nesta espécie. O CHC afeta, principalmente, cães machos com mais de 10 anos de idade, apresentando prognóstico ruim em pacientes não elegíveis para cirurgia. Nos últimos anos, os estudos em oncologia comparada têm adquirido grande importância, uma vez que cães e humanos compartilham diversas características celulares e moleculares. Em humanos, o CHC é associado às lesões hepáticas crônicas, causadas por infecções virais (hepatites C e B), doença hepática gordurosa (alcoólica e não alcoólica), intoxicações crônicas (medicamentos, micotoxinas, etc.), dentre outras. O consumo da aflatoxina B1 (AFB1) está associado a uma mutação especifica no códon 249 do gene TP53, ocasionando o CHC em uma parcela dos pacientes expostos à esta micotoxina. Como os cães não apresentam hepatites virais crônicas ou doenças gordurosas hepáticas, fatores ambientais e alimentares, como a possível presença de aflatoxina B1 nas rações, podem estar diretamente relacionados à etiologia do CHC nesta espécie. Assim, inicialmente este estudo realizou uma revisão de literatura comparada sobre os aspectos epidemiológicos, clinicopatológicos e anatomopatológicos do CHC em cães e humanos. Posteriormente, avaliou-se a presença de mutações no gene TP53 em amostras de CHC canino (n=24), com o objetivo de determinar uma possível associação da AFB1 na hepatocarcinogênese. Os dados clínico-epidemiológicos observados nos CHCs caninos apresentaram-se dentro do relatado na literatura. No entanto, não foram observadas mutações no gene TP53 ou imunoexpressão de p53. Assim, devido à ausência de mutações no gene TP53 nas amostras analisadas, a participação da AFB1 como fator etiológico no CHC permanece em aberto.

Hepatocellular carcinomas (HCC) represent an important part of hepatic diseases in dogs, correspond to more than 50% of primary neoplasms of the liver in this species. HCC affects, mainly, male dogs over 10-years-old, presenting poor prognosis in patients not suitable for surgery. Latest years, studies about comparative oncology have acquired great importance, since dogs and humans share diverse cellular and molecular features. In humans, HCC is associated with chronic liver injuries, caused by viral infections (hepatitis C and B), fatty liver disease (alcoholic and non-alcoholic), chronic intoxication (drugs, mycotoxins, etc.), among others. The consumption of aflatoxin B1 (AFB1) is associated with a specific mutation in codon 249 of the TP53 gene, causing HCC in part of the patients exposed to this mycotoxin. In case that dogs do not present chronic viral hepatitis or fatty liver diseases, environmental and feeding factors, such as the possible presence of aflatoxin B1 in pet food, may be directly related to the etiology of HCC in this species. Firstly, this study performed a comparative literature review of epidemiological, clinicopathological and anatomo-pathological aspects of HCC in dogs and humans. Subsequently, the presence of mutations in the TP53 gene were evaluated in canine HCC samples (n = 24), in order to determine a possible association of AFB1 in hepatocarcinogenesis. Clinical-epidemiological data observed in canine HCC are in agree with the literature reviewed. However, mutations in the TP53 gene or p53 immunoexpression were not observed. Thus, due to the absence of mutations in the TP53 gene in the analyzed samples, the participation of AFB1 as an etiological factor in HCC remains open.

AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA E TOXICOLÓGICA DE MICOTOXINAS E ANTIBIÓTICOS EM SUPLEMENTOS ALIMENTARES PARA RECÉM NASCIDOS

