Anti-dermatophyte activity of the aqueous extracts of Thai medicinal plants

Abstract Medicinal plants have long been prescribed in Thailand for centuries. Different constituents of extracts have been used for treating of various infectious diseases. However, there is even less information available regarding the use in fungal skin infection. In order to assess traditional Thai claims about the therapeutic potential, this study is focused on exploring the anti-dermatophyte property of the plants that are currently used as traditional medicines. The potential of four different plant species were selected for investigate in vitro anti-dermatophyte activity. Ethanolic extracts of Chromolaena odorata (L.), Ageratina adenophora (Spreng.), Eclipta prostrate (Linn.), and Acorus calamus (L.). were analysed for their total phenolic content as well as total flavonoid content and were then subjected to test of their anti-dermatophyte properties using agar well diffusion method. Qualitative flavonoids and phenolics analysis of the extracts showed their biologically active constituents. Among the species examined, the result indicated that most of the extracts demonstrated anti-dermatophyte activity. In particular, A. calamus showed the highest efficacy against test organisms. The experiment confirmed the chemical constituents and efficacy of some selected plants and provides a scientific confirmation of the use of Thai plants in traditional medicine for fungal skin infections.

Resumo As plantas medicinais são prescritas há muito tempo na Tailândia, há séculos. Diferentes constituintes de extratos têm sido usados para o tratamento de várias doenças infecciosas. No entanto, existem ainda menos informações disponíveis sobre o uso em infecções fúngicas da pele. A fim de avaliar as alegações tradicionais tailandesas sobre o potencial terapêutico, este estudo está focado em explorar a propriedade antidermatófita das plantas que são usadas atualmente como medicamentos tradicionais. O potencial de quatro espécies de plantas diferentes foi selecionado para investigar a atividade antidermatófita in vitro. Extratos etanólicos de Chromolaena odorata (L.), Ageratina adenophora (Spreng.), Eclipta prostrate (Linn.) e Acorus calamus (L.) foram analisados quanto ao seu conteúdo fenólico total, bem como ao conteúdo de flavonoides totais. E então submetidos ao teste de suas propriedades antidermatófitas usando o método de difusão em ágar bem. A análise qualitativa de flavonoides e fenólicos dos extratos mostrou seus constituintes biologicamente ativos. Entre as espécies examinadas, o resultado indicou que a maioria dos extratos demonstrou atividade antidermatófita. Em particular, A. calamus mostrou a maior eficácia contra organismos de teste. O experimento confirmou os constituintes químicos e a eficácia de algumas plantas selecionadas e fornece uma confirmação científica do uso de plantas tailandesas na medicina tradicional para infecções fúngicas da pele.

Anti-dermatophyte activity of the aqueous extracts of Thai medicinal plants / Atividade antidermatófita dos extratos aquosos de plantas medicinais tailandesas

Medicinal plants have long been prescribed in Thailand for centuries. Different constituents of extracts have been used for treating of various infectious diseases. However, there is even less information available regarding the use in fungal skin infection. In order to assess traditional Thai claims about the therapeutic potential, this study is focused on exploring the anti-dermatophyte property of the plants that are currently used as traditional medicines. The potential of four different plant species were selected for investigate in vitro anti-dermatophyte activity. Ethanolic extracts of Chromolaena odorata (L.), Ageratina adenophora (Spreng.), Eclipta prostrate (Linn.), and Acorus calamus (L.). were analysed for their total phenolic content as well as total flavonoid content and were then subjected to test of their anti-dermatophyte properties using agar well diffusion method. Qualitative flavonoids and phenolics analysis of the extracts showed their biologically active constituents. Among the species examined, the result indicated that most of the extracts demonstrated anti-dermatophyte activity. In particular, A. calamus showed the highest efficacy against test organisms. The experiment confirmed the chemical constituents and efficacy of some selected plants and provides a scientific confirmation of the use of Thai plants in traditional medicine for fungal skin infections.

As plantas medicinais são prescritas há muito tempo na Tailândia, há séculos. Diferentes constituintes de extratos têm sido usados para o tratamento de várias doenças infecciosas. No entanto, existem ainda menos informações disponíveis sobre o uso em infecções fúngicas da pele. A fim de avaliar as alegações tradicionais tailandesas sobre o potencial terapêutico, este estudo está focado em explorar a propriedade antidermatófita das plantas que são usadas atualmente como medicamentos tradicionais. O potencial de quatro espécies de plantas diferentes foi selecionado para investigar a atividade antidermatófita in vitro. Extratos etanólicos de Chromolaena odorata (L.), Ageratina adenophora (Spreng.), Eclipta prostrate (Linn.) e Acorus calamus (L.) foram analisados quanto ao seu conteúdo fenólico total, bem como ao conteúdo de flavonoides totais. E então submetidos ao teste de suas propriedades antidermatófitas usando o método de difusão em ágar bem. A análise qualitativa de flavonoides e fenólicos dos extratos mostrou seus constituintes biologicamente ativos. Entre as espécies examinadas, o resultado indicou que a maioria dos extratos demonstrou atividade antidermatófita. Em particular, A. calamus mostrou a maior eficácia contra organismos de teste. O experimento confirmou os constituintes químicos e a eficácia de algumas plantas selecionadas e fornece uma confirmação científica do uso de plantas tailandesas na medicina tradicional para infecções fúngicas da pele.

Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

The presence of dermatophytes in infected pets and their household environment / Presença de dermatófitos em pets infectados e em seu ambiente domiciliar

The aim of this study was to diagnose dermatophytosis in pets and investigate the presence of dermatophytes in their home environment. Samples from hair coat were collected from 70 pets: 47 dogs, 19 cats, three guinea pigs and one rabbit. After mycological culture, 188 samples were collected from the household environments in 26 homes: 78 from places were of predominantly used by the tutors, 66 from places used by the animals, 44 from flooring, and 24 samples from contactees. Samples were seeded on Mycosel agar, incubated at 25°C, and the colonies were identified by their macro-and-microscopic characteristics. Dermatophytes were found in 37.1% of the samples originating from the sick animals. Microsporum canis was the most prevalent species, isolated in 12 dogs and eight cats; Trichophyton quinckeanum in three guinea pigs, Microsporum gypseum in two dogs and Trichophyton mentagrophytes in one cat. Dermatophytes were found in 69.2% of the surveyed homes; 29.5% of the places/objects predominantly used by the tutors, 42.4% mainly used by the animals, 31.8% from floors, and 50% from contactees. The meeting of dermatophytes in animals and in the household environment confirms the possibility of transmission by direct or indirect contact and their importance in public health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi diagnosticar dermatofitose em pets e pesquisar dermatófitos em seu ambiente domiciliar. Colheram-se amostras de 70 pets, 47 cães, 19 gatos, três cobaias e um coelho. Visitaram-se 26 residências dos animais positivos em cultura micológica para a doença, colhendo-se 188 amostras do ambiente: 78 de locais de uso predominante dos tutores, 66 de uso dos animais e 44 de pisos; também foram colhidas 24 amostras de animais contactantes. As amostras clínicas foram semeadas em ágar Mycosel, incubadas a 25°C, e as colônias identificadas por suas características macro e microscópicas. Dermatófitos foram isolados em 37,1% dos animais suspeitos. Microsporum canis foi o mais frequente, sendo isolado de 12 cães e oito gatos, Trichophyton quinckeanum de três cobaias, Microsporum gypseum de dois cães e Trichophyton mentagrophytes de um gato. Foram encontrados dermatófitos em 69,2% das casas pesquisadas, isolando-se esses fungos em 29,5% dos locais/objetos de uso predominante dos tutores, 42,4% de uso predominante dos animais, 31,8% de pisos e 50% dos animais contactantes. O encontro de dermatófitos nos animais e em superfícies inanimadas nas residências confirma a possibilidade de transmissão de dermatofitose por contato direto e indireto e sua importância em saúde pública.(AU)

The presence of dermatophytes in infected pets and their household environment / Presença de dermatófitos em pets infectados e em seu ambiente domiciliar

The aim of this study was to diagnose dermatophytosis in pets and investigate the presence of dermatophytes in their home environment. Samples from hair coat were collected from 70 pets: 47 dogs, 19 cats, three guinea pigs and one rabbit. After mycological culture, 188 samples were collected from the household environments in 26 homes: 78 from places were of predominantly used by the tutors, 66 from places used by the animals, 44 from flooring, and 24 samples from contactees. Samples were seeded on Mycosel agar, incubated at 25°C, and the colonies were identified by their macro-and-microscopic characteristics. Dermatophytes were found in 37.1% of the samples originating from the sick animals. Microsporum canis was the most prevalent species, isolated in 12 dogs and eight cats; Trichophyton quinckeanum in three guinea pigs, Microsporum gypseum in two dogs and Trichophyton mentagrophytes in one cat. Dermatophytes were found in 69.2% of the surveyed homes; 29.5% of the places/objects predominantly used by the tutors, 42.4% mainly used by the animals, 31.8% from floors, and 50% from contactees. The meeting of dermatophytes in animals and in the household environment confirms the possibility of transmission by direct or indirect contact and their importance in public health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi diagnosticar dermatofitose em pets e pesquisar dermatófitos em seu ambiente domiciliar. Colheram-se amostras de 70 pets, 47 cães, 19 gatos, três cobaias e um coelho. Visitaram-se 26 residências dos animais positivos em cultura micológica para a doença, colhendo-se 188 amostras do ambiente: 78 de locais de uso predominante dos tutores, 66 de uso dos animais e 44 de pisos; também foram colhidas 24 amostras de animais contactantes. As amostras clínicas foram semeadas em ágar Mycosel, incubadas a 25°C, e as colônias identificadas por suas características macro e microscópicas. Dermatófitos foram isolados em 37,1% dos animais suspeitos. Microsporum canis foi o mais frequente, sendo isolado de 12 cães e oito gatos, Trichophyton quinckeanum de três cobaias, Microsporum gypseum de dois cães e Trichophyton mentagrophytes de um gato. Foram encontrados dermatófitos em 69,2% das casas pesquisadas, isolando-se esses fungos em 29,5% dos locais/objetos de uso predominante dos tutores, 42,4% de uso predominante dos animais, 31,8% de pisos e 50% dos animais contactantes. O encontro de dermatófitos nos animais e em superfícies inanimadas nas residências confirma a possibilidade de transmissão de dermatofitose por contato direto e indireto e sua importância em saúde pública.(AU)

Padronização de multiplex PCR para detecção de dermatófitos em pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a PCR multiplex for the detection of dermatophytes in dogs and cats fur and crusts

Objetivou-se padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. 250 amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos foram analisadas por meio de exame direto e cultura, o DNA das mesmas foi extraído para mPCR. Primers foram desenhados e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas (Micoteca URM), Departamento de Micologia, Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco (CCB/UFPE). Como controles negativos de reação, utilizou-se água destilada esterilizada e DNA extraído de Alternaria sp. para verificar a especificidade dos primers. Do total de amostras analisadas, 15 (6%) foram identificadas, em cultura, como dermatófitos, e destas, 10 foram M. canis, três M. gypseum e dois T. mentagrophytes (complexo). Destas 15 amostras positivas, 11 (73,3%) foram detectadas por meio da mPCR. Além destas, seis outras, negativas em cultura, foram identificadas como M. gypseum. Verificou-se uma boa concordância entre os resultados da cultura e mPCR (Kappa: 0,66). O protocolo padronizado neste estudo pode ser utilizado como um método de triagem, por apresentar uma sensibilidade maior que a da cultura, usado paralelamente aos exames de rotina, permitindo um diagnóstico em menor tempo.(AU)