Nos dias atuais, o uso de suplementos alimentares se faz cada vez mais presente devido a mudanças nos hábitos alimentares. Sendo assim, se tornou cada vez mais necessário a inclusão de suplementos alimentares na dieta de crianças, em especial os recém-nascidos. Considerando a fragilidade da população alvo, é importante realizar estudos para a avaliação dos possíveis perigos microbiológicos e toxicológicos aos quais os consumidores estão expostos bem como a relevância de tais perigos. Foram realizadas as análises de aeróbio mesófilos totais, coliformes totais, enterobactérias, bactérias ácido lácticas, estafilococos coagualase positiva, Bacillus cereus, Salmonella spp., conforme descrito no manual da APHA. Enterococcus spp. segundo manual Merck e Cronobacter sakazakii segundo a metodologia descrita pelo padrão ISSO/TS 22964. A determinação de fungos filamentosos e fungos xerofílico foi realizada utilizando os meios DRBC e DG18, respectivamente, seguindo a metodologia proposta por Pitt, Hocking e Abarca. A determinação de aflatoxina M1 foi realizada através de fluorimetria após extração associada com métodos imunoenzimáticos. Após a avaliação das 36 amostras, não foram detectadas, bactérias ácido lácticas, B. cereus, C. sakazakii, coliformes, enterobacteriaceas, Enterococcus spp. e Salmonella spp. em nenhuma das amostras. As análises revelaram valores médios (UFC/mL): aeróbios mesófilos de 3,54 x 10³; estafilococos coagulase positivo 3,89 x 101; fungos filamentosos e xerofílicos 8,14 x 10² e 2,34 x 10³, respectivamente. Os dados obtidos neste estudo comprovam a seguridade desses alimentos e sua conformidade frente a legislação vigente, corroborando as recomendações de consumo imediato após ressuspensão dessas fórmulas, assim como as recomendações de estocagem do produto a fim de evitar a proliferação de micro-organismos patogênicos. A quantificação de aflatoxina M1 em todas as amostras analisadas se mantiveram abaixo do limite de detecção da técnica (0,013 mg/kg), estando abaixo do preconizado pela legislação e, por tanto, não oferecendo risco ao consumidor. Os valores de contagem obtidos nesse estudo são um reflexo de falhas durante o processamento do produto, escolha da matéria prima e manipulação durante a sua reconstituição. Porém, as amostras analisadas apresentaram valores de contagem dentro do preconizado pela legislação estando assim em conformidade e seguras para o consumo.

The use of dietary supplements is becoming more and more present due to changes in food habits. Thus, it has become increasingly necessary to include dietary supplements in the diet of children, especially newborns. Considering the fragility of the target population, it is important to carry out studies to assess the possible microbiological and toxicological hazards to which consumers are exposed relevance. The total mesophyll aerobic, total coliform, enterobacteria, lactic acid bacteria, coagualase positive staphylococci, Bacillus cereus, Salmonella spp., as described in the APHA manual were performed microbiological analysis. Enterococcus spp. were evaluated by method described at Merck manual and Cronobacter sakazakii according to the methodology described by standard ISSO / TS 22964. The determination of filamentous fungi and xerophilic fungi was performed using the DRBC and DG18 media, respectively, following the methodology proposed by Pitt, Hocking and Abarca. The determination of aflatoxin M1 was performed by fluorimetry after extraction associated with enzyme-linked immunosorbent cleanup columns. After the evaluation of the 36 samples, no lactic acid bacteria, B. cereus, C. sakazakii, coliforms, Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. and Salmonella spp. in anyone of the samples. The analyzes revealed mean values (CFU / mL): aerobic mesophiles of 3.54 x 10³; coagulase positive staphylococci 3.89 x 101; filamentous and xerophilic fungi 8.14 x 10² and 2.34 x 10³, respectively. The data obtained in this study confirm the safety of these supplements foods and their compliance with the current legislation, corroborating the recommendations of immediate consumption after resuspension of these formulas, as well as the recommendations of stocking the product in order to avoid the proliferation of pathogenic microorganisms. The quantification of aflatoxin M1 in all the analyzed samples remained below the limit of detection of the technique (0.013 mg / kg), being below the recommended by the legislation and, therefore, offering no risk to the consumer. The count values obtained in this study are a reflection of failures during product processing, choice of raw material and handling during its reconstitution. However, the analyzed samples presented counting values within the recommended by the legislation being thus in conformity and safe for the consumption.

QUANTIFICAÇÃO DE MICOTOXINAS E ANÁLISE BROMATOLÓGICA DE SILAGENS DE MILHO NA MICRORREGIÃO GEOGRÁFICA APUCARANA, NO NORTE DO PARANÁ

Este estudo buscou determinar a composição bromatológica e a ocorrência de micotoxinas em amostras de silos coletadas em 54 propriedades, localizadas na Microrregião Geográfica Apucarana, no Norte do Paraná. As amostras foram analisadas quanto a pH, análises bromatológicas e análises micotoxicológicas (aflatoxina AFLA; zearalenona ZEA; Vomotoxina DON; e fumonisina FB). Os valores médios para matéria seca foram 32,86%; Matéria mineral 3,59%; Proteina bruta 6,25%; Extrato etéreo 1,77%; Fibra em detergente neutro 47,13%; Fibra em detergente ácido 26,96%; Nutrientes digestíveis totais 70,31%. Os valores de pH se diferenciaram entre as silagens com média e alta compactação (p<0,05); sendo 7% inferior na silagem de alta compactação. As incidências das micotoxinas foram de 85,1% para DON, 74,4% para ZEA, 48,9% para AFLA e 42,5% para FB. As silagens de milho avaliadas apresentaram composição bromatológica dentro dos padrões recomendados para este volumoso. A micotoxina DON foi a de maior incidência. Apenas 2,1% das silagens apresentaram teores de Aflatoxinas acima dos limites permitidos na legislação brasileira. As silagens apresentaram-se despadronizadas com relação ao tamanho de partículas. Silagens com elevada compactação tiveram menor pH, e menores quantidades de Aflatoxinas.

This study aimed to determine the bromatological composition and the occurrence of mycotoxins in samples from collected silos in 54 properties located in the Apucarana Geographic Microregion in the North of Paraná. The samples were analyzed for pH, bromatological analyzes and mycotoxicological analyzes (aflatoxin - AFLA; zearalenone - ZEA; Vomotoxin - DON; and fumonisin - FB). The average values for dry matter were 32.86%; Mineral matter 3,59%; Crude protein 6.25%; Ethereal extract 1.77%; Neutral detergent fiber 47,13%; Fiber in acid detergent 26.96%; Total digestible nutrients 70,31%. The pH values differed between silages with medium and high compaction (p <0.05); being 7% lower in the high compaction silage. The incidence of mycotoxins were 85,1% for DON, 74,4% for ZEA, 48,9% for AFLA and 42,5% for FB. The corn silages evaluated presented bromatological composition within the recommended standards for this bulk. Mycotoxin DON was the one with the highest incidence. There was an incidence of all mycotoxins in the silages, however only 2.1% presented levels of Aflatoxins above the limits permitted by Brazilian legislation. The silages were unadjusted in relation to the particle size. High compaction silages had lower pH, and lower amounts of Aflatoxins.

Otimização estatística de variáveis da fermentação de Sacchanomyces cenevisiae para maior produção de biomassa com capacidade absorvente de micotoxinas.

As micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por certos fungos. Destas, as que mais se destacam são as aflatoxinas, por apresentarem efeito carcinogênico e mutagênico. A levedura Saccharomyces cerevisiae é o principal microrganismo utilizado na adsorção de micotoxinas, por ser considerado grau GRAS (Generally Recognized As Safe) e sua capacidade probiótica. A produção industrial dessa levedura deve ser cuidadosa para manter sua viabilidade e suas atividades probióticas, além de ser economicamente viável. A utilização de desenhos experimentais viabiliza o processo de produção industrial por selecionar as variáveis relevantes e ao nível ótimo de cada uma, de forma a aumentar a produção de biomassa. Este trabalho teve como objetivo realizar planejamento experimental de forma a aumentar a produção de biomassa de duas cepas de S. cerevisiae com capacidade probiótica e adsorvente de micotoxina. Para tal foram utilizadas as cepas S. cerevisiae LL74 e LL83. Os modelos utilizados, Plackett-Burman e Box-Behnken, se mostraram eficientes para otimização, melhorando estatisticamente a produção de biomassa quando comparado às condições padrão descritas na literatura (meio YPD, a 30ºC e 150 rpm). O modelo foi estatisticamente significativo com intervalo de confiança de 95% e o coeficiente de determinação (R2) indicou precisão aceitável. A condição otimizada para maior produção de biomassa da cepa S. cerevisiae LL74 apresentou economia de até 80% quando comparada ao meio padrão YPD e apresentou um aumento de 14,5% na produção de biomassa. Ao passo que, mesmo apresentando aumento de 6,3% na produção de biomassa, a levedura S. cerevisiae LL83 requereu uma quantidade de insumos para sua produção ótima de biomassa até 119% maior quando comparado ao meio padrão YPD. A utilização de desenhos experimentais se mostrou eficiente para otimização da produção de biomassa de S. cerevisiae, melhorando estatisticamente o processo produtivo.