The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in dog and cat fur and/or crusts. 250 fur and/or crusts samples from dogs and cats were analyzed by direct examination and culture, DNA from them was extracted for mPCR. Primers were designed and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures - URM Micoteca - Department of Mycology, Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco (CCB / UFPE). As negative controls, sterile distilled water and DNA extracted from Alternaria sp., were used to verify the specificity of the primers. Of the total samples analyzed, 15 (6%) were identified in culture as dermatophytes, and of these, 10 were M. canis, three M. gypseum and two T. mentagrophytes (complex). Of these 15 positive samples, 11 (73.3%) were detected by mPCR. Besides these, six others, negative in culture, were identified as M. gypseum. There was good agreement between culture results and mPCR (Kappa: 0.66). The protocol standardized in this study can be used as a screening method, because it has a sensitivity greater than that of the culture, used in parallel to the routine exams, allowing a diagnosis in a shorter time.(AU)

Padronização de multiplex PCR para detecção de dermatófitos em pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a PCR multiplex for the detection of dermatophytes in dogs and cats fur and crusts

Objetivou-se padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. 250 amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos foram analisadas por meio de exame direto e cultura, o DNA das mesmas foi extraído para mPCR. Primers foram desenhados e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas (Micoteca URM), Departamento de Micologia, Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco (CCB/UFPE). Como controles negativos de reação, utilizou-se água destilada esterilizada e DNA extraído de Alternaria sp. para verificar a especificidade dos primers. Do total de amostras analisadas, 15 (6%) foram identificadas, em cultura, como dermatófitos, e destas, 10 foram M. canis, três M. gypseum e dois T. mentagrophytes (complexo). Destas 15 amostras positivas, 11 (73,3%) foram detectadas por meio da mPCR. Além destas, seis outras, negativas em cultura, foram identificadas como M. gypseum. Verificou-se uma boa concordância entre os resultados da cultura e mPCR (Kappa: 0,66). O protocolo padronizado neste estudo pode ser utilizado como um método de triagem, por apresentar uma sensibilidade maior que a da cultura, usado paralelamente aos exames de rotina, permitindo um diagnóstico em menor tempo.(AU)

The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in dog and cat fur and/or crusts. 250 fur and/or crusts samples from dogs and cats were analyzed by direct examination and culture, DNA from them was extracted for mPCR. Primers were designed and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures - URM Micoteca - Department of Mycology, Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco (CCB / UFPE). As negative controls, sterile distilled water and DNA extracted from Alternaria sp., were used to verify the specificity of the primers. Of the total samples analyzed, 15 (6%) were identified in culture as dermatophytes, and of these, 10 were M. canis, three M. gypseum and two T. mentagrophytes (complex). Of these 15 positive samples, 11 (73.3%) were detected by mPCR. Besides these, six others, negative in culture, were identified as M. gypseum. There was good agreement between culture results and mPCR (Kappa: 0.66). The protocol standardized in this study can be used as a screening method, because it has a sensitivity greater than that of the culture, used in parallel to the routine exams, allowing a diagnosis in a shorter time.(AU)

Dermatophytosis due to Microsporum nanum infection in a canine / Dermatofitose por Microsporum nanum em um canino

Miscrosporum nanum is a dermatophyte found in swine that causes non-pruritic lesions with desquamation, alopecia, and circular characteristics. M. nanum infection in dogs is rare and poorly understood in terms of its epidemiological and clinical features, and its therapeutic response. The present report describes a case of dermatophytosis due to M. nanum in a Dogo Argentino breed of dog that was used for wild boar hunting. The dermatophytosis presented with hypotrichosis, erythema, and non-pruritic desquamation in the back of the neck and chest area. The dermatophytosis was responsive to systemic treatment with itraconazole and topical (miconazole 2%) for 60 days. Thus, we conclude that the practice of hunting wild boar should be considered as a possible source of infection of M. nanum in the reported dog. The M. nanum infection showed clinical features that were similar to the lesions observed in swine, except for the absence of the circular pattern, and showed a good clinical response to the therapy. Finally, M. nanum should be considered as an etiologic agent of dermatophytosis in dogs that in some manner have had direct contact with domestic or wild swine.(AU)

O Miscrosporum nanum é um dermatófito encontrado em suídeos, promovendo lesões não pruriginosas, com características descamativas, alopécicas e circulares. A infecção de cães é rara e pouco compreendida em seus aspectos epidemiológicos, clínicos e terapêuticos. O presente relato tem por objetivo descrever um caso de dermatofitose por M. nanum em um cão Dogo Argentino, utilizado na prática de caça à javali, apresentando hipotricose, eritema e descamação não pruriginosa da região dorsal do pescoço e tórax, responsivo ao tratamento sistêmico com itraconazol, associado ao tópico (miconazol 2%), durante 60 dias. Desta forma, concluímos que a prática de caça à suínos selvagens deve ser considerada a possível fonte de infecção de M. nanum no cão relatado, o qual apresentou características clínicas semelhantes às lesões observadas em suínos, exceto pela ausência do padrão circular, com boa resposta clínica à terapia empregada. Por fim, o M. nanum deve ser considerado como agente etiológico da dermatofitose em cães que, de alguma forma, possuam contato direto com suídeos domésticos ou selvagens.(AU)

Detection of seasonal asymptomatic dermatophytes in Van cats

The Van cat is a domestic landrace found in the Van province of eastern Turkey. In this study, we aimed to determine the seasonal carriage of dermatophytes in Van cats without clinical lesions. A total of 264 hair specimens were collected from clinically healthy cats in and around the Van Province. Of these samples, 30.3% were obtained in spring, 30.6% in summer, 16.6% in autumn, and 22.3% in winter; 45.1% of samples were from male cats and the rest from female ones. Of the studied cats, 118 were younger than 1 year, 78 were 13 years old, and 68 were older than 3 years. The specimens were subjected to direct microscopic examination with 15% potassium hydroxide and cultured on Sabouraud dextrose agar and dermatophyte test medium supplemented with cycloheximide and chloramphenicol. Dermatophyte identification was carried out based on macroscopic and microscopic colony morphology, urease activities, in vitro hair perforation test, growth at 37 °C, and pigmentation on corn meal agar. Dermatophytes were isolated from 19 (7.1%) of the 264 specimens examined. The most frequently isolated fungi were Trichophyton terrestre (4.1%), followed by Microsporum gypseum (1.1%), M. nanum (1.1%), and T. mentagrophytes (0.7%), and these fungi may represent a health risk for humans in contact with clinically healthy Van cats. M. canis was not isolated from any of the specimens. Our results show no significant (p > 0.05) association between carriage of dermatophytes and the gender of cats. The carriage rate of dermatophytes was high in spring and winter, and the only possible risk factor for infection was age of the animal. (AU)

Anti-fungal potential of ozone against some dermatophytes

Dermatophytes are classified in three genera, Epidermophyton, Microsporum and Trichophyton. They have the capacity to invade keratinized tissue to produce a cutaneous infection known as dermatophytoses. This investigation was performed to study the effect of gaseous ozone and ozonized oil on three specific properties of six different dermatophytes. These properties included sporulation, mycelia leakage of sugar and nutrients and the activity of their hydrolytic enzymes. Generally, ozonized oil was found to be more efficacious than gaseous ozone. Microsporum gypseum and Microsporum canis were the most susceptible, while Trichophyton interdigitale and T. mentagrophytes were relatively resistant. The study revealed a steady decline in spore production of M. gypseum and M. canis on application of ozonated oil. An increase in leakage of electrolytes and sugar was noticed after treatment with ozonized oil in the case of M. gypseum, M. canis, T. interdigitale, T. mentagrophytes and T. rubrum. The results also revealed loss in urease, amylase, alkaline phosphatase, lipase and keratinase enzyme producing capacity of the investigated fungi.(AU)

Fatores de virulência de Nannizzia gypsea isoladas de solo de parques do município de São Paulo

Por sua característica zoonótica, a dermatofitose tem grande importância para a saúde pública. Particularmente, os dermatófitos geofílicos são insuficientemente estudados por serem considerados estritamente oportunistas; entretanto, Nannizzia gypsea (sin. Microsporum gypseum), que é geofílica, tem sido isolada por todo o mundo causando infecções no homem e animais, confirmando o potencial patogênico que os fungos geofílicos apresentam. O sucesso no estabelecimento da infecção pelos dermatófitos depende de varias proteínas e enzimas fúngicas, que são a chave na invasão e utilização do estrato córneo do hospedeiro; portanto, o estudo dos fatores de virulência envolvidos na patogenicidade desses fungos auxiliará na compreensão da epidemiologia das dermatofitoses. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi pesquisar a secreção de hemolisinas e das enzimas proteinase, fosfolipase, lipase e gelatinase em cepas de N. gypsea. Métodos: Foram testadas 21 cepas de N. gypsea isoladas do solo de 21 parques do município de São Paulo pela técnica de Vanbreuseghem. A produção das enzimas fosfolipase, proteinase e lipase foi verificada empregando-se placas de Petri com meio sólido contendo o respectivo substrato a ser degradado, respectivamente, gema de ovo, albumina sérica bovina e Tween 20. O teste foi considerado positivo quando ocorreu uma zona clara de degradação ao redor da colônia. Para a verificação da produção da enzima gelatinase foi empregado meio contendo gelatina, o qual foi distribuído em tubos; a semeadura ocorreu em picada e antes da leitura final, os tubos foram refrigerados a 4° C por 30 minutos. O teste foi considerado positivo quando houve liquefação do meio. Na prova da produção de hemolisinas empregou-se base de ágar sangue suplementada com 5% de sangue de carneiro desfibrinado; nesta prova, após a leitura de 14 dias, as placas foram incubadas a 32° C. Em cada um dos testes, após a semeadura, as placas foram incubadas por 14 dias a 25° C, realizando-se leituras aos 5, 7, 10 e 14 dias. Resultados: Todas as 21 cepas de N. gypsea produziram fosfolipase aos 14 dias, gelatinase, a partir de 10 dias, proteinase e lipase, a partir de 7 dias de incubação. Em relação à fosofolipase, a maioria das reações foi fortemente positiva para a produção da enzima. Aos 14 dias a 32° C, se verificou hemólise em 81,0% (17/21) das cepas, sendo 82,4% (14/17) de -hemólise (hemólises parciais) e 17,6% (3/17) de -hemólise (hemólise total). Todas as cepas de N. gypsea testadas produziram enzimas e/ou hemolisinas, consideradas fatores de virulência, revelando seu potencial de patogenicidade. Os intervalos de leitura ideais para a produção das enzimas fosfolipase, proteinase, lipase e gelatinase foram, respectivamente, 14, 7, 7 e 10 dias; em relação à atividade hemolítica sugere-se 14 dias com temperatura de 32° C. Conclusão: A presença de N. gypsea, com a produção de fatores de virulência em solos de parques do município de São Paulo, pode representar potencial risco de infecção aos humanos e animais que usufruem desses espaços dedicados ao lazer.

Dermatophytosis is of significant importance for public health because of its zoonotic characteristic. In particular, geophilic dermatophytes have been insufficiently studied because they are considered strictly opportunistic. However, cases of infections due to Nannizzia gypsea (syn. Microsporum gypseum), a geophilic dermatophyte, in both humans and animals have been found globally, confirming the pathogenic potential of geophilic fungi. Dermatophytoses caused by these fungi is attributed to several proteins and enzymes produced by them and also the use of the hosts stratum corneum by the fungi. Therefore, the study of virulence factors of these fungi will be helpful in understanding the epidemiology of dermatophytoses. The aim of this study was to investigate the secretion of hemolysins, proteinase, phospholipase, lipase, and gelatinase enzymes by N. gypsea strains. Twenty-one strains of N. gypsea isolated using the Vanbreuseghem technique from the soil samples of 21 parks in São Paulo, Brazil, were tested. The production of phospholipase, proteinase, and lipase was verified by culturing these strains in Petri dishes containing a solid culture medium. This medium contained the respective substrate for degradation such as egg yolk, bovine serum albumin, and Tween 20. The test was considered positive when there was a clear area of degradation around the colony. To check the production of gelatinase, a medium containing gelatin was used that was distributed in tubes and punctiform inoculation was performed. Before the final reading, the tubes were refrigerated at 4° C for 30 min. The test was considered positive when there was a liquefaction of the medium. In the hemolysin production test, blood agar base supplemented with 5% defibrinated sheep blood was used. In this test, after reading for 14 days, the plates were incubated at 32° C. In each of these tests, after inoculation, the plates were incubated for 14 days at 25° C, with readings taken at 5, 7, 10, and 14 days. All the 21 strains of N. gypsea produced phospholipase at 14 days, gelatinase from 10 days, and proteinase and lipase from 7 days of incubation. Most of the reactions were strongly positive for the production of phospholipase. At 14 days at 32° C, hemolysis was observed in 81.0% (17/21) of the strains, with -hemolysis (partial hemolysis) in 82.4% (14/17) of the strains and -hemolysis (complete hemolysis) in 17.6% (3/17) of the strains. One of the strains produced both - and -hemolysis. All the strains of N. gypsea produced enzymes and/or hemolysins, which are considered virulence factors, thus revealing their pathogenic potential. The ideal reading intervals for detecting the production of phospholipase, proteinase, lipase, and gelatinase were 14, 7, 7, and 10 days respectively. For detecting hemolytic activity, 14 days at a temperature of 32° C is recommended. The presence of virulent strains of N. gypsea in the soils of parks in São Paulo may represent a potential risk of infection to humans and animals that enjoy these spaces for leisure.