Mycotoxins are secondary fungal metabolites produced by some fungi species. Among of these, aflatoxins are the most outstanding, because they have a carcinogenic and mutagenic effect. The yeast Saccharomyces cerevisiae is the main microorganism used in the adsorption of mycotoxins because it is considered GRAS (Generally Recognized As Safe) and its probiotic capacity. The industrial production of this yeast must be careful to maintain its viability and its probiotic activities, in addition to being economically viable. The use of experimental designs enables the industrial production process by selecting the relevant variables and the optimum level of each one, in order to increase the biomass production. The objective of this work was to carry out experimental planning in order to increase the biomass production of two strains of S. cerevisiae, with probiotic and mycotoxin adsorbent capacity. The strains S. cerevisiae LL74 and LL83 were used for this purpose. The models used, Plackett-Burman and Box-Behnken, were efficient for optimization, statistically improving the biomass production when compared to the standard conditions described in the literature (YPD medium, at 30ºC and 150 rpm). The model was statistically significant with a 95% confidence interval and the coefficient of determination (R2) indicated an acceptable accuracy. The optimized medium condition for higher biomass production of the S. cerevisiae LL74 strain presented savings of up to 80% when compared to the standard YPD medium and presented a 14.5% increase in biomass production. Although, the S. cerevisiae LL83 strain required a quantity of inputs for its optimum biomass production up to 119% higher when compared to the standard YPD medium, even with a 6.3% increase in biomass production. The use of experimental designs proved to be efficient for the optimization of S. cerevisiae biomass production, statistically improving the production process.

VIABILIDADE DO USO DE ADSORVENTE DE MICOTOXINA NA TERMINAÇÃO DE CORDEIROS TEXEL EM CONFINAMENTO

O presente estudo teve por objetivo avaliar a viabilidade do uso de adsorvente em dietas de cordeiros confinados, através de variáveis do desempenho, da carcaça, da carne de cordeiros da raça Texel. As dietas utilizadas possuíam milho, soja, resíduo agrícola e silagem de milho divididos em dois grupos denominados tratado e controle, obtendo ganho de peso diário 15% maior no grupo tratado e lucro liquido total de 12,9% maior no período. Tal adsorvente foi feito à base de betaglucanos extraídos da parede celular de Saccharomyces cerevisae. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado com seis repetições cada, sendo cada baia uma repetição, e cada baia contendo dois animais. Utilizaram-se seis machos e seis fêmeas em cada tratamento, totalizando 24 animais. O adsorvente foi utilizado no concentrado oferecido aos animais do grupo tratado, na dose de 1,5 kg por tonelada. O período experimental foi de 38 dias e os animais, quando atingiram média de 26,4 Kg de peso corporal, foram abatidos. O ganho de peso diário foi superior no grupo tratado (216,23 g) em relação ao grupo controle (185,89 g). O consumo de matéria seca (em % do peso corporal) não obteve diferença entre os tratamentos, sendo grupo tratado (1,89%) e controle (1,78%). O perfil sanguíneo não se mostrou diferente entre os grupos. As médias para área de olho de lombo, espessura de gordura subcutânea e marmoreio foram 1393 mm2 , 2,66 mm e 3,20 no grupo tratado e 1216 mm2 , 2,6 mm e 3,25 no grupo controle, respectivamente. Os rendimentos de carcaça biológico, quente, fria, e o índice de quebra não foram diferentes entre si, sendo as médias de 45,3, 44,1% e 2,7%, respectivamente. As carcaças apresentaram-se semelhantes quanto a conformação, com média de 3,95 e 3,83 para acabamento de gordura. As perdas por descongelamento e cocção, pH da carne, EE e PB, não diferiram entre os grupos, apresentando valores médios de 17,9, 66,2, 5,7, 3,5 e 24,0%, respectivamente. Houve efeito de sexo para os níveis de PB e EE da carne. Conclui-se que é viável o uso de adsorvente de micotoxinas em cordeiros confinados com uso de resíduos agroindustriais e o uso do aditivo resulta em maior ganho de peso diário e lucro líquido médio.

The objective of this study was to evaluate the viability of the use of adsorbents in confined lamb diets, by means of performance, carcass, lamb meat of the Texel breed. The diets used had corn, soy, agricultural residue and corn silage divided into two groups called TREATED and CONTROL, obtaining daily weight gain 15% higher in the treated group and total net profit fron 12.9% higher in the period. The adsorbent was made based on glucans extracted from the cellular wall of Saccharomyces cerevisae. The experimental design used was entirely randomized with six repetitions each, each stall being a repeat, and each bay containing two animals. Six males and six females were used in each treatment, totaling 24 animals. The adsorbent was used in the concentrate offered to the animals of the treated group, at a dose of 1, 5 kg per tonne. The trial period was 38 days and the animals, when they reached an average of 26.4 Kg of body weight, were slaughtered. The daily weight gain was higher in the TREATED group (216.23 g) in relation to the control group (185.89 g). The consumption of dry matter (in% of body weight) did not have a difference between the treatments, being treated group (1.89%) and control (1.78%). The blood profile showed no difference between the groups. Mediums for rib eye area, subcutaneous fat thickness and marbling were 1393 mm², 2.66 mm and 3.20 in the treated group and 1216 mm², 2.6 mm and 3.25 in the control group, respectively. The yields of biological, hot, cold carcasses and the index of breakage were not different from each other, the averages of 45.3%, 44.1% and 2.7%, respectively. The carcases were similar to conformation, with an average of 3.95 and 3.83 for the finishing of fat. The defrosting and cooking losses, pH of the meat, EE and PB, did not differ between the groups, presenting average values of 17.9, 66.2, 5.7, 3.5 and 24.0%, respectively. There was sex effect for the PB and EE levels of the meat. It is concluded that the use of mycotoxins in confined lambs with the use of agro residues is feasible and the use of the additive results in greater daily weight gain and average net income.