Descriptive study of onychomycosis in a hospital in São Paulo

Onychomychosis, a nail fungus infection is the most frequent nail ailment, constituting about half of all nail disorders. It can be caused by dermatophytes, non-dermatophytes, yeasts and Prothoteca spp. Methods include 5407 samples of patients with suspected onychomycosis, studied from January 2002 to December 2006, by direct mycological examination and fungi culture. The diagnosis of onychomycosis was confirmed in samples from 3822 direct mycological and/or culture positive. The diagnosis was established by culture for fungi. Among the 1.428 identified agents, the dermatophytes were responsible for 68.6% (N = 980) of cases, followed by yeasts with 27.6% (N = 394), non-dermatophytes fungi with 2.2% (N = 31), Prothoteca spp with 0.1% (N = 2), and associations with 1.5% (N = 22). Females were more affected, with 66% (N = 2527) of cases, and the most affected age group ranged from 31 to 60 years of age (median 47 years). Fungal microbiota is often changed in the world, both quantitatively and qualitatively, and is affected by several environmental factors. Thus, the periodic review of the composition of this microbiota is important to evaluate the epidemiology and thus proportion a better therapeutic response.(AU)

Dermatophytes and other associated fungi in patients attending to some hospitals in Egypt

Dermatophytes are keratinophilic fungi that infect keratinized tissues causing diseases known as dermatophytoses. Dermatophytes are classified in three genera, Epidermophyton, Microsporum, and Trichophyton. This investigation was performed to study the prevalence of dermatomycosis among 640 patients being evaluated at the dermatology clinics at Kasr elainy, El-Husein and Said Galal hospitals in Cairo and Giza between January 2005 and December 2006. The patients were checked for various diseases. Tinea capitis was the most common clinical disease followed by tinea pedis and tinea corporis. Tinea cruris and tinea unguium were the least in occurrence. Tinea versicolor also was detected. The most susceptible persons were children below 10 years followed by those aged 31–40 years. Unicellular yeast was the most common etiological agent and T. tonsuranswas the second most frequent causative agent followed by M. canis..(AU)

Dermatofitose por Microsporum gallinae em Gallus gallus domesticus: relato de caso / Dermatophytosis (ringworm) in Microsporum gallinae in Gallus gallus domesticus: case report

Dermatofitose é uma micose cutânea que pode acometer todos os animais e o homem, ocasionandolesões circulares e alopécicas com reação inflamatória. Em animais a enfermidade pode provocar diminuição depeso, inquietude devido ao prurido e depreciação no valor dos couros. Sua ocorrência e relato em avesdomésticas é escassa. Este estudo relata um caso de dermatofitose ocasionado pelo fungo Microsporum gallinaeem aves (Gallus gallus domesticus) de um galinheiro localizado na cidade de Pelotas- RS, Brasil, comrecuperação após tratamento com cetoconazol

Dermatophytosis is a skin mycosis that can affect all animals and the man causing circularlesions, ringworm, alopecia and redness. In animals the disease can cause weight decrease anxiety in animals anddepreciation in the value of hides. Its occurrence and reporting case in poultry is scarce. This study aims to reporta dermatophytosis case by Microsporum gallinae in chicken (Gallus gallus domesticus), in the Pelotas city,Brazil, with subsequent recovery after treatment with ketoconazole

Dermatofitose por Microsporum gallinae em Gallus gallus domesticus: relato de caso / Dermatophytosis (ringworm) in Microsporum gallinae in Gallus gallus domesticus: case report

Dermatofitose é uma micose cutânea que pode acometer todos os animais e o homem, ocasionandolesões circulares e alopécicas com reação inflamatória. Em animais a enfermidade pode provocar diminuição depeso, inquietude devido ao prurido e depreciação no valor dos couros. Sua ocorrência e relato em avesdomésticas é escassa. Este estudo relata um caso de dermatofitose ocasionado pelo fungo Microsporum gallinaeem aves (Gallus gallus domesticus) de um galinheiro localizado na cidade de Pelotas- RS, Brasil, comrecuperação após tratamento com cetoconazol(AU)

Dermatophytosis is a skin mycosis that can affect all animals and the man causing circularlesions, ringworm, alopecia and redness. In animals the disease can cause weight decrease anxiety in animals anddepreciation in the value of hides. Its occurrence and reporting case in poultry is scarce. This study aims to reporta dermatophytosis case by Microsporum gallinae in chicken (Gallus gallus domesticus), in the Pelotas city,Brazil, with subsequent recovery after treatment with ketoconazole(AU)

ESTUDO IN VITRO DA RESPOSTA DE MACRÓFAGOS NA INFECÇÃO COM MICROSPORUM CANIS

Os dermatófitos são fungos importantes para a saúde pública, são transmitidos entre animais e seres humanos causando zoonoses. Microsporum canis é o principal agente das dermatofitoses em cães e gatos. A imunidade inata desempenha importante papel frente à infecção contra dermatófitos; entretanto, existem poucos estudos sobre a relação entre resposta imune inata e M. canis. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade fagocítica, microbicida e imunomoduladora de macrófagos desafiados com microconídios de M. canis. Macrófagos murinos, tratados ou não com LPS (1µg/ml), foram infectados com M. canis na proporção de 0,25:1 (microconídios/macrófagos) e cultivados por 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. Após cada intervalo, as lamínulas foram coletadas e coradas por Giemsa, contando-se duzentas células e calculando-se a porcentagem de macrófagos que internalizaram pelo menos um microconídio. O sobrenadante foi coletado para medir os níveis de citocinas e óxido nítrico, e checou-se a viabilidade celular e o perfil dos macrófagos durante a infecção. A porcentagem de fagocitose aumentou no transcorrer do tempo, atingindo o máximo às 6 h. A porcentagem de macrófagos não estimulados com LPS que fagocitaram microconídios foi de 28,0%, 33,5%, 62,5% e 71,5%, respectivamente em 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. Nos macrófagos estimulados com LPS esta porcentagem foi de 34,5%, 47,5%, 67,0% e 74,0%, respectivamente nos intervalos de 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. A produção de óxido nítrico foi similar em ambos, macrófagos estimulados ou não com LPS. Níveis de TNF aumentaram no transcorrer do tempo em macrófagos desafiados com M. canis estimulados ou não com LPS, quando comparados com macrófagos não infectados (p<0,05). Níveis superiores de IL-6 foram produzidos por macrófagos estimulados com LPS e infectados com M. canis no intervalo de 1 h (p<0,05). A viabilidade celular diminuiu com o tempo, com o pico de morte dos macrófagos às 6 h. O teste de microbicidade mostrou que, mesmo após a fagocitose, os microconídios de M. canis permaneciam viáveis dentro dos macrófagos. Os macrófagos mostraram um perfil M2, o qual produz uma tendência de resposta anti-inflamatória que favorece o crescimento fúngico. Macrófagos apresentaram alta atividade fagocítica frente o M. canis, a qual aumentou quando previamente estimulados com LPS. Estímulo com LPS também aumentou a produção de citocinas, sugerindo uma modulação na resposta à infecção. O aumento na produção das citocinas pró-inflamatórias TNF- e IL-6 que são importantes no recrutamento de novas células fagocíticas e na resolução da infecção, foi observado nos macrófagos desafiados com M. canis. Os resultados sugerem que, apesar dos macrófagos apresentarem atividade fagocítica e produção de citocinas quando desafiados com M. canis, sua viabilidade e a atividade microbicida são prejudicadas, não sendo capazes de controlar a infecção.

Dermatophytes are important fungi for public health, as they are transmitted between animals and humans causing zoonoses. Microsporum canis is the main agent of dermatophytosis in dogs and cats. Innate immunity plays an important role in the establishment of dermatophytic infection; however, there are few studies on the relationship between innate immune response and M. canis. Thus, the aim of this work was to evaluate the phagocytic, microbicidal and immunomodulatory capacity of macrophages challenged with M. canis microconidia. Murine macrophages, treated or not with LPS (1µg /ml), were infected with M. canis in a ratio of 0.25:1 (microconidia/macrophages) and incubated for 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h. After each interval, the coverslips were collected and stained by Giemsa, counting two hundred cells and calculating the percentage of macrophages that internalized at least one microconidium. The supernatant was collected to measure cytokine and nitric oxide levels, and cell viability and macrophage profile during infection were checked. The percentage of phagocytosis increased over time, peaking at 6 h. The percentage of non-stimulated LPS macrophages that phagocytosed microconidia was 28.0%, 33.5%, 62.5%, and 71.5%, respectively at 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h. In LPS-stimulated macrophages, these percentages were 34.5%, 47.5%, 67.0%, and 74.0%, respectively at 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h intervals. Nitric oxide production was similar in both macrophages stimulated or not with LPS. TNF- levels increased over time in macrophages challenged with M. canis stimulated or not with LPS when compared to uninfected macrophages (p <0.05). Higher levels of IL-6 were produced by LPS-stimulated and M. canis-infected macrophages within 1 h (p <0.05). Cell viability decreased over time with macrophages death peak at 6 h. Microbicity test showed that even after phagocytosis, M. canis microconidia remained viable within the macrophages. Macrophages showed an M2 profile, which produces a tendency of anti-inflammatory response that favors fungal growth. Macrophages showed high phagocytic activity against M. canis, which increased when previously stimulated with LPS. LPS stimulation also increased cytokine production, suggesting a modulation in the response to infection. Increased production of pro-inflammatory cytokines TNF- and IL-6, which are important in recruiting new phagocytic cells and resolving the infection, was observed in macrophages challenged with M. canis. The results suggest that, although macrophages present phagocytic activity and cytokine production when challenged with M. canis, their viability and microbicidal activity are impaired and unable to control infection.

Avaliação da virulência in vitro de isolados clínicos e ambientais de fungos dermatófitos