Intoxicação experimental por aflatoxina em bezerros / Experimental aflatoxin poisoning in calves

Foram realizados dois experimentos para determinar os efeitos tóxicos de diferentes doses de aflatoxinas em bezerros, considerando-se aspectos clínicos, produtivos e patológicos. ... No primeiro experimento, o ganho de peso dos bezerros recebendo AFB1 foi equivalente ao do grupo controle durante todo período experimental. ...Durante o período experimental, e três semanas após o término desse período, não foram observados sinais clínicos e alterações histopatológicas associadas ao consumo de aflatoxinas, em qualquer dos bezerros do grupo tratamento do primeiro experimento.... Níveis alterados da atividade sérica de FA e GGT foram observados em todos os bezerros do grupo tratamento durante grande parte do período experimental. Queda acentuada do nível da AS sérica foi observada na coleta do 49º dia do experimento no bezerro que recebia a maior dose de aflatoxina. Não foram observadas variações no hematócrito e na atividade sérica da AST, nem nos níveis séricos de proteína total, bilirrubina total e bilirrubina direta em qualquer dos bezerros desse experimento. Alterações histopatológicas nos bezerros intoxicados incluíram proliferação de ductos biliares, degeneração citoplasmática vacuolar consistente com acumulação hepatocelular de lipídios, fibrose periportal, ou em ponte, megalocitose, fibrose subendotelial das veias hepáticas terminais e edema. Achados de necropsia do bezerro recebendo a maior dose de AFB1 incluíram fígado levemente aumentado de tamanho, difusamente amarelo-claro e firme, discreta ascite, edema de mesentério e submucosa do abomaso. Os dados obtidos nesses experimentos permitem afirmar que doses de 500±100 ppb de AFB1 não causam alterações patológicas e produtivas em bezerros em condições experimentais, mas podem estar associadas à mínimas alterações bioquímicas, enquanto doses de 1.250, 2.500 e 5.000 ppb de aflatoxina B1 causam doença hepática crônica em bezerros em condições experimentais.(AU)

Two experiments were performed in order to determine the toxic effects of varying doses of aflatoxins in calves. Clinical, productive and pathologic aspects of affected calves were considered….During all the experimental period of the first experiment, the weight gain of the calves receiving AFB1 was equivalent to that of the control group.…During the whole experimental period and up to three weeks after the final of the experiment, no clinical signs or histopathological changes associated with the consumption of aflatoxins were observed in any of the calves of the first experiment….Increased activity of AF and GGT were observed in all the calves of the treated group during most part of the experimental period. A marked drop in the serum levels of SA was observed in the serum sampled on the 49º day of the experiment in the calf receiving. the largest dose of aflatoxin. No changes were observed regarding PCV, TP, total bilirubin, direct bilirubin and in the serum activity of AST in any of the calves of the second experiment. Histopathological changes in intoxicated calves included bile duct proliferation, cytoplasmic vacuolar hepatocelular degeneration consistent with hepatocelular deposit of lipids, periportal to bridging fibrosis, megalocytosis, subendothelial edema and fibrosis in terminal hepatic veins. Necropsy findings in the euthanatized calf which receive de largest doses of AFB1 included slight enlargement of the liver which was firm and diffusely light-yellow, mild ascites, and edema of the mesentery and of abomasal folds. Data stemmed from these two experiments allow to conclude that AFB1 doses of 500±100 in the ration do not cause pathologic changes or decrease in productivity in calves kept in experimental conditions, but can be associated to minimal serum biochemistry; while AFB1 doses of 1.250, 2.500 e 5.000 ppb in the ration cause chronic hepatic disease in calves in kept in experimental conditions.(AU)