Os dermatófitos constituem grupo de fungos que requerem queratina para crescimento, colinizando a pele e anexos de animais e do homem. Embora não sejam patógenos obrigatórios, Microsporum gypseum, M. canis e Trichophytonspp. relacionam-se a infecções em animais, causando classicamente lesões circulares na pele. Embora as dermatofitoses por dermatófitos geofílicos ocorram em menor grau, M. gypseum é a principal espécie envolvida e estes quadros devem ser considerados. Dentre os fatores que fazem com que os dermatófitos, tenham capacidade de infecção para animais, destacam-se enzimas como DNase, gelatinase, lipase, queratinase, elastase e colagenase, que foram avaliadas neste trabalho. O hábito dos animais domésticos permanecerem em contato íntimo com a terra, em quintais, vias públicas e parques, justifica o estudo de sua patogenicidade e a diferenciação do perfil enzimático de isolados clínicos e ambientais de dermatófitos, o que pode colaborar para estratégias de controle e prevenção da dermatofitose. Nossa pesquisa tem como objetivos o isolamento clínico e ambiental de fungos dermatófitos, avaliando a produção de DNase, lipase, gelatinase, queratinase, elastase e colagenase, enzimas relacionadas à virulência dos mesmos e a comparação da capacidade de produção dessas enzimas relacionadas à patogenicidade entre as cepas clínicas e ambientais. As cepas ambientais foram obtidas através da técnica descrita por Vanbreuseghem (1952), que emprega pelos estéreis de equino misturados ao solo umedecido, sendo utilizadas amostras de solo oriundas de diferentes locais do Brasil. As amostras clínicas foram oriundas de pelos e crostas de animais enviadas ao Serviço de Diagnóstico Microbiológico Veterinário/UFRRJ e semeadas em meio Mycosel®. A avaliação enzimática dos dermatófitos foi feita por leituras de absorbância em espectrofotômetro (colagenase, elastase e queratinase), formação de halo de degradação em placas (DNase e lipase) e liquefação em tubos (gelatinase). O projeto foi protocolado sob o CEUA nº 1395270617, sob a responsabilidade do professor Francisco de Assis Baroni e teve grande parcela custeada pelo próprio laboratório no qual foram desenvolvidas as atividades, uma vez que o mesmo conta com boa parte dos materiais e equipamentos requeridos durante a pesquisa.

The dermatophytes are a group of fungi that require keratin for growth, keratinizing the skin and attachments of animals and man. Although not obligatory pathogens, Microsporum gypseum, M. canis and Trichophytonspp. are related to infections in animals, causing classic circular lesions on the skin. Although dermatophytosis by geophilic dermatophytes occurs to a lesser extent, M. gypseum is the main species involved and these frames should be considered. Among the factors that cause dermatophytes to be able to infect animals, we highlight enzymes such as DNase, gelatinase, lipase, keratinase, elastase and collagenase, which were evaluated in this study. The habit of domestic animals remain in close contact with the land, in backyards, public roads and parks, justifies the study of their pathogenicity and the differentiation of the enzymatic profile of clinical and environmental isolates of dermatophytes, which may contribute to control strategies and prevention of dermatophytosis. Our research aims at the clinical and environmental isolation of dermatophyte fungi, evaluating the production of DNase, lipase, gelatinase, keratinase, elastase and collagenase, enzymes related to their virulence and the comparison of the production capacity of these enzymes related to the pathogenicity between clinical and environmental strains. The environmental strains were obtained through the technique described by Vanbreuseghem (1952), which uses the equine sterility mixed with the moist soil, using soil samples from different Brazilian sites. The clinical specimens were obtained from animal hairs and crusts sent to the Veterinary Microbiological Diagnostic Service / UFRRJ and sown in Mycosel ® medium. The enzymatic evaluation of the dermatophytes was performed by spectrophotometer (collagenase, elastase and keratinase) absorbance, plaque degradation halo formation (DNase and lipase) and liquefaction in tubes (gelatinase). The project was filed under CEUA nº 1395270617, under the responsibility of professor Francisco de Assis Baroni and had a large portion funded by the laboratory in which the activities were developed, since it has a good part of the materials and equipment required during the search.

Potencial antifúngico de Olea europaea frente a fungos leveduriformes e filamentosos

A Oliveira (Olea europaea L.) é a única espécie da família das Oleaceae que produz fruto comestível, é considerado um dos plantios mais antigos, com sua origem relatada primordialmente na Palestina. Estudos recentes revelam que o azeite e seus compostos têm comprovada eficácia na medicina para tratamentos de doenças crônicas, sendo eficaz também em enfermidades cardiovasculares, diabetes, possuindo ação anticancerígena, anti-inflamatória, anticarcinogênica, antinociceptiva, antioxidante e citoprotetora, e tanto no azeite quanto em extratos de folhas e ramos da planta, sua ação frente a micro-organismos já foi comprovada através de estudos in vitro. Estudos têm revelado cepas resistentes a antifúngicos tradicionalmente utilizados na clínica, nessa perspectiva e com propósito de avaliar a atuação dos extratos provenientes da oliveira frente a fungos patogênicos e/ou oportunistas, delineou-se esta proposta com a intenção de obter-se um extrato fungicida e/ou fungistático, testando a citotoxicidade dos extratos em bovine kidney cells (MDBK) e também a presença de compostos fenólicos através da CLAE. Na possibilidade de novas alternativas e na tentativa da obtenção de produtos efetivos, foram obtidos extratos aquosos do bagaço para utilização em teste de sensibilidade in vitro a partir da microdiluição em caldo conforme proposto pelo CLSI de acordo com os documentos M27-A3 e M38-A2, frente a fungos do gênero Candida spp., Complexo Sporothrix schenckii e dermatófitos. Segundo a metodologia desenvolvida obteve-se os seguintes resultados, a INF 10 não foi efetiva para nenhum dos isolados e cepas padrões testados, assim como as variedades arbequina, arbosana, frontoio e manzanilla não revelaram presença de oleuropeína e obtiveram baixas concentrações de hidroxitirosol na sua composição. Os extratos de DEC 10 foram efetivos para duas cepas padrões de Candida albicans, inibindo a partir de concentrações de 3,12 mg/mL, porém não apresentou inibição em isolados clínicos de Candida spp., dermatófitos e Sporothrix spp. Os extratos apresentaram taxas de 15 a 50% de viabilidade celular a partir do teste de toxicidade dos extratos de concentração de 25 mg/mL, que torna o extratos viável por não apresentar intensa toxicidade. Nas condições trabalhadas, permite-se concluir que os extratos não apresentaram os resultados esperados como antimicrobiano, não apresentaram citotoxicidade e algumas variedades revelaram presença de oleuropeína.

Oliveira (Olea europaea L.) is the only species of the Oleaceae family that produces edible fruit, is considered one of the oldest tree, with origin reported primarily in Palestine. Recent studies have shown that olive oil and its compounds have effect in the treatment of chronic diseases. Its also effective in cardiovascular diseases, diabetes, anticancer, anti-inflammatory, anticarcinogenic, antinociceptive, antioxidant and cytoprotective actions, and in extracts of leaves and part of the plant, their action against microorganisms has already been proven through in vitro studies. Studies revealed antifungal resistant against clinical strains, with the purpose of evaluating the performance of extracts from the olive tree against pathogenic and/or opportunistic fungi, this proposal was outlined with the intention of obtaining a fungicide extract and/or fungistatic, testing the cytotoxicity of extracts in bovine kidney cells (MDBK) and also the presence of phenolic compounds through HPLC. With the possibility of new alternatives and in the attempt to obtain effective products, aqueous extracts of the bagasse were obtained for use in an in vitro sensitivity test from the microdilution in broth as proposed by CLSI according to documents M27-A3 and M38-A2 , against fungi of the genus Candida spp., Sporothrix schenckii Complex and dermatophytes. According to the methodology developed, the following results were obtained: INF 10' was not effective for any of the isolates and strains tested, as the arbequina, arbosana, frontoio and manzanilla varieties didnt show presence of oleuropein and obtained low concentrations of hydroxytyrosol their composition. The DEC 10' extracts were effective for two standard strains of Candida albicans, inhibiting from concentrations of 3.12 mg/mL, but did not present inhibition in clinical isolates of Candida spp., Dermatophytes and Sporothrix spp. The extracts presented rates of 15 to 50% of cell viability from the toxicity test in extracts of concentration with 25 mg/mL, which makes the extracts viable because it doesnt present intense toxicity. Under the conditions studied, its possible to conclude that the extracts did not present the expected results as antimicrobial, didnt present cytotoxicity and some varieties showed the presence of oleuropein.

ESTABELECIMENTO DE BIOFILME DE DERMATÓFITOS EM MODELO EX VIVO USANDO PELO DE CÃO E GATO: UMA ESTRATÉGIA PARA ANÁLISE DE VIRULÊNCIA

Dermatofitose é a micose superficial de maior incidência em animais, sendo ocasionada por fungos cujo principal atributo patogênico é a capacidade de utilizar a queratina como substrato nutricional. A sua importância clínica e epidemiológica se dá devido ao fato de ser uma dermatopatia cosmopolita, infecciosa, contagiosa e zoonótica. Diversos fatores de virulência estão envolvidos na patogenicidade dessa doença, dos quais a formação de biofilme fúngico está diretamente relacionada com a dificuldade de tratamento e cronicidade. Para o estudo da interação parasita/hospedeiro, diversos modelos experimentais ex vivo, utilizando materiais biológicos viáveis, estão sendo desenvolvidos com o intuito de diminuir o uso de animais em experimentos. Portanto, o objetivo desse estudo foi estabelecer um modelo ex vivo para formação do biofilme de dermatófitos, utilizando pelos de cães da raça Yorkshire Terrier e gatos da raça Persa. Para esta finalidade, foram utilizadas 12 cepas de Microsporum canis, 7 M. gypseum, 6 Trichophyton mentagrophytes e 5 T. tonsurans. Em um primeiro instante, foi avaliada a produção do biofilme in vitro, e a seguir, fez-se a análise no modelo ex vivo, no qual foi detectada a formação de matriz extracelular polimérica, pela coloração vermelho congo. Em um segundo momento, três cepas de cada espécie foram selecionadas para análise do modelo ex vivo, por meio da microscopia confocal e de varredura a laser. Este estudo demonstrou que todas as espécies de dermatófitos testadas foram capazes de formar biofilme in vitro, sendo o melhor resultado observado com T. mentagrophytes, seguido de T. tonsurans, M. canis e M. gypseum. Este resultado foi corroborado com a observação de matriz extracelular fúngica no modelo ex vivo, para todas as espécies. Através da microscopia confocal observou-se hifas, pelos perfurados, colonização da haste pilosa e abundante formação de conídios. Na microscopia eletrônica de varredura foi observado malhas de hifas envoltas em matriz extracelular fúngica, macro e microconídios e superfícies rugosas com canais de água do biofilme bem definidos. O presente estudo demonstrou um modelo ex vivo utilizando pelos de cães e gatos viável para pesquisas envolvendo a formação de biofilme por dermatófitos. Esse modelo poderá potencialmente substituir o uso de animais em pesquisas nesse campo, pois proporciona um ambiente favorável para a formação de biofilme por dermatófitos.

Dermatophytosis is the superficial mycosis with highest incidence in animals. It is caused by fungi whose main pathogenic attribute is the ability to use keratin as a nutritional substrate. Its clinical and epidemiological importance is due to the fact that it is a cosmopolitan, infectious, contagious and zoonotic dermatopathy. Several virulence factors are involved in the pathogenicity of this disease, of which fungal biofilm formation is directly related to the difficulty of treatment and chronicity. For the study of parasite/host interaction, several ex vivo experimental models using viable biological materials have been developed for the purpose of reducing the use of animals in experiments. Therefore, the objective of this study was to establish an ex vivo model for biofilm formation of dermatophytes using hairs from Yorkshire Terrier dogs and Persian cats. For this purpose, 12 strains of Microsporum canis, 7 of M. gypseum, 6 of Trichophyton mentagrophytes and 5 of T. tonsurans were used. At first, the biofilm production was evaluated in vitro, followed by analysis according to the ex vivo model, in which the formation of extracellular polymer matrix was detected through Congo red staining. In a second moment, three strains of each species were selected for analysis of the ex vivo model, through confocal microscopy and laser scanning. This study demonstrated that all species of dermatophytes tested were able to form biofilms in vitro, with the best result being observed with T. mentagrophytes, followed by T. tonsurans, M. canis and M. gypseum. These results were corroborated by the observation of fungal extracellular matrices in the ex vivo model, for all species. By confocal microscopy, hyphae were observed through perforation, colonization of the hair shaft and abundant formation of conidia. Scanning electron microscopy showed hyphaes enveloped in the fungal extracellular matrices, macroconidia and microconidia, and rough surfaces with well-defined biofilm water channels. The present study demonstrated an ex vivo model using dog and cat hair suitable for research involving the biofilm formation by dermatophytes. This model potentially replaces the use of research animals in this field research, as it provides a favorable environment for the biofilm-forming by dermatophytes